docprzepis do ćwiczenia 1
download 
Reklamacja Transkrypt
przepis do ćwiczenia 1
ĆWICZENIE 1 Aminokwasy Przygotować 5 (lub więcej) 1% roztworów poszczególnych aminokwasów i białka jaja kurzego i dla każdego z nich wykonać wszystkie reakcje charakterystyczne. Reakcja ksantoproteinowa (19) Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 1ml wody destylowanej 1ml 1% glicyny 1ml 1% cysteiny 1ml 1% tyrozyny 1ml 1% tryptofanu 1ml 1% białka jaja kurzego 7ml stężonego HNO3 21 mL 20% NaOH Szkło: 6x szklane probówki 9x pipetki plastikowe wrząca łaźnia wodna 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować 6 probówek. Do każdej probówki wlać: 1 mL 1% roztworu badanego aminokwasu (do każdej probówki inny aminokwas), białka jaja kurzego lub wody. Następnie do każdej z nich dodać 1 mL stężonego HNO3. Zamieszać i ogrzewać na wrzącej łaźni wodnej przez ok. 1 min. W probówkach zawierających aminokwasy z pierścieniami aromatycznymi tworzy się żółta barwa. Każdą probówkę ochłodzić pod bieżącą zimna wodą i OSTROŻNIE dodać 2-3 mL 20% NaOH w celu zobojętnienia roztworu. Następuje zmiana zabarwienia na pomarańczowe. Zaobserwować barwę roztworu i tworzącego się osadu Wykonać reakcje dla wszystkich dostępnych aminokwasów, białka jaja kurzego i wody, i na tej postawie określić, które z nich zawierają pierścienie aromatyczne. Wykrywanie grup tiolowych w aminokwasach zawierających siarkę oraz w białkach. (18) Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 1ml wody destylowanej 1ml 1% glicyny 1ml 1% cysteiny 1ml 1% tyrozyny 1ml 1% tryptofanu 1ml 1% białka jaja kurzego 4 mL octanu ołowiu (0,25M) 7 mL 20% NaOH 1 Szkło: 6x szklane probówki 9x pipetki plastikowe wrząca łaźnia wodna 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować 6 probówek. Do każdej probówki wlać: 1 mL 1% roztworu badanego aminokwasu (do każdej probówki inny aminokwas), białka jaja kurzego lub wody. Następnie do każdej z nich dodać po 1 mL 20% NaOH i jedną kroplę 0,25M octanu ołowiu. Zawartość zamieszać i ogrzewać na wrzącej łaźni wodnej (2-3min). W probówkach zawierających aminokwasy posiadające grupy tiolowe można obserwować powstawanie czarnego zabarwienia powstającego siarczku ołowiu. Rekcje wykonać dla wszystkich dostępnych aminokwasów, roztworu białka jaja kurzego i wody. Na tej podstawie określić które z nich zawierają grupy tiolowe. Wykrywanie układu indolowego – reakcja Adamkiewicza-Hopkinsa Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 1ml wody destylowanej 1ml 1% glicyny 1ml 1% cysteiny 1ml 1% tyrozyny 1ml 1% tryptofanu 1ml 1% białka jaja kurzego 4 mL kwasu glioksalowego 7 mL stężonego H2SO4 Szkło: 6x szklane probówki 9x pipetki plastikowe 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować 6 probówek. Do każdej probówki wlać: 1 mL 1% roztworu badanego aminokwasu (do każdej probówki inny aminokwas), białka jaja kurzego lub wody. Następnie do każdej z nich dodać po 0,5ml kwasu glioksalowego, zamieszać a następnie podwarstwić 1ml stężonego H 2SO4. W probówkach zawierających aminokwasy z pierścieniem indolowym na granicy faz tworzy się fioletowy pierścień. Wykonać dla każdego dostępnego aminokwasu, białka jaja kurzego i wody i na tej podstawie określić które z nich zawierają pierścienie indolowe. Białka Reakcja biuretowa (Piotrowskiego) - wykrywanie wiązań peptydowych. (20) Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 1ml wody destylowanej 1ml 1% białka jaja kurzego 2 mL 10% NaOH 2 1 mL 0,5% CuSO4 Szkło: 2x szklane probówki 4x pipetki plastikowe 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować 