BACTEC 12B Mycobacteria Culture Vials Middlebrook 7H12

0BACTEC 12B Mycobacteria
Culture Vials Middlebrook 7H12
8
PP116JAA
2010/07
Polski
PRZEZNACZENIE
Po¿ywkê do hodowli jakoœciowej pr¹tków (Mycobacterium) – 12B Mycobacteria Medium BACTEC – zaleca siê stosowaæ do
hodowli i uzyskiwania pr¹tków z próbek klinicznych, plwociny, p³ynu ¿o³¹dkowego, moczu, tkanek, próbek œluzowo-ropnych,
innych cieczy ustrojowych i innych wydzielin z dróg oddechowych oraz do ró¿nicowania kompleksu pr¹tka gruŸlicy
(Mycobacterium tuberculosis) od innych pr¹tków i do badania wra¿liwoœci na lek M. tuberculosis.
STRESZCZENIE I OBJAŒNIENIE
Technikê radiometryczn¹ BACTEC stosuje siê szeroko do szybkiego uzyskiwania wyników hodowli plwociny i innych próbek
klinicznych pod k¹tem obecnoœci pr¹tków1-4. Do pierwotnego izolowania technik¹ BACTEC w sposób podobny do procedur
konwencjonalnych nadaj¹ siê wszelkiego rodzaju próbki kliniczne pochodz¹ce z p³uc, jak równie¿ spoza p³uc2,5-7. Szczegó³y
mo¿na znaleŸæ w podrêczniku CDC w rozdziale na temat procedury izolowania i identyfikowania pr¹tków Mycobacterium3.
Badan¹ próbkê inokuluje siê do jednej lub wiêcej ni¿ jednej fiolki z po¿ywk¹ 12B Mycobacteria Medium, strzykawk¹ przez
gumow¹ przegrodê, i poddaje inkubacji. Fiolkê z hodowl¹ okresowo umieszcza siê w aparacie systemu 460TB BACTEC celem
przeprowadzenia badañ, polegaj¹cych na aspiracji gazu z przestrzeni górnej czêœci fiolki i analizie jego zawartoœci
radioaktywnej. Odczyt dodatni wskazuje na przypuszczaln¹ obecnoœæ w fiolce ¿ywych drobnoustrojów.
ZASADY PROCEDURY
12B Mycobacteria Medium BACTEC jest wzbogaconym pod³o¿em bulionowym Middlebrook 7H9. Je¿eli w próbce badanej,
inokulowanej do fiolki BACTEC, obecne s¹ drobnoustroje, wykorzystuj¹ one znajduj¹cy siê w po¿ywce substrat (kwas
t³uszczowy) wyznakowany 14C i uwalniaj¹ do atmosfery ponad po¿ywk¹ 14CO2. Przy badaniu fiolek w aparacie systemu
460TB BACTEC dochodzi do aspiracji gazu z fiolki i iloœciowego oznaczenia radioaktywnoœci 14CO2 w liczbach w skali od 0 do
999. Liczby te okreœla siê mianem indeksu wzrostu (GI, Growth Index). Aparat systemu 460TB BACTEC wyœwietla GI i drukuje
go wraz z identyfikacyjnymi numerami tacy i fiolki (100 jednostek GI odpowiada w przybli¿eniu 0,025 µCi). Dzienny przyrost
GI jest wprost proporcjonalny do prêdkoœci i iloœci wzrostu w po¿ywce.
Je¿eli do po¿ywki wprowadzi siê œrodek hamuj¹cy wzrost, na zahamowanie metabolizmu wskazuje zmniejszenie
wytwarzania 14CO2 w porównaniu z kontrol¹ niezawieraj¹c¹ œrodka hamuj¹cego wzrost. Tê podstawow¹ zasadê
wykorzystuje siê w badaniach wra¿liwoœci na leki i w ró¿nicowaniu kompleksu M. tuberculosis od innych pr¹tków.
Aparat systemu 460TB BACTEC przy stosowaniu w mikobakteriologii (diagnostyce gruŸlicy) nale¿y stosowaæ ze specjalnym
kapturem TB. Kaptur TB zapewnia filtracjê HEPA powietrza wychodz¹cego i ujemne ciœnienie w obszarze badania. Ponadto
kaptur TB jest zaopatrzony w Ÿród³o œwiat³a ultrafioletowego w obszarze badania. Jednostka przeznaczona jest do
automatycznego badania fiolek i nie wolno jej u¿ywaæ do inokulacji ani podhodowli zamiast komory bezpieczeñstwa
mikrobiologicznego.
