FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70 Klon 2F3.2 Ready

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
ZAP-70
Klon 2F3.2
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR653
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70, klon 2F3.2, Ready-to-Use, (Link) jest przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji ZAP-70
w pewnym podzbiorze przewlekłych białaczek limfatycznych (1, 2). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku
barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
ZAP-70 (białko o masie 70 kDa skojarzone z receptorem ζ) to kinaza tyrozynowa z rodziny Syk odgrywająca
krytyczną rolę w wyzwalaniu kaskady sygnalizacyjnej w odpowiedzi na stymulację receptorów komórek T (1).
Ekspresja tego białka zachodzi głównie w komórkach T i naturalnych komórkach cytotoksycznych (NK) (1-6), jednak
jest ono równieŜ wykrywalne w komórkach tucznych i bazofilach (2). Ekspresja ZAP-70 zachodzi równieŜ w
prawidłowych komórkach pro/pre B, ale nie w prawidłowych dojrzałych komórkach B (4).
Ekspresja ZAP-70 zachodzi w podzbiorze komórek B przewlekłych białaczek limfocytowych (CLL) ściśle
skojarzonym z niezmutowaną konfiguracją genów (1-3, 5, 6) obszaru zmiennego łańcucha cięŜkiego Ig (IgVH). Nie
jest znana dokładna funkcja ZAP-70 w tym podzbiorze komórek B przewlekłych białaczek limfocytowych (CLL).
Niektóre dane wskazują, Ŝe ekspresja ZAP-70 w komórkach białaczki CLL umoŜliwia bardziej skuteczną
sygnalizację IgM w komórkach B białaczki CLL, co wyjaśniałoby mechanizm postępowania choroby (5). Ponadto
ekspresja ZAP-70 zachodzi w niektórych innych nowotworach z komórek B (1, 6) i z komórek T (6).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: 2F3.2. Isotyp: IgG2a, kappa.
Immunogen
Rekombinowane białko ZAP-70 zawierające reszty 1–254 i domeny SH2 ludzkiego białka ZAP-70 (7).
Swoistość
W teście Western blot lizatów całych komórek jednojądrzastych prawidłowej krwi obwodowej przeciwciała znakowały
prąŜek odpowiadający białku ZAP-70 (2). W teście Western blot oczyszczonych lizatów całych komórek białaczki
CD19-dodatnich z CCL bez mutacji Ig i z mutacją Ig przeciwciała znakowały prąŜek odpowiadający białku ZAP-70 w
próbkach CCL bez mutacji Ig, natomiast w próbkach CLL z mutacją Ig nie stwierdzono prąŜka (2). W teście Western
blot lizatów komórek Jurkat (linia komórkowa białaczki limfoblastycznej z komórek T) przeciwciała znakowały prąŜek
odpowiadający białku o masie cząsteczkowej 70 kDa (6). W teście Western blot lizatów komórek A431 (linia
komórkowa raka) nie zaobserwowano prąŜka (6).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(117975-002)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
IR653/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą
zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować
się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu
jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka
wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008).
Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse
(Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują zarówno wzór odczynu cytoplazmatycznego, jak i jądrowego.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: Przeciwciała dają odczyn w komórkach T tkanek limfoidalnych, takich jak migdałki i tkanki
limfoidalne związane z jelitami, jak równieŜ w komórkach innych badanych tkanek, w tym okręŜnicy, nerek, wątroby,
trzustki i gruczołu krokowego. Sporadycznie przeciwciała dają odczyn w pęcherzykach cytoplazmatycznych
proksymalnych kanalików nerek. Niekiedy występuje odczyn w cytoplazmie komórek nerwowych móŜdŜku i komórek
nerwów obwodowych w okręŜnicy. Sporadycznie występuje takŜe odczyn w pęcherzykach cytoplazmatycznych
hepatocytów i komórek nabłonka dróg Ŝółciowych w wątrobie oraz w wyspach i przewodach trzustkowych. Oprócz
komórek T przeciwciała dają wyraźny odczyn z cytoplazmą komórek nabłonka kanalików dystalnych i zbiorczych w
nerkach. Izolowane komórki T w ośrodkach rozmnaŜania migdałków wykazują odczyn umiarkowany do silnego,
natomiast stłoczone komórki T w strefie T wykazują odczyn słaby do umiarkowanego.
