Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse
Kip1
Anti-Human p27
Klon SX53G8
Nr katalogowy M 7203
Wydanie 16.07.03
Zastosowanie
Do diagnostyki in vitro.
Monoklonalne mysie przeciwciało przeciwko ludzkiemu białku p27Kip1, klon SX53G8, jest przeznaczone do
zastosowania w immunocytochemii. Przeciwciało znakuje komórki, w których zachodzi ekspresja p27 Kip1 i jest
przydatne w badaniach raków gruczołu piersiowego, okrężnicy (1) i jelita grubego (2). W identyfikacji różnicowej
pomocne są wyniki badań z wykorzystaniem panelu przeciwciał. Interpretacja musi być przeprowadzona przez
wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych testów diagnostycznych
Wprowadzenie
p27Kip1 jest inhibitorem kinaz zależnych od cyklin. Kinazy zależne od cyklin (CDK) razem z ich podjednostkami
regulatorowymi, cyklinami, są dodatnimi regulatorami postępu cyklu komórkowego w komórkach
eukariotycznych. Kompleksy cyklina-CDK są regulowane przez inhibitory kinaz zależnych od cyklin (CDKI),
które generalnie prowadzą do blokowania cyklu komórkowego. Istnieją dwie rodziny CDKI, rodzina Cip/Kip i
rodzina INK4. Białka należące do rodziny Cip/Kip wchodzą w interakcję z kompleksami cyklina-CDK i działają
jako inhibitory aktywności kinazowej kompleksów cyklina A/CDK2 i cyklina E/CDK2 przez łączenie
konserwatywnej domeny N-końcowej do kompleksów cyklina/CDK. Jednakże białka Cip/Kip mogą działać
również jako dodatnie regulatory kompleksów cyklina D/CDK4. W prawidłowych komórkach zwiększona
ekspresja p27Kip1 reguluje zatrzymywanie cyklu komórkowego w fazie G1 indukowane przez TGF-blokowanie
kontaktowe , rapamycynę i inne czynniki. Mutacja w genie p27Kip1 była badana w wielu rodzajach nowotworów,
jednak substytucje, delecje czy rearanżacje genu p27Kip1 są rzadkie (3,4).
Odczynnik dostarczany
Monoklonalne mysie przeciwciało jest dostarczone w formie płynnej jako supernatant hodowli
dializowany w środowisku 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
komórkowej
Klon: SX53G8 (1). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG: Zob. etykieta na fiolce.
Immunogen
Oczyszczone białko fuzyjne S-transferaza glutationu (GST)- p27Kip1 (1).
Swoistość
W Western blottingu lizatów komórkowych z 7 linii komórkowych ludzkiego raka gruczołu piersiowego (ZR75-1,
ZR75-30, MCF-7, MDAMB453, T47D, CAL51, 734B), przeciwciało znakuje pojedynczy prążek odpowiadający
p27Kip1 (1).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3 ), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może
reagować
z elementami kanalizacji z miedzi lub ołowiu tworząc silnie wybuchowe azydki tych metali. Przy usuwaniu
odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8C. Nie używać po przekroczeniu daty ważności zaznaczonej na probówce.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż zalecone, użytkownik powinien zweryfikować
warunki przechowywania. Mimo braku wyraźnych objawów wskazujących na utratę stabilności produktu
kontrole dodatnia i ujemna powinny być prowadzone równocześnie z próbkami pobranymi od pacjenta. Jeśli
pojawi się nieoczekiwany wynik, który nie może być wytłumaczony wariantami procedur laboratoryjnych i
podejrzewa się, że przeciwciało jest przyczyną problemu należy skontaktować się z naszym serwisem
technicznym.
Preparatyka próbki
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być stosowane do znakowania skrawków zatopionych w parafinie,
utrwalonych w formalinie. Indukowanie termicznie odkrywanie epitopów jest konieczne. Optymalne wyniki
uzyskuje się przy zastosowaniu Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, Dako Target
Retrieval Solution, nr kat. S 1700, 10 mmol/L buforu cytrynianowego, pH 6.0, lub 10 mmol/L buforu Tris, 1
mmol/L EDTA, pH 9.0. Wstępne traktowanie tkanek proteinazą K nie dawało efektów. Skrawki nie powinny
wyschnąć podczas przygotowywania i podczas barwienia immunocytochemicznego.
