Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Estrogen Receptor 1
Klon PPG5/10
Nr kat. M7292
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Estrogen Receptor 1, klon PPG5/10, przeznaczony jest do stosowania
w immunocytochemii. Przeciwciało znakuje ludzki natywne białko receptora estrogenu  (ER1)(1) i stanowi
przydatne narzędzie do opisu stanu ER1 w nowotworach sutka (2, 3) i stercza (4, 5) u człowieka. Interpretacji
wyniku — z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych — powinien
dokonać wykwalifikowany patolog.
Streszczenie i informacje
ogólne
Określono dwa podtypy ludzkiego receptora estrogenu (ER): ER i ER. Kodowane są przez dwa geny
zlokalizowane na różnych chromosomach (6). Oprócz ER1, zidentyfikowano dużą liczbę izoform i odmian
składania ER (6, 7). Wspólny dla ER jest wysoki stopień homologii domen wiążących DNA, konserwatywizm
rozmieszczenia kluczowych aminokwasów w domenach wiążących ligandy i zdolność tworzenia heterodimerów
(6, 7). Jednak ER i ER wykazują odrębne rozmieszczenie komórkowe, regulują odrębne grupy genów
i w przypadku niektórych genów mogą wykazywać przeciwstawne działanie (7).
Wyniki wielu badań sugerują utratę ekspresji ER lub jej ograniczenie w przypadku wielu nowotworów, w tym
raka sutka, jajników i okrężnicy, w porównaniu z ekspresją w odpowiadających im zdrowych tkankach,
i sugeruje się, że zmiana proporcji ER/ER może regulować rozwój nowotworu (7). W rozwoju nowotworu
stercza ekspresja ER wydaje się złożona, jako że zaobserwowano, iż ER oznaczane przy pomocy anti-ER,
klon PPG5/10, częściowo zanikło w trakcie zaawansowanego śródnabłonkowego nowotworu stercza o dużym
stopniu histologicznej złośliwości (high grade prostatic intraepithelial neoplasia — HGPIN) i w niewrażliwych na
androgeny stadiach gruczolakoraka stercza, podczas gdy są obecne w nieleczonych pierwotnych
i przerzutowych gruczolakorakach stercza (5). Kiedy uda się lepiej zrozumieć rolę ER w biologii nowotworów,
może on się stać nowym białkiem docelowym w terapii nowotworowej (7).
Zob. dokument Dako „General Instructions for Immunohistochemical Staining” (Instrukcje wykonywania
odczynów immunohistochemicznych) lub następujące części instrukcji dla systemu detekcji IHC: 1) Zasada
przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, (4)
Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, (7) Rozwiązywanie problemów,
8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany odczynnik
Monoklonalne przeciwciała mysie w postaci ciekłej jako nadsącz hodowli tkankowej w buforze Tris/HCl
0,1 mol/L, pH 7,5 i 15 mmol/L NaN3
Klon: PPG5/10. Proszę zauważyć, że przeciwciało produkowane przez klon PPG5/10 jest identyczne z anty-P7,
kod M9 (1). Izotyp: IgG2a.
Stężenie mysich IgG mg/L: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Peptyd syntetyczny CSPAEDSKSKEGSQNPQSQ, sprzężony z tuberkuliną. Peptyd jest swoisty dla formy 1
ludzkiego ER (1).
Swoistość
W technice Western blot ludzkich białek ER1, odpowiadających długiej (59 kDa) i krótkiej (53 kDa) formie
receptora, przeciwciało znakuje obie formy ER1 (1, 3). Nie zaobserwowano znakowania dla rekombinantów
ER (1, 3) i ER2 (8). W rozdziale metodą Western blot białek ekstrahowanych z tkanek nowotworowych
ludzkiego jajnika (1), stercza (1) lub sutka (3), przeciwciało wykrywa białko ER1.
W badaniach immunocytochemicznych na tkankach utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie
przeciwciało wykazuje reaktywność krzyżową z białkowym odpowiednikiem ER1 marmozet (1), krów, psów,
koni, myszy, szczurów i świń.
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN 3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć
gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(112467-002)
M7292/PL/MNI/24.02.05 str. 1/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu.
Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane w ulotce dołączonej do opakowania,
Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego
produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, należy wykonywać
dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się
skontaktować z naszym działem wsparcia technicznego.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie. Wymagana jest wstępna obróbka tkanek przez cieplne odmaskowanie epitopu
w autoklawie przez 10 minut w temperaturze 121 C.
Optymalne wyniki uzyskuje się stosując roztwór Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700. Mniej optymalne
rezultaty uzyskuje się z roztworami Dako Target Retrieval Solution, Citrate pH 6, nr kat. S2369, Dako Target
Retrieval Solution, pH 9, nr kat. S2368, lub Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S3308.
Stwierdzono, że wstępna obróbka tkanek przy użyciu odczynnika Dako Proteinase K, nr kat. S3020, jest
nieskuteczna. W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunocytochemicznego skrawki nie
powinny wyschnąć.
Wykonanie odczynu
Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Estrogen Receptor 1, nr kat. M7292, muszą być
rozcieńczane w Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components, nr kat. S3022,
i mogą być używane w zakresie rozcieńczeń 1:10–1:20 do skrawków tkanek ludzkiego raka sutka utrwalanych
w formalinie i zatapianych w parafinie, po obróbce wstępnej w postaci 10-minutowego cieplnego odmaskowania
antygenu w roztworze Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700, i 30-minutowej inkubacji
z przeciwciałem pierwotnym w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od
rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium.
Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Mouse IgG2a, code No. X0943, rozcieńczony do tego samego
stężenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB+/HRP, nr kat. K 0679, i DAKO EnVision+/HRP,
nr kat. K4004 i K4006. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z zestawem do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów w systemach zautomatyzowanych,
takich jak Dako Autostainer.