Tkanki patologiczne: W nowotworach z komórek B przeciwciała dawały odczyn w nowotworowych komórkach B w
34/52 przypadki CLL, 9/29 przypadków chłoniaka Burkitta, 2/7 przypadków chłoniaka limfoblastycznego, 3/36
przypadków chłoniaka z komórek płaszcza, 1/23 przypadki chłoniaka strefy brzeŜnej i 1/45 przypadków chłoniaka
rozlanego z duŜych limfocytów B. Nie stwierdzono odczynu w komórkach B w 19 przypadkach chłoniaka typu
grudkowego ani w 14 przypadkach chłoniaka Hodgkina (1). W innym badaniu przeciwciała dawały odczyn z
nowotworowymi komórkami B w podzbiorze przypadków CLL — zarówno w bioptatach szpiku kostnego, jak i w
skrawkach z aspiratów, a takŜe w komórkach jednojądrzastych w zatopionych w parafinie preparatach odwirowanej
krwi obwodowej (2). W badaniu róŜnych nowotworów złośliwych pochodzenia krwiotwórczego przeciwciała dawały
odczyn z nowotworowymi komórkami T w 45/62 przypadki złośliwych nowotworów z komórek T, ale w 0/41
przypadków ostrej białaczki szpikowej. Przeciwciała dawały odczyn w komórkach Hodgkina tylko w 2/136
przypadków chłoniaka Hodgkina. Spośród złośliwych nowotworów z komórek B przeciwciała dawały odczyn w 12/26
przypadków chłoniaka limfocytarnego drobnokomórkowego, 4/76 przypadków chłoniaka z rozlanego z duŜych
komórek B, 1/6 przypadków chłoniaka z komórek płaszcza, 7/24 przypadki ostrej białaczki limfoblastycznej z
komórek B/chłoniaka limfoblastycznego. Przeciwciała nie dawały odczynu w nowotworowych komórkach B w 22
przypadkach chłoniaka strefy brzeŜnej, 40 przypadkach chłoniaka typu grudkowego, 6 przypadkach chłoniaka
Burkitta, ani w 5 przypadkach chłoniaka limfoplazmatycznego (6). We wszystkich wymienionych badaniach
przeciwciała dawały odczyn w prawidłowych komórkach T (1, 2, 6).
(117975-002)
Dako Denmark A/S
IR653/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Carreras J, Villamor N, Colomo L, Moreno C, Cajal S, Crespo M, et al. Immunohistochemical analysis of
ZAP70 expression in B-cell lymphoid neoplasms. J Pathol 2005;205;507-13.
Wiestner A, Rosenwald A, Barry TS, Wright G, Davis RE, Henrickson SE, et al. ZAP-70 expression identifies a
chronic lymphocytic leukemia subtype with unmutated immunoglobulin genes, inferior clinical outcome, and
distinct gene expression profile. Blood 2003;101:4944-51.
Keating MJ, Chiorazzi N, Messmer B, Damle RN, Allen SL, Rai KR, et al. Biology and Treatment of chronic
lymphocytic leukemia [review]. Hematology 2003:153-75.
Crespo M, Villamor N, Giné E, Muntañola A, Colomer D, Marafioti T, et al. ZAP-70 expression in normal
pro/pre B cells, mature B cells, and in B cell acute lymphoblastic leukemia. Clin. Cancer Res. 2006;12:726-34.
Chen L, Apgar J, Huynh L, Dicker F, Giago-McGahan T, Rassenti L, et al. ZAP-70 directly enhances IgM
signaling in chronic lymphocytic leukemia. Blood 2005;105:2036-41.
Sup SJ, Domiati-Saad R, Kelley TW, Steinle R, Zhao X, Hsi ED. ZAP-70 expression in B-cell hematologic
malignancy is not limited to CLL/SLL. Am J Clin Pathol 2004;122:582-7.
Iwashima M, Irving BA, van Oers NSC, Chan AC, Weiss A. Sequential interactions of the TCR with two distinct
cytoplasmic tyrosine kinases. Science 1994;263:1136-9.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117975-002)
Dako Denmark A/S
IR653/PL/MNI/2009.12.04 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17