Specsheet Template CE
Transkrypt
Specsheet Template CE
Monoclonal Mouse Anti-Human CD42b, Platelet Glycoprotein lb, Klon AN51 Nr kat. F 0802 Nr kat. R 7014 Przeznaczenie FITC-Conjugated RPE-Conjugated Do diagnostyki in vitro. F 0802 oraz R 7014 przeznaczone są do użycia w cytometrii przepływowej. Interpretacji wyników może dokonywać osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu chorobowego i innych badań diagnostycznych. Synonim antygenu Glycoprotein Iba (GPIba), Glycoprotein IbGPIb i Glycocalicin (1). Wstęp CD42b jest białkiem o masie cząsteczkowej 145 kDa, które wraz z CD42c o masie 160 kDa tworzy heterodimer zawierający łańcuchy i Podjednostka ta jest łączona poprzez wiązanie dwusiarczkowe. CD42b oraz CD42c tworzą niekowalentny kompleks razem z CD42a i CD42d w błonie komórkowej płytek. Kompleks CD42 jest receptorem dla czynnika von Willebrand’a oraz trombiny a także uczestniczy w adhezji płytek do macierzy subendotelialnej (powstającej po zniszczeniu endotelium). Nieobecność kompleksu CD42 powoduje powstawanie zespołu Bernard-Soulier. Część wiążąca dla czynnika von Willebrand’a oraz trombiny znajduje się na fragmencie CD42b (1). Odczynnik dostarczony Przeciwciała Anti-CD42b sprzężone z fluorochromami F 0802 oraz R 7014, są produkowane z oczyszczonych monoklonalnych mysich przeciwciał. Przeciwciała te dostarczane są w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy surowicy wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Każde opakowanie wystarcza na 100 testów (10 L konjugatu na 106 płytek krwi z normalnej krwi obwodowej człowieka). Izotyp: IgG2a, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykietka na opakowaniu. Przeciwciało Nr kat. Fluorochrom Kontrola Negatywna Nr kat. F 0802 FITC (Izomer 1 izocjanianu fluoresceiny) X 0933 R 7014 RPE (R-Fytoerytryna) X 0950 Immunogen Mieszanina ludzkich płytek krwi oraz limfocytów. (2) Swoistość Anti-CD42b, AN51,został zaprezentowany na Fourth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens (3). Anti-CD42b, AN51, jest zdolny do blokowania domeny wiążącej czynnik von Willebrand’a w łańcuchu CD42b (4) oraz hamuje indukowaną adrenaliną agregację płytek (5). Anti-CD42b, AN51, jest wydzielane na megakariocytach oraz płytkach krwi (2). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury. Przechowywanie Procedura barwienia Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako. 1. Pobrać krew żylną do próbówki z EDTA jako antykoagulantem. 2. Przed upływem 5 minut od pobrania odwirować w temperaturze pokojowej przez 5 minut przy 200 x g. 3. Zebrać 100 L plazmy wzbogaconej w płytki (warstwa górna) i zmieszać z 1 ml 0.01 mol/L PBS, pH 7.4. Inkubować w 4 C przez 30-60 minut.(tak przygotowana próbka wystarcza na 20 badań). 4. Odwirować w temperaturze pokojowej przez 5 minut przy 1200 x g. Dokładnie zebrać pipetą supernatant pozostawiając ok. 50l zawiesiny. 5. Dodać 2 mL 0.01 mol/L PBS, pH 7.4, i ponownie zawiesić płytki używając mieszadło typu „vortex. 6. Odwirować w temperaturze pokojowej przez 5 minut przy 1200 g. Dokładnie zebrać pipetą supernatant pozostawiając ok. 50l zawiesiny. 7. Dodać 1 mL 0.01 mol/L PBS zawierającego 2% płodowej surowicy cielęcej i ponownie zawiesić płytki używając mieszadło „vortex”. 8. (110715-002) Zmieszać 50 L zawiesiny płytek z 10 L koniugatu fluorochromowego Anti-CD42b F 0802/R 7014/PL/MBH/01.09.02 str 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 9. Użyć niereaktywnego monoklonalnego przeciwciała o identycznym izotypie, skoniugowanego z tym samym fluorochromem jako kontroli negatywnej (patrz tabela) 10. Inkubować w ciemności w temperaturze 4oC przez 20 minut. 11. Płukać dwa razy z PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie zawiesić płytki w płynie odpowiednim do cytometrii przepływowej np. 0.3 mL 0.01 mol/L PBS, pH 7.4. 12. Wykonać analizę na cytometrze przepływowym. Zaleca się wykonanie kontroli negatywnej i pozytywnej równolegle z przygotowaniem badanych próbek. Należy także zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło w czasie całej procedury przygotowania i analizy. Ograniczenia specyficzności Produktu Intensywność fluorescencji tego przeciwciała jest zredukowana po dodaniu 1%paraformaldehydu. Dodatek paraformaldehydu po reakcji z przeciwciałem będzie zmniejszać intensywność sygnału fluorescencji. Literatura 1. de Haas M, von dem Borne A. CD42b. CD Guide. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, et al., editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University Press Inc.; 2002. p. 787-788. 2. McMichael AJ, Rust NA, Pilch JR, Sochynsky R, Morton J, Mason DY, et al. Monoclonal antibody to human platelet glycoprotein I. I. Immunological studies. Br J Haematol 1981;49:501-9. 3. CD 42b. Appendix A CD Guide. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p 1085. 4. Fauvel-Lafève F, Tabaka V, Caen JP, Legrand YJ. Defective adhesion of blood platelets to vascular microfibrils in the Bernard-Soulier syndrome. Blood 1993;82:1985-8. 5. Mustonen P, Lassila R. P8.14 Adrenaline-induced platelet aggregation is inhibited by AN51 (DAKO-Ib), a murine mAb to human platelet gpIb (CD42b). In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume 2. p. 1338-9 Objaśnienia symboli (110715-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Chronić przed silnym światłem (sprawdź w zasadach przechowywania) Producent Sprawdź w instrukcji stosowania Numer serii F 0802/R 7014/PL/MBH/01.09.02 str 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17