Nr kat. IR094

FLEX
Monoclonal Rabbit
Anti-Human
Cytokeratin 8/18
Clone EP17/EP30
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR094
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, Ready-to-Use (Link), są
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w urządzeniach Autostainer Link. Przeciwciała przeciwko
cytokeratynie 8/18 mogą być przydatne w identyfikacji guzów pochodzenia nabłonkowego (1). Interpretacja
kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem
odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z
uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Keratyna 8/18 (K8/18) (1), CK8/18 (2).
Streszczenie
i informacje ogólne
Cytokeratyna 8/18 (CK8/18) naleŜy do rodziny filamentów pośrednich, zróŜnicowanej grupy białek
heteropolimerycznych kodowanych przez 54 róŜne geny. Polipeptydy cytokeratyny (CK) klasyfikuje się do
podrodzin polipeptydów kwaśnych (typ I) i obojętno-zasadowych (typ II). Polipeptydy typu I i II parują się ze sobą,
tworząc dojrzały heteropolimer tetrameryczny. CK18 to białko o masie 45 kDa naleŜące do podrodziny
cytokeratyn kwaśnych typu I, które zwykle łączy się z cytokeratyną CK8 typu II o masie 54 kDa. Razem tworzą
one jedną z cytokeratyn niskocząsteczkowych (LMW-CK). CK8/18 ulega ekspresji w nabłonku prostym
jednowarstwowym, komórkach podstawnych i powierzchniowych nabłonka przejściowego, komórkach światła
kanalików/komórkach wydzielniczych nabłonka złoŜonego, międzybłonku oraz w niektórych typach komórek
mezenchymalnych (1). W danej komórce ekspresji moŜe ulegać wielu przedstawicieli rodziny cytokeratyn i są oni
cechą charakterystyczną dla typu komórki oraz stanu jej zróŜnicowania (1). CK8/18 ulega ekspresji w komórkach
niemal wszystkich nowotworów pochodzenia nabłonkowego i międzybłoniaków (2), dlatego przeciwciała
przeciwko CK8/18 są uŜyteczną wskazówką w klasyfikacji guzów nieznanego pochodzenia i raków słabo
zróŜnicowanych (1).
Przeciwciała przeciwko CK8/18 wykazują odczyn cytoplazmatyczny i/lub błonowy. Słaby odczyn ogniskowy moŜe
równieŜ występować w przypadku guzów mezenchymalnych, w tym mięśniaka gładkokomórkowego,
mięśniakomięsaka
prąŜkowanokomórkowego,
czerniaka
złośliwego,
nerwiaka,
mięsaka
Ewinga,
desmoplastycznego nowotworu drobnokomórkowego, raka płaskonabłonkowego oraz chłoniaka (3, 4).
Patrz dokument General Instructions for Immunohistochemical Staining (Ogólne instrukcje wykonywania
odczynów immunohistochemicznych) firmy Dako lub instrukcje do systemu detekcji IHC.
Dostarczony
odczynnik
Mieszanina dwóch króliczych przeciwciał monoklonalnych jest dostarczana w postaci nadsączu hodowli
komórkowej w buforze Tris-HCl o stęŜeniu 0,05 mol/L z azydkiem sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L, pH 7,2. Produkt
zawiera białko stabilizujące.
Klon: EP17/EP30. Izotyp: królicze IgG.
Immunogeny
CK8: Syntetyczny peptyd odpowiadający resztom C-końcowego fragmentu ludzkiego białka cytokeratyny 8.
CK18: Ludzkie białko cytokeratyny 18 wyizolowane z komórek HT-29.
Swoistość
CK8/18 jest mieszaniną dwóch przeciwciał monoklonalnych. W badaniach Western blot lizatów komórek A431
przeciwciało przeciwko CK8, klon EP17, rozpoznaje główny prąŜek odpowiadający masie cząsteczkowej 52 kDa,
zgodnej z oczekiwaną masą cząsteczkową CK8, a przeciwciało przeciwko CK18, klon EP30, rozpoznaje prąŜek
odpowiadający masie cząsteczkowej 45 kDa, zgodnej z oczekiwaną masą cząsteczkową CK18.
