docXIII. Gramujemne pałeczki auksotroficzne
download 
Reklamacja Transkrypt
XIII. Gramujemne pałeczki auksotroficzne
XIII. Gramujemne pałeczki auksotroficzne Ćwiczenie 1. Wykonanie i ocena preparatu mikroskopowego Haemophilus influenzae barwionego metodą Grama Opis preparatu:……………………………………………… ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… Ćwiczenie 2. Zasady hodowli i ocena wzrostu Haemophilus influenzae na podłożach stałych a/ Agar czekoladowy H. influenzae rośnie najlepiej na płytkach przygotowanych przez dodanie erytrocytów do płynnego agaru w temperaturze 80ºC i utrzymywanie w temperaturze 50°C przez około 15 minut. Łagodne ogrzewanie erytrocytów powoduje uwalnianie czynnika X - protoporfiryna IX (hematyna), prekursor heminy i czynnika V - nikotynamidoadenozynodifosforan (NAD). Oba te czynniki są niezbędne do wzrostu H. influenzae. Tylko świeżo przygotowany agar czekoladowy umożliwia wzrost H. influenzae, ponieważ czynnik V jest niestabilny i z czasem jest degradowany. Agar czekoladowy……………………………………………..... ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ b/ Mueller-Hinton II Agar lub Tryptic Soy Agar Po posianiu materiału należy nałożyć krążek BXV (bacytracyna, czynnik wzrostu X i V). Bacytracyna hamuje większość drobnoustrojów, jednocześnie nie wpływając na intensywność wzrostu pałeczek z rodzaju Haemophilus. W strefie obecności czynników X i V (wokół krążka) wzrastają kolonie pałeczek z rodzaju Haemphilus . Trzeba jednak zawsze sprawdzić, czy wyrosłe przy krążku kolonie to drobne pałeczki Gramujemne. Podłoże Tryptic Soy Agar …………………………………………….................................. ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ Ćwiczenie 3. Różnicownie szczepów Haemophilus influenzae i Haemophilus parainfluenzae Pałeczki z rodzaju Haemophilus wymagają do wzrostu obecności czynnika V i/lub czynnika X. To zapotrzebowanie pozwala na ich różnicowanie w obrębie rodzaju i precyzyjne określenie przynależności do gatunku. W badaniach stosuje się krążki diagnostyczne o średnicy 9 mm nasycone; ž BV - czynnikiem V + bacytracyna B (a' 2j bacytracyny w krążku), ž BX - czynnikiem X + bacytracyna B (a' 2j bacytracyny w krążku). W celu przeprowadzenia różnicowania pałeczek z rodzaju Haemophilus należy zastosować wystandaryzowane, zgodnie z zaleceniami NCCLS podłoże Mueller-Hinton II Agar. Doprowadzić płytki do temperatury pokojowej. Czystą hodowlę szczepu Haemophilus (np. kolonie wyrosłe wokół krążka BVX przy posiewie materiału klinicznego na podłoże Mueller-Hintona II) zawiesić w roztworze 0,9% NaCI, tak aby uzyskać zawiesinę o gęstości około 0,5 McFarlanda. Przygotowaną zawiesinę posiać jałowym wacikiem i nałożyć krążki diagnostyczne BV i BX w odległości około 15-20 mm od siebie posiany materiał inkubować w temperaturze 35° C, przez 18-24 godzin, w atmosferze 5-7% CO2. …………………………………….......................................... ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ Interpretacja wyników i wnioski ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… Ćwiczenie 5. Diagnostyka mikrobiologiczna oparta na teście API NH Wnioski : ………………………………………………………………………………………. ………………………………………………………………………………………………… Ćwiczenie 5. Badanie lekowrażliwości Haemophilus influenzae …………………………………….......................................... ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................ Wnioski: ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………….