Mrożone skrawki i preparaty komórkowe: Przeciwciało nie może być stosowane do znakowania utrwalonych w
acetonie mrożonych skrawków.
Procedura barwienia
(111641-003)
Rozcieńczenia: Monoklonalne mysie przeciwciało przeciwko ludzkiemu białku p27Kip1, nr kat. M 7203, może
być stosowane w zakresie rozcieńczeń od 1:25 do1:50 na skrawkach ludzkich migdałków utrwalonych w
formalinie, zatopionych w parafinie i z użyciem 20 minutowego termicznego odkrywania epitopów w 10 mmol/L
buforu Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9.0 oraz po 30 minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwotnymi
przeciwciałami. Optymalne warunki mogą się różnić w zależności od próbki i metody barwienia i powinny być
dobrane indywidualnie. Zalecana kontrola ujemna to Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego
samego stężenia mysich IgG jak pierwotne przeciwciała. Jeżeli nie udowodniono trwałości przeciwciała i kontroli
negatywnej w danej metodzie, zaleca się ich rozcieńczenie tuż przed użyciem lub zastosowanie do rozcieńczenia
Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrola dodatnia i ujemna powinny być prowadzone równocześnie z
próbką pobraną od pacjenta.
M 7203/PL/SUA/16.07.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Uwidacznianie produktu reakcji: Zaleca się zestawy LSAB™+/HRP nr katalogowy K 0679 i DAKO
EnVision™/HRP numery katalogowe K 4004 i K 4006. Postępowanie zgodnie z procedurą dołączoną do
wybranego zestawu do uwidaczniania produktu reakcji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest przystosowane do zautomatyzowanego barwienia immunocytochemicznego
jak Dako Autostainer.
Reaktywność z tkankami
Reakcja z przeciwciałami ma charakter jądrowy. (5).
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje różne komórki prawidłowych tkanek w tym mięśni gładkich, naczyń
krwionośnych, węzłów chłonnych, mózgu, okrężnicy, wątroby, trzustki, prostaty i nerek.
Tkanki zmienione: W badaniach nad 84 przypadkami raka gruczołu piersiowego u ludzi przeciwciało znakowało
14/15 (92%) guzów w stopniu I, 29/36 (80%) w stopniu II i 10/33 (30%) w stopniu III. W III stopniu
zaawansowania przewodowych raków inwazyjnych, które nie wykazywały znakowania, limfocyty zrębowe
przylegające do komórek guza zostały silnie wyznakowane przez przeciwciało. Wśród 80 raków okrężnicy u
ludzi przeciwciała wyznakowały 9/11 (82%) przypadków w stadium A w skali Dukesa, 18/23 (78%) przypadków
w stadium B, 12/29 (42%) przypadków w stadium C i 5/17 (28%) przypadków w stadium D (1).
Piśmiennictwo:
1. Fredersdorf S, Burns J, Milne AM, Packham G, Fallis L, Gillett CE, et al. High level expression of p27Kip1
and cyclin D1 in some human breast cancer cells: Inverse correlation between the expression of p27Kip1
and degree of malignancy in human breast and colorectal cancers. Proc Natl Acad Sci 1997;94:6380-5.
2. Schwandner O, Bruch H-P, Broll R. p21, p27, Cyclin D1, and p53 in rectal cancer: immunohistology with
prognostic significance? Int J Colorectal Dis 2002;17:11-9.
3. Sgambato A, Cittadini A, Faragila B, Weinstein IB,Multiple functions of p27Kip1 and its alterataions in tumor
cells: A review. J Cell Physiol 2000;183:18-27.
4. Sherr CJ, Roberts JM. CDK inhibitors: positive and negative regulators of G1-phase progression. Genes & Dev
1999;13:1501-12.
5. Mouriaux F, Maurage C-A, Labalette P, Sablonnière B, Malecaze F, Darbon J-M. Cyclin-dependent kinase
inhibitory protein expression in human choroidal melanoma tumors. Invest Ophthalmol Vis Sci
2000;41:2837-43.
Objaśnienie symboli
(111641-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7203/PL/SUA/16.07.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17