(124426-002)
P02832PL_02_IR094/2013.12 s. 1/4
Środki ostroŜności
Przechowywanie
Skrócona instrukcja
uŜytkownika
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny w czystej postaci związek chemiczny – azydek sodu (NaN3).
Azydek sodu zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydków metali w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego
na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik powinien
zweryfikować te warunki. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne.
W przypadku uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, i gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Krok
Komentarze
Utrwalanie
Obróbka wstępna
Formalina
Odczynnik EnVision FLEX™, High pH
(nr kat. K8000/ K8004)
ND
20 min HIER, 3 w 1 z uŜyciem PT Link
i PT Link Rinse Station
Rozcieńczenie
Bufor do
rozcieńczania
Kontrola ujemna
Wizualizacja
Produkt gotowy do uŜycia
Produkt rozcieńczony fabrycznie
Inkubacja 20 min
ND
FLEX Negative Control, Rabbit (nr kat. IR600)
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. K8000)
Inkubacja 20 min
Inkubacja 20 min, inkubacja w
odczynniku DAB+ 2x5 min
Barwnik
kontrastowy
Tkanka kontrolna
Odczynnik EnVision™ FLEX Hematoxylin
(nr kat. K8008/K8018)
Wątroba prawidłowa
Inkubacja 5 min
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zaleca się stosowanie w celu
uzyskania lepszego przylegania
skrawków tkankowych do szkiełek.
Zatapianie
preparatu
Wymagane niewodne, trwałe zatapianie
preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia
skrawki muszą zostać odwodnione,
oczyszczone i zatopione w środku do
trwałego zatapiania.
Oprzyrządowanie
Autostainer Link 48
NaleŜy stosować fiolki dostosowane
do aparatu (nr kat. SK200-SK203)
Odczyn cytoplazmatyczny/błonowy
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje
przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystywane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie
i zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się po przeprowadzeniu na
tkankach wstępnej obróbki HIER przy uŜyciu rozcieńczonego roztworu EnVision™ FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Odparafinowanie, nawodnienie i cieplne odmaskowanie
determinanty antygenowej (HIER) moŜna przeprowadzić z uŜyciem aparatu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101).
Szczegółowe informacje zawiera instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link (PT Link User Guide). W aparacie PT
Link naleŜy ustawić następujące parametry pomiarowe: temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i
czas odmaskowania determinanty antygenowej: 97°C pr zez 20 minut (±1 min); schłodzenie do 65°C. Usun ąć
statyw z preparatami ze zbiornika PT i natychmiast zanurzyć preparaty w naczyniu/zbiorniku (np. PT Link Rinse
Station, nr kat. PT109) zawierającym rozcieńczony bufor EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (nr kat. K8007) o
temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1–5 minut.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą zostać
odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania.
(124426-002)
P02832PL_02_IR094/2013.12 s. 2/4
Procedura barwienia
Wizualizacja: Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (nr kat. K8000/K8010) przy
zastosowaniu trwającego 20 minut okresu inkubacji w temperaturze pokojowej. Postępować zgodnie z procedurą
dostarczoną z wybranymi systemami do wizualizacji.
Program: w systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana
objętość uŜytego odczynnika to 1 x 200 µl lub 2 x 150 µl na szkiełko z preparatem. Szczegółowe informacje
dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w podręczniku uŜytkownika
urządzenia Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer Link, naleŜy
skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Instalator oprogramowania Autostainer Link jest
dostępny do pobrania ze strony internetowej www.dako.com\Installer. Ten program instalacyjny zaktualizuje
oprogramowanie DakoLink o dane protokołu i odczynników dla przeciwciał Anti-Human CK8/18, Clone
EP17/EP30. Skrócona nazwa protokołu dla tego przeciwciała to „CK8/18”. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy
przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Barwienie kontrastowe: zalecanym barwnikiem kontrastowym jest EnVision FLEX Hematoxylin (Link)
(nr kat. K8008/K8018). W celu uzyskania optymalnych wyników zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego
środka do zatapiania.
Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać kontrole
pozytywne i negatywne z uŜyciem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna powinna obejmować
prawidłową wątrobę, a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka działania”. Zalecana kontrola negatywna to FLEX Negative Control, Rabbit (Link)
(nr kat. IR600).