2 probówki. Do pierwszej wlać 1 mL wody destylowanej a do drugiej 1 mL roztworu białka jaja kurzego. Następnie do każdej z nich dodać 1 mL 10% NaOH, zamieszać, i dodać 3 krople 0,5% CuSO4. W probówce zawierającej białko pojawia się fioletowe zabarwienie. Reakcja Hellera Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 1ml wody destylowanej 1ml 1% białka jaja kurzego 2 mL stężonego HNO3 Szkło: 2x szklane probówki 3x pipetki plastikowe 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować 2 probówki. Do każdej z nich wlać 1 mL stężonego HNO3. Następnie do pierwszej nawarstwić 1 mL wody destylowanej, a do drugiej 1 mL roztworu białka jaja kurzego (tak aby roztwory nie zmieszały się). W probówce z białkiem w miejscu zetknięcia się roztworów tworzy się biały lub żółty pierścień zdenaturowanego i wytrąconego białka nierozpuszczalnego w nadmiarze kwasu. Reakcja z NaOH Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 1ml wody destylowanej 1ml 1% białka jaja kurzego 1 mL 10% NaOH 5 mL 1% kwasu octowego Szkło: 2x szklane probówki 4x pipetki plastikowe 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować 2 probówki. Do pierwszej wlać 1 mL wody destylowanej a do drugiej 1 mL roztworu 3 białka jaja kurzego. Następnie do każdej z nich dodać 2 krople 10% NaOH, zawartość zamieszać i do każdej dodać ok. 20 kropli 1% kwasu octowego (nie mieszać). W probówce z białkiem wytwarza się kłaczkowaty osad wytrąconego białka. Działanie alkoholu Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 11 mL wody destylowanej 2 mL 1% białka jaja kurzego 6 mL 95% EtOH Szkło: 3x szklane probówki 3x pipetki plastikowe 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować trzy probówki. Do pierwszej nalać 1 mL wody destylowanej, a do pozostałych dwóch po 1 mL białka jaja kurzego. Do każdej probówki delikatnie dodać 2 mL 95% etanolu (nie mieszać). W probówkach z białkiem wytrąca się osad białka. Do jednej z nich dodać po 10 min 5mL wody destylowanej i zamieszać. Osad powinien ponownie się rozpuścić. Drugą pozostawić na 40 min i następnie także do niej dodać 5 mL wody. Po zamieszaniu osad nie powinien zaniknąć. Strącanie białek za pomocą kationów (soli metali ciężkich) Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 3 mL wody destylowanej 3 mL 1% białka jaja kurzego 2 mL 1% roztworu FeCl3 2 mL 2% roztworu Pb(CH3COO)2, 2 mL 2% roztworu CuSO4 Szkło: 6x szklane probówki 5x pipetki plastikowe 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) Wykonanie Przygotować 6 probówek. Do trzech nalać po 1ml wody destylowanej, a do trzech pozostałych po 1 mL białka jaja kurzego. Probówki ustawić parami: woda i białko. Do pierwszej pary dodać po 4 krople 1% roztworu FeCl3, do drugiej po 4 krople 2% roztworu Pb(CH 3COO)2, do trzeciej po 4 krople 2% roztworu CuSO4. W probówkach z białkiem wytwarza się kłaczkowaty osad wytrąconego białka, którego ilość zależy od użytego jonu metalu ciężkiego. Denaturacja cieplna Potrzebne odczynniki na 1 zespół (x5 na 1 grupę ćwiczeniową): 4 1 mL wody destylowanej 1 mL 1% białka jaja kurzego 1 mL 1% roztworu CH3COOH 2 mL roztworu NaCl Szkło: 2x szklane probówki 4x pipetki plastikowe 2x stojak: na probówki (1x) i odczynniki (1x) wrząca łaźnia wodna Wykonanie Przygotować 2 probówki. Do pierwszej odmierzyć 1 mL wody destylowanej a do drugiej 1 mL białka jaja kurzego. Następnie do każdej probówki dodać 1 kroplę 1% roztworu CH3COOH i ogrzewać do wrzenia na łaźni wodnej. W probówce z białkiem tworzy się biały kłaczkowaty osad, który staje się wyraźny po dodaniu 5-10 kropli roztworu NaCl. 5
