Monoclonal Mouse Anti-Human Von Willebrand Factor

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Von Willebrand Factor
clone F8/86
nr kat. M 0616
Wydanie 29.07.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Von Willebrand Factor, clone F8/86, jest przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii. Przeciwciało znakuje komórki wykazujące ekspresję ludzkiego czynnika von Willebranda, w
tym komórki śródbłonka i megakariocyty. Przeciwciało jest przydatne do określania gęstości naczyń krwionośnych
w badaniu angiogenezy nowotworowej (1). Ponadto, przeciwciało znakuje komórki blastyczne w ostrej białaczce
megakariocytarnej (2). Diagnostyka róŜnicowa jest wspomagana wynikami barwień panelu przeciwciał. Interpretacji
wyników moŜe dokonywać osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu chorobowego i innych badań
diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Uprzednio określano czynnik von Willebranda jako antygen związany z czynnikiem VIII (3).
Wprowadzenie
Czynnik von Willebranda (vWF) jest duŜą glikorpoteiną o strukturze multimeru i masie cząsteczkowej w
zakresie 500 kDa aŜ do ponad 10 000 kDa, przy czym w tej największej formie jest to największe znane
rozpuszczalne ludzkie białko osoczowe (4). Pierwotny produkt genu dla czynnika von Willebranda,
zlokalizowanego na chromosomie 12p13.2, jest białkiem zbudowanym z 2813 aminokwasów, składającym się
z peptydu sygnałowego (22 aminokwasy), duŜego propeptydu (741 aminokwasów) i docelowej cząsteczki vWF
zawierającej 2050 aminokwasów (5). Ekspresja genu dla czynnika von Willebranda jest tkankowo swoista I
ograniczona do komórek śródbłonka i megakariocytów (4, 5). vWF jest obecny w osoczu, w ciałkach Weibela
Pallade’a komórek śródbłonka, w ziarnistościach alfa megakariocytów i pochodzących z nich płytek, jak teŜ w
podśródbłonkowej macierzy ściany naczyń. vWF pośredniczy w adhezji płytek i tworzeniu skrzepliny w
miejscach uszkodzenia naczynia, a słuŜąc jako przenośnik czynnika VIII w osoczu chroni ten koenzym
krzepnięcia przed degradacją proteolityczną (4).
Choroba von Willebranda jest najczęstszą skazą krwotoczną, dotykającą 1% populacji, spowodowaną
ilościowym bądź jakościowym niedoborem czynnika vWF (5).
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne mysie przeciwciało w formie płynnej jako nasącz hodowli komórkowej dializowany wobec 0,05
mol/L Tris/HCl, o pH 7.2, zawierający 15 mmol/L NaN3.
klon: F8/86. Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysiej IgG: Zobacz etykietka na fiolce.
Immunogen
czynnik von Willebranda izolowany z ludzkiego osocza.
Swoistość
Jak wykazano w immunohistochemii znakuje komórki śródbłonka (1), megakariocyty i megakarioblasty (5).
ZastrzeŜenia
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stęŜeniu obecnym w produkcie, chociaŜ nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub
azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ duŜą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się
azydków.
3. Jak w przypadku kaŜdego materiału biologicznego naleŜy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie uŜywać po upływie daty waŜności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niŜ wskazane, uŜytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. JeŜeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur
laboratoryjnych i moŜna podejrzewać, Ŝe dzieje się to z winy przeciwciała, naleŜy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: moŜe być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i zatopionej w
parafinie. Konieczne jest odsłonięcie epitopów przez ogrzewanie. Najlepsze wyniki uzyskano przy odsłanianiu
epitopów przez ogrzewanie, stosując Dako Target Retrieval Solution nr kat. S 1700. Następujące roztwory:
Dako Target Retrieval Solution o High pH nr kat. S 3308, Dako Target Retrieval Solution EDTA pH 9.0 i 10
mmol/L bufor cytrynianowy o pH 6,0 okazały się nieskuteczne. Trawienie tkanki Dako Proteinase K nr kat. S
3020, było mniej skuteczne Skrawki tkankowe nie powinny wysychać podczas trawienia ani podczas barwienia.
Skrawki mroŜeniowe i preparaty komórkowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków
mroŜeniowych.
