HPLC cz.2 GPC ? Mechanizm rozdziału

GPC ?
HPLC cz.2
ver. 1.0
•
•
•
•
•
•
•
•
GPC – zasada rozdziału, kalibracja, obliczenia
Analiza jakoĞciowa – krok po kroku
Analiza iloĞciowa – krok po kroku
Przygotowanie próbek do analiz chromatograficznych
Zastosowania HPLC/GPC
Przykładowy problem do rozwiązania
Chromatografia Īelowa / sitowa / molekularna (gel permeation
chromatography
Chromatografia wykluczania wg rozmiarów (size exclusion
chromatography)
Chromatografia = Rozdział + Detekcja
Schemat zestawu do GPC = HPLC
1
2
Mechanizm rozdziału
Polimery, oligomery …
„Parametry” polimerów: Mw, Mn, Pd, RCC
Roztwory polimerów, postaü makrołaĔcucha
3
4
Zasady pracy i kalibracja
Wyniki
V0 – objĊtoĞü martwa
(pomiĊdzy ziarnami
wypełnienia) – całkowite
wykluczanie – objĊtoĞü
retencji pierwszego piku
Vi – objĊtoĞü wewnĊtrzna –
pojemnoĞü wszystkich
porów wypełnienia
Vt – objĊtoĞü całkowita
(Vt=Vo+Vi) – objĊtoĞü
retencji ostatniego piku
•JakoĞciowe – porównywanie Vr
•IloĞciowe – ĝrednie ciĊĪary cząsteczkowe: Mw, Mn. Polidyspersja
polimeru Pd=Mw/Mn. Rozkłady mas czasteczkowych.
Ve=Vo+Kd·Vi
GPC – metoda wzglĊdna
5
GPC – HPLC porównanie
•
•
6
Analiza jakoĞciowa
Mechanizm rozdziału
Rodzaj próbek
•Porównanie tR wzorca(ów) z chromatogramem próbki (przy róĪnych
metodach detekcji – typach detektorów, oraz składzie eluentu)
7
8
Analiza iloĞciowa
Analiza iloĞciowa
•Wzorca zewnĊtrznego (metoda krzywej kalibracji)
ZałoĪenie (do sprawdzenia!): iloĞü substancji (stĊĪenie) jest
proporcjonalne do powierzchni (wysokoĞci) piku → odpowiedni zakres
stĊĪeĔ (szum/nieliniowoĞü detektora/pojemnoĞü kolumny)
Metody analizy iloĞciowej:
•Wzorca zewnĊtrznego (metoda krzywej kalibracji)
•Wzorca wewnĊtrznego
•Dodatku wzorca
•Normalizacji wewnĊtrznej
9
Analiza iloĞciowa
10
Analiza iloĞciowa
•Wzorca wewnĊtrznego
•Metoda normalizacji wewnĊtrznej
11
12
ZakoĔczenie
•Zastosowanie HPLC (analityczne, preparatywne)
•O przygotowywaniu próbek do HPLC
•Problemy:
•Detektor dla układu HPLC do oznaczania cukrów
•Detektor dla układu HPLC do oznaczania związków
aromatycznych
•Jak analizowaü mieszaninĊ zawierającą bardzo małe iloĞci
analitu
13