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują odczyn jądrowy i okazjonalnie cytoplazmatyczny (2, 4).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: W ludzkich jajnikach przeciwciało znakuje komórki warstwy ziarnistej pęcherzyków jajnika
wszystkich wielkości oraz komórki osłonki i ciałka żółtego (1). W utrwalanych formaliną próbkach gruczołów
sutkowych obserwuje się głównie znakowanie przeciwciałem jąder komórek nabłonka gruczołowego (2, 3),
a dodatkowo znaczone są także komórki zrębu, adypocyty i naczynia krwionośne (3). W sterczu znakowanie
jądrowe przeciwciałem wykazują struktury gruczołowe i podgrupy komórek podścieliska i mezenchymatyczne,
w tym adypocyty, komórki nabłonka i komórki mięśniówki gładkiej naczyń (5). W jądrach osób dorosłych
przeciwciało znakuje różne komórki zarodkowe, w tym spermatydy kuliste przed etapem kondensacji jądrowej,
spermatocyty w fazie pachytenu i diploidalne oraz spermatogonia typu A. Znaczone są także komórki
okołokanalikowe i Leydiga (8). W tkance śluzówki macicy przeciwciało znakuje komórki nabłonka oraz część
komórek podścieliska, zarówno w warstwie funkcjonalnej, jak i podstawowej. Znaczone są również komórki
śródbłonka śluzówki macicy (9). Tkanka wątroby nie wykazuje znakowania (1).
Tkanki nieprawidłowe W rakach sutka przeciwciało znakuje nowotworowe komórki nabłonka (2, 3). Na 51
nowotworów 48 (94%) wykazało barwienie ERw złośliwym nabłonku. 38 z 51 nowotworów (74,5%) wykazało
znakowanie zarówno ERjak i ER, podczas gdy 3 z 51 (6%) wykazały pozytywną reakcję na ER
i negatywną na ER. Ekspresja ERbyła niezależna od ekspresji ER(3). W biopsjach igłowych
gruczolakoraków stercza od pacjentów nieprzechodzących terapii hormonalnej przeciwciało znakowało 48/53
(93%) próbek (4). W skrawkach tkanek pierwotnych gruczolakoraków stercza, 52 z 60 (87%) przypadków
wykazało znakowanie ERpodobne jak w tkance zdrowej, podczas gdy w 8 z 13 przypadków (13%)
przeciwciało wykazało nieznacznie niższy poziom ER. W nawrotowym gruczolakoraku stercza pacjentów
leczonych terapią przeciwandrogenową, w 20 na 40 (50%) przypadków ER nie pojawiał się lub występował
w niższym stężeniu. W śródnabłonkowym raku stercza o dużym stopniu złośliwości histologicznej (high grade
prostatic intraepithelial neoplasia – HGPIN), 30 z 47 (64%) przypadków wykazywało zmniejszony (23,5%) lub
znacznie zmniejszony (40,5%) poziom ER w porównaniu do zdrowej tkanki (5).
Piśmiennictwo
(112467-002)
1.
Saunders PTK, Millar MR, Williams K, Macpherson S, Harkiss D, Anderson RA, et al. Differential
expression of estrogen receptor- and - and androgen receptor in the ovaries of marmosets and humans.
Biol Reprod 2000; 63:1098-1105.
2.
Skliris GP, Parkes AT, Limer JL, Burdall SE, Carder PJ, Speirs V. Evaluation of seven oestrogen receptor
 antibodies for immunohistochemistry, western blotting, and flow cytometry in human breast tissue. J
Pathol 2002;197:155-62.
3.
Saunders PTK, Millar MR, Williams K, Macpherson S, Bayne C, O’Sullivan C, et al. Expression of
oestrogen receptor beta (ER1) protein in human breast cancer biopsies. Br J Cancer 2002;86:250-6.
4.
Torlakovic E, Lilleby W, Torlakovic G, Fosså SD, Chibbar R. Prostate carcinoma expression of estrogen
receptor- as detected by PPG5/10 antibody has positive association with primary Gleason grade and
Gleason score. Hum Pathol 2002;33:646-51.
M7292/PL/MNI/24.02.05 str. 2/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
5.
Fixemer T, Remberger K, Bonkhoff H. Differential expression of the estrogen receptor beta (ER) in
human prostate tissue, premalignant changes, and in primary, metastatic, and recurrent prostatic
adenocarcinoma. Prostate 2003;54:79-87.
6.
Scobie GA, Macpherson S, Millar MR, Groome NP, Romana PG, Saunders PTK. Human oestrogen
receptors: differential expression of ERalpha and beta and the identification of ERbeta variants. Steroids
2002;67:985-92.
7.
Bardin A, Boulle N, Lazennec G, Vignon F, Pujol P. Loss of ER expression as a common step in
estrogen-dependent tumor progression (review). Endocr Relat Cancer 2004;11:537-51.
8.
Saunders PTK, Millar MR, Macpherson S, Irvine DS, Groome NP, Evans LR, et al. ER1 and ER2 splice
variant (ERcx/2) are expressed in distinct cell populations in the adult human testis. J Clin Endocrinol
Metab 2002;87:2706-15.
9.
Critchley HOD, Henderson TA, Kelly RW, Scobie GS. Evans LR, Groome NP, et al. Wild-type estrogen
receptor (ER1) and the splice variant (ERcx/2) are both expressed within the human endometrium
throughout the normal menstrual cycle. J Clin Endocrinol Metab 2002;87:5265-73.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Producent
Sprawdzić w instrukcji
Z
s
(112467-002)
t
o
s
o
w
a
n
i
u
ż
y
ć
p
r
z
e
d
a
M7292/PL/MNI/24.02.05 str. 3/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17