Procedura barwienia
(108589-004)
Rozcieńczenie: Monoclonal Mouse Anti-Human Von Willebrand Factor nr kat. M 0616, moŜe być uŜywane w
zakresie rozcieńczeń 1:25-1:50, gdy się go uŜywa na skrawki tkankowe ludzkich migdałków albo jelita grubego
utrwalane formaliną i zatapiane w parafinie, po 20 minutowym odsłanianiu epitopów przez ogrzewanie w Dako
M 0616/PL/HEW/29.07.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Target Retrieval Solution nr kat. S 1700, i po 30 minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwotnym
przeciwciałem. Optymalne warunki mogą się róŜnić zaleŜnie od próbki i metod jej przygotowania, i powinny
zostać dobrane w kaŜdym laboratorium. Zalecaną kontrolą negatywną jest Dako Mouse IgG1 nr kat. X 0931,
rozcieńczona do takiego samego stęŜenia mysiej IgG jak roztwór pierwotnego przeciwciała. Jeśli nie udowodniono
trwałości przeciwciała w danej metodzie, zaleca się rozcieńczanie go tuŜ przed uŜyciem lub rozcieńczanie w
Dako Antibody Diluent nr kat. S 0809. Kontrole pozytywne i negatywne powinny być barwione równocześnie z
próbką pacjenta.
Uwidocznienie: Zalecane są zestawy DAKO LSAB™+/HRP kit, nr kat. K 0679, i DAKO EnVision™+/HRP, nr
kat. K 4004 i K 4006. Do skrawków mroŜonych i preparatów komórkowych, dobrą alternatywą jest zestaw Dako
APAAP, nr kat. K 0670, jeśli problemem jest barwienie endogennej peroksydazy. Procedura wykonania jest
opisana w kaŜdym z zestawów.
Automatyzacja:
Autostainer.
Wyniki barwienia
Nadaje się do barwienia immunohistochemicznego w automatach, takich jak Dako
Komórki wyznakowane przeciwciałem wykazują ziarnisty wzór barwienia, ograniczony do cytoplazmy.
Normalne tkanki: znakuje komórki środbłonka i megakariocyty.
Nieprawidłowe tkanki: znakuje komórki blastyczne w 3/3 przypadków ostrej białaczki megakariocytarnej,
natomiast w 4/4 przypadkach komórki blastyczne ostrej mielofibrozy nie wiązały przeciwciała (2). znakuje
dysplastyczną megakariopoezę w zespołach mielodysplastycznych i mikromegakariocyty w przewlekłej
białaczce szpikowej, a takŜe pleomorficzne duŜe megakariocyty obserwowane w trombocytopenii, czerwienicy
prawdziwej i przewlekłym megakariocytarno-granulocytarnym przeroście szpiku. (5). Przeciwciało uwidacznia
komórki środbłonka, a zatem jest przydatne do określania gęstości mikronaczyń (1, 6).
Piśmiennictwo
1. Padró T, Ruiz S, Bieker R, Bürger H, Steins M, Kienast J, et al. Increased angiogenesis in the bone marrow
of patients with acute myeloid leukemia. Blood 2000;95:2637-44.
2. Hruban RH, Kuhajda FP, Mann RB. Acute Myelofibrosis. Immunohistochemical study of four cases and
comparison with acute megakaryocytic leukemia. Am J Clin Pathol 1987;88:578-88.
3. Naiem M, Gerdes J, Abdulaziz Z, Sunderland CA, Allington MJ, Stein H, et al. The value of
immunohistological screening in the production of monoclonal antibodies. J Immunol Methods
1982;50:145-60.
4. Denis CV. Molecular and cellular biology of von Willebrand factor. Int J Hematol 2002;75:3-8.
5. Werner M, Kaloutsi V, Walter K, Buhr T, Bernhards J, Georgii A. Immunohistochemical examination of
routinely processed bone marrow biopsies. Path Res Pract 1992;188:707-13.
6. Tomita M, Matsuzaki Y, Onitsuka T. Effect of mast cells on tumour angiogenesis in lung cancer. Ann
Thorac Surg 2000;69:1686-90.
Objaśnienia symboli
(108589-004)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
ZuŜyć przed
Producent
M 0616/PL/HEW/29.07.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17