(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS701

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CA 125
Klon M11
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS701
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CA 125, klon M11, Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer
Plus) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus.
Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji surowiczych raków jajnika (1, 2). Przeciwciała przeciwko CA 125 mogą
być równieŜ uŜyteczne w identyfikacji międzybłoniaka (3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia
musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych, i powinna
być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Antygen rakowy 125 (1), MUC16 (4).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
CA 125 jest duŜą przezbłonową glikoproteiną typu I, składającą się z ponad 22000 aminokwasów z niewielką
domeną wewnątrzkomórkową i duŜą domeną zewnątrzkomórkową (4). Jest ona kodowana przez gen MUC16
zmapowany do 19p13.3 metodą analizy sekwencji (1). CA 125 jest wydzielana przez retikulum endoplazmatyczne
aparat Golgiego w mechanizmie, który jest niezaleŜny od sygnałów. Struktura CA 125 została precyzyjnie określona,
lecz niewiele wiadomo na temat funkcji białka, jakkolwiek wydaje się ono być elementem przypominającego mucynę
kompleksu glikoproteinowego o wysokiej masie cząsteczkowej (4).
CA 125 podlega ekspresji na powierzchni komórek błon embrionalnych oraz dorosłych komórek wywodzących się
płodowej perydermy (5). Antygen podlega ekspresji w komórkach guzów jajnika, lecz moŜna go równieŜ odnaleźć w
surowicach pacjentów z gruczolakorakami jajnika, trzustki, wątroby i okręŜnicy (6).
Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: M11 (7). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Antygen CA 125 otrzymany z płynu wysiękowego z jamy otrzewnowej.
Swoistość
W testach Western blot, przeciwciało znakuje wiele odcinków antygenowych, w tym odcinki cząsteczkowe
rozpoznawane przez monoclonal anti-CA 125, klon OC125 (7).
Testy kompetycyjne wykazały, Ŝe przeciwciało monoklonalne, klon M11 nie współzawodniczy z przeciwciałem
monoklonalnym klon OC125 o wiązanie z antygenem CA 125 (7).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować te warunki.
Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku
odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8010/K8004).
(119567-001)
Dako Denmark A/S
IS701/PL/SSM/2009.02.18 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8010/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisanej dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, High pH (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat.
K8010). Kolejne kroki barwienia oraz czasy inkubacji zaprogramowano wstępnie w oprogramowaniu aparatów Dako
Autostainer/Autostainer Plus, przy uŜyciu następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (200 µL dozowanych odczynników) lub FLEXRTU3 (300 µL dozowanych odczynników)
Autoprogram: CA125 (bez barwienia kontrastowego) lub CA125H (z barwieniem kontrastowym)
Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer ” w programach barwienia ≤10 szkiełek. W przypadku
programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania, i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym
nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako, w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować jajowód, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse,
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują odczyn błonowy i wyjątkowo cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: W jajowodzie, wierzchołek rąbka szczoteczkowatego komórek nabłonkowych wykazuje umiarkowany
do silnego odczyn barwienia. Rozproszone komórki nabłonkowe równieŜ wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Przeciwciało znakuje równieŜ komórki dendrytyczne grudek chłonnych oraz nabłonek gruczołowy stercza.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało dało odczyn dodatni w przypadku 18/25 surowiczych raków jajnika i 4/20
śluzowatych raków jajnika (1). W innnym badaniu, przeciwciało dało odczyn dodatni w przypadku 22/22 surowiczych
raków jajnika, 5/10 śluzowych raków jajnika, 6/7 endometrilanych raków jajnika i 10/10 raków jajnika (2).
Przeciwciało dało takŜe odczyn dodatni w 4/4 przypadków międzybłoniaka.
Piśmiennictwo
1.
Heinrich JKR, Böttcher-Luiz F, Andrade LLA, Davidson S, Bonds L, Stephens J, et al. HER-2 and cancer
antigen 125 evaluation in ovarian borderline tumors by immunohistochemistry and fluorescence in situ
hybridization. Int J Gynecol Cancer 2004;14:1078-85.
2.
Okamoto S, Ito K, Sasano H, Moriya T, Niikura H, Terada Y, et al. Ber-EP4 and Anti-Calretinin antibodies: A
useful combination for differential diagnosis of various histological types of ovarian cancer cells and mesothelial
cells. Tohoku J. Exp. Med 2005;206:31-40.
3.
Attanoos RL, Webb R, Dojcinov SD, Gibbs AR. Value of mesothelial and epithelial antibodies in distinguishing
diffuse peritoneal mesothelioma in females from serous papillary carcinoma of the ovary and peritoneum.
Histopathology 2002;40:237-44.
4.
Rump A, Morikawa Y, Tanaka M, Minami S, Umesaki N, Takeuchi M, et al. Binding Ovarian Cancer Antigen
CA125/MUC16 to mesothelin mediates cell adhesion. J Biol Chem 2004;279:9190-8.
5.
Leake J, Woolas RP, Daniel J, Oram DH, Brown CL. Immunocytochemical and serological expression of CA
125: a clinicopathological study of 40 malignant ovarian epithelial tumors. 1994;24:57-64.
6.
Leong AS-Y, Cooper K and Leong FJW-K. CA 125. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology.
London: Greenwich Medical Media; 2003. p. 35-6.
7.
O’Brien TJ, Raymond LM, Bannon GA, Ford DH, Haradottir H, Miller FC, et al. New monoclonal antibodies
identify the glycoprotein carrying the CA 125 epitope. Amer J Obstet Gynecol 1991;165:1857-64.
(119567-001)
Dako Denmark A/S
IS701/PL/SSM/2009.02.18 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienie symboli
N ume r ka ta log owy
Tempe ratura
prze chow ywan ia
Zu Ŝyć p rzed
Wyró b medyczny do
d ia gno styki in vi tro
Zawa rto ść w ysta rcza na
<n> testów
Produ cent
S prawd zić w instrukcj i
sto sowa nia
Nu mer serii
(119567-001)
Dako Denmark A/S
IS701/PL/SSM/2009.02.18 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17