Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD30/FITC
Klon Ber-H2
Nr kat. F 0849
Wydanie 01.01.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
F 0849 przeznaczone jest do użycia w cytometrii przepływowej. Przeciwciało znakuje anaplastyczne komórki
chłoniaka olbrzymio-komórkowego (ALCL) i komórki Reed Sternberga, i stanowi użyteczne narzędzie w
diagnostyce ALCL a także jako dodatkowy marker w chorobie Hodgkin’ a (1). Diagnostyka różnicowa musi być
dokonana w oparciu o wyniki badań z użyciem kilku przeciwciał. Interpretacja wyników musi być
przeprowadzona przez wykwalifikowany personel w powiązaniu z historią choroby pacjenta oraz wynikami
innych testów diagnostycznych
Synonim antygenu
Ki-1 Antigen (1)
Wstęp
CD30 jest cytokinowym receptorem transmembranowym należącym do nadrodziny receptorów czynnika
martwicy nowotworów (tumour necrosis factor-TNF). Dojrzały CD30 posiada masę cząsteczkową 120 kDa i
wywodzi się z białkowego prekursora o m. cz.= 90 kDa (2). Pozakomórkowa domena, jest homologiczna z
innymi członkami rodziny receptorów TNF, natomiast w domenie wewnątrz komórkowej nie stwierdza się tej
homologii, sugeruje to znaczne różnice w mechanizmie przenoszenia sygnałów (3). Wewnątrzkomórkowa
część CD30 posiada aktywność kinazową, co pozwala przypuszczać że CD30 odgrywa rolę w regulacji funkcji,
różnicowaniu i/lub proliferacji normalnych komórek limfoidalnych (2). Rozpuszczalna forma CD30 o m. cz.= 85
kDa, oznaczana jako sCD30, uwalniana z cząsteczki związanej z błoną komórkową w wyniku rozpadu
proteolitycznego, może być wykrywana w surowicy pacjentów chorych na nowotwory ze stwierdzaną ekspresją
CD30 (3).
Stwierdzono ekspresję CD30 w komórkach Hodgkin’a oraz Reed-Sternberg (H-RS) , anaplastycznych
chłoniakach olbrzymiokomórkowych, oraz aktywowanych limfocytach T i B (2, 5, 6).
Odczynnik dostarczony
Przeciwciało Anti-CD30sprzężone z fluorochromem F 0849,jest produkowane z oczyszczonych
monoklonalnych mysich przeciwciał. Przeciwciała te dostarczane są w postaci ciekłej w buforze zawierającym
1% albuminy surowicy wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Każde opakowanie wystarcza na 100
testów (10 L konjugatu na 106 L540 komórek).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykieta na opakowaniu.
Przeciwciało
Nr kat.
Fluorochrom
Kontrola
Negatywna
Nr kat.
F 0849
FITC (Izomer 1 Izocjanianu Fluoresceiny)
X 0927
Immunogen
Komórki Co z linii komórkowych Hodgkin’a (1).
Swoistość
Przeciwciało Ber-H2 otrzymane w wyniku hybrydyzacji linii komórkowej zostało zaprezentowane na The Fourth
International Workshop on Human Leucocyte Differentiation Antigens (Vienna 1989) i zostało zaliczone do
CD30 cluster (4).
Epitop rozpoznawany przez anty CD30, Ber-H2, jest zlokalizowany pozakomórkowo pomiędzy 112 i 412 resztą
aminokwasową (3).
Przeciwciało znakuje: linie komórkowe pochodzące z komórek choroby Hodgkin’a, L428, L540, L591, Co, Ho
oraz poddane transfekcji przez KM-H2; HTLV-1 linie komórkowe komórek T, Hut-102 and MT-2;
transformowane EBV linie komórkowe komórek B (non-Burkitt), B95-8 (małpa), BJA-B oraz Cess; a także linie
komórkowe komórek mieloidalnych, K 562 (1).
Poza układem limfo-hematopoetycznym, przeciwciało anty CD30, Ber-H2, znakuje raki embrionalne oraz
embrionalne części guzów o utkaniu mieszanym z komórek zarodkowych (mixed germ cell tumours) (7).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. . Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub
azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się
azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na
opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić
jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z
próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez
zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako.
Procedura barwienia
1.
(110717-002)
Pobrać krew żylną do próbówki z antykoagulantem
F 0849/PL/KKR/01.01.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
2.
Wyodrębnić komórki jednojądrowe przez wirowanie w medium rozdzielającym. Alternatywnie,
przeprowadzić lizę krwinek czerwonych po etapie 6
3.
Przemyć komórki jednojądrowe dwukrotnie używając RPMI 1640 lub PBS, pH 7.2-7.4.
4.
Zmieszać w próbówce 100 L zawiesiny komórkowej z 10 L F 0849.
5.
Jako kontrolę negatywną użyj nie reaktywne monoklonalne przeciwciało o tym samym izotypie
skoniugowane z tym samym fluorochromem (patrz tabela).
6.
Inkubować w ciemności w temp. 4 C przez 30 minut.
7.
Przemyć dwukrotnie PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie wykonać zawieszenie komórek z każdej z
próbówek w medium odpowiednim dla cytometrii przepływowej np. 0.3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz)
w 0.01 mol/L PBS, pH 7.4.
8.
Wykonać analizę na cytometrze przepływowym.
Zaleca się wykonanie kontroli negatywnej i pozytywnej równolegle z przygotowaniem badanych próbek.
Należy także zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło w czasie
całej procedury przygotowania i analizy.
Literatura
1.
Schwarting R, Gerdes J, Dürkop H, Falini B, Pileri S, Stein H. Ber-H2: a new anti-Ki-1 (CD30) monoclonal
antibody directed at a formol-resistant epitope. Blood 1989;74:1678-89.
2.
de Bruin PC, Gruss H-J, van der Valk P, Willemze R, Meijer CJLM. CD30 expression in normal and
neoplastic lymphoid tissue: biological aspects and clinical implications [review]. Leukemia 1995;9:1620-7.
3.
Falini B, Pileri S, Pizzolo G, Dürkop H, Flenghi L, Stirpe F, et al. CD30 (Ki-1) molecule: a new cytokine
receptor of the tumor necrosis factor receptor superfamily as a tool for diagnosis and immunotherapy
[Review]. Blood 1995;85:1-14.
4.
Schwarting R, Stein H. A3. Cluster report: CD30. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt
RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th
International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo:
Oxford University Press; 1989. p 419-22.
5.
Stein H, Gerdes J, Schwab U, Lemke H, Mason DY, Ziegler A, et al. Identification of Hodgkin and
Sternberg-Reed cells as a unique cell type derived from a newly-detected small-cell population. Int J
Cancer 1982;30:445-59.
6.
Stein H, Mason DY, Gerdes J, O'Connor N, Wainscoat J, Pallesen G, et al. The expression of the
Hodgkin's disease associated antigen Ki-1 in reactive and neoplastic lymphoid tissue: evidence that
Reed-Sternberg cells and histiocytic malignancies are derived from activated lymphoid cells. Blood
1985;66:848-58.
7.
Pallesen G, Hamilton-Dutoit SJ. Ki-1 (CD30) antigen is regularly expressed by tumor cells of embryonal
carcinoma. Am J Pathol 1988;133:446-50.
Objaśnienia symboli
(110717-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed silnym światłem
(sprawdź w zasadach
przechowywania)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 0849/PL/KKR/01.01.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17