Interpretacja
wybarwienia
Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny/błonowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe:
Komórki nabłonka wykazują odczyn cytoplazmatyczny i/lub błonowy o nasileniu od umiarkowanego do silnego
(5). NaleŜy zwrócić uwagę, Ŝe w obrębie tkanek limfoidalnych moŜliwe jest wystąpienie barwienia komórek
siateczki.
(124426-002)
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn
dodatni
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Nadnercza (3)
Szpik kostny (3)
Gruczoły sutkowe (3)
3/3
0/3
3/3
Trzustka (3)
Przytarczyce (3)
Przysadka mózgowa (3)
MóŜdŜek (3)
0/3
Gruczoł krokowy (3)
3/3
Mózgowie (3)
0/3
Ślinianki (3)
3/3
Szyjka macicy (3)
1/3
Mięśnie szkieletowe (3)
0/3
Jelito grube (3)
3/3
Skóra (3)
3/3
Przełyk (3)
3/3
Jelito cienkie (3)
3/3
Serce (3)
0/3
Śledziona (3)
3/3
Nerki (3)
3/3
śołądek (3)
3/3
Wątroba (3)
3/3
Jądra (3)
2/3
Składniki
tkankowe
wykazujące
odczyn dodatni
3/3
3/3
1/3
Płuca (3)
3/3
Grasica (3)
3/3
Komórki międzybłonka (3)
2/3
Tarczyca (3)
3/3
Nerwy obwodowe (3)
0/3
Migdałki (3)
3/3
Jajniki (3)
3/3
Macica (3)
1/3
P02832PL_02_IR094/2013.12 s. 3/4
Tkanki nieprawidłowe:
Komórki nabłonka wykazują odczyn cytoplazmatyczny i/lub błonowy o nasileniu od umiarkowanego do silnego
(41/56) (6) .
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn
dodatni
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Składniki
tkankowe
wykazujące
odczyn dodatni
0/3
Rak wątrobowokomórkowy
(3)
Rak nerkowokomórkowy (3)
Rak brodawkowaty nerek (3)
3/3
Czerniak (3)
3/3
3/3
1/3
0/1
Rak gruczołowy płuc(2)
2/2
Rak płaskonabłonkowy płuc
(1)
Rak drobnokomórkowy płuc
(3)
Rak gruczołowy Ŝołądka (3)
1/1
Rak niezróŜnicowany (3)
Mięśniakomięsak
gładkokomórkowy (1)
Mięśniakomięsak
prąŜkowanokomórkowy (1)
Rakowiak jelita (2)
3/3
Rak jajnika (2)
2/2
3/3
Tkanka włóknista (2)
0/2
Rak gruczołowy trzustki (3)
3/3
Potworniak — dojrzały (1)
0/1
Rak brodawkowaty tarczycy
(3)
Rak przewodowy sutka (3)
3/3
Potworniak — niedojrzały (1)
0/1
3/3
1/2
Rak zrazikowy sutka (3)
3/3
0/2
Rak gruczołowy gruczołu
krokowego (3)
Rak gruczołowy okręŜnicy
(3)
2/3
Mięśniak gładkokomórkowy
(2)
Chłoniak rozlany z duŜych
komórek B (2)
Chłoniak z komórek T (2)
3/3
Chłoniak grudkowy (2)
0/2
0/1
2/2
0/2
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol 2008;129:
705-33.
Dabbs DJ. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia,PA: Churchill Livingstone, 2002.
Adams H, Schmid P, Dirnhofer S, Tzankov A. Cytokeratin expression in hematological neoplasms: A tissue
microarray study on 866 lymphoma and leukemia cases. Pathol Res Pract 2008;204:569-73.
Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis (review). Semin Cancer Biol 1990;
1:165-79.
Yu J. Report of Normal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human
Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19056.
Yu J. Report of Cancer Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human
Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19756.
Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30, są produkowane przez firmę
Epitomics Inc. przy uŜyciu własnej technologii produkcji króliczych przeciwciał monoklonalnych chronionej patentami nr
5,675,063 i 7,402,409.
Wydanie 04/14
(124426-002)
P02832PL_02_IR094/2013.12 s. 4/4