ODCZYNNIKI
Fiolki do hodowli 12B Medium BACTEC przed przeprowadzeniem badania zawieraj¹ nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki:
IloϾ dodawana na litr wody destylowanej
Bulion 7H9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4,7 g
Hydrolizat kazeiny . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 g
Bydlêca albumina surowicy . . . . . . . . . . . . 5,0 g
Katalaza . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48 000 jednostek
Substrat 14C . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 000 µCi
Sk³ad mo¿e byæ dostosowany do wymagañ specyficznego badania.
Ostrze¿enia i œrodki ostro¿noœci:
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny.
W próbkach klinicznych mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirus zapalenia w¹troby typu B i wirus HIV.
Przy kontakcie z ka¿dym materia³em zanieczyszczonym krwi¹ lub innymi p³ynami ustrojowymi nale¿y przestrzegaæ
„Uniwersalnych œrodków ostro¿noœci”8-11 i zaleceñ obowi¹zuj¹cych w danej instytucji.
Wszystkie procedury, w tym obróbkê próbek, przygotowanie rozmazów, przygotowanie inokulum, sporz¹dzenie
rozcieñczenia, inokulacjê po¿ywki, podhodowlê itp. nale¿y w miarê mo¿liwoœci wykonywaæ w komorze bezpieczeñstwa
mikrobiologicznego w pomieszczeniu z odpowiednim systemem wentylacji zalecanym przez CDC3. Przy kontakcie z próbkami
i hodowlami potencjalnych patogenów nale¿y stosowaæ odpowiedni¹ odzie¿ ochronn¹, w³¹czaj¹c w to rêkawiczki i maski.
Stosowaæ siê do zaleceñ CDC i OSHA.
Przed u¿yciem ka¿da butelka powinna byæ zbadana pod k¹tem œladów zniszczenia, zanieczyszczenia lub przecieku, takich
jak œciemnienie, uwypuklenie lub zapadniêcie siê przegrody. NIE U¯YWAÆ fiolek z cechami zanieczyszczenia. W fiolce
z zanieczyszczeniami mo¿e dojœæ do zwiêkszenia ciœnienia. Zanieczyszczenie butelki mo¿e nie byæ ³atwo widoczne.
Nie u¿ywaæ fiolek do hodowli, je¿eli wykazuj¹ zmêtnienia zanieczyszczenia lub zmianê koloru (œciemnienie); fiolki utylizowaæ
w odpowiedni sposób. Fiolki z cechami uszkodzenia nale¿y wyrzuciæ przed inokulacj¹. W rzadkich przypadkach szyjka fiolki
mo¿e byæ pêkniêta i mo¿e od³amaæ siê podczas zdejmowania pokrywki albo w czasie obs³ugi. Tak¿e w rzadkich przypadkach
fiolka mo¿e nie byæ zamkniêta wystarczaj¹co szczelnie. W obu takich przypadkach zawartoœæ fiolki mo¿e wyciekaæ lub rozlaæ
siê, zw³aszcza przy odwróceniu fiolki do góry dnem. Jeœli fiolka by³a inokulowana, materia³, który wyciek³ lub rozla³ siê nale¿y
traktowaæ z ostro¿noœci¹ ze wzglêdu na to, ¿e mo¿e on zawieraæ patogenne drobnoustroje/czynniki. Przed utylizacj¹ nale¿y
wysterylizowaæ wszystkie inokulowane fiolki w autoklawie.
Fiolki z hodowl¹, która da³a wynik dodatni, do podhodowli, barwienia itd.: Przed pobraniem próbki nale¿y wypuœciæ gaz,
który czêsto jest wytwarzany w wyniku metabolizmu bakterii. Inokulacjê i pobieranie próbek nale¿y w miarê mo¿liwoœci
wykonywaæ w kabinie bezpieczeñstwa mikrobiologicznego w odpowiedniej odzie¿y ochronnej, w³¹czaj¹c w to rêkawiczki
i maski. Dodatkowe informacje na temat podhodowli – zob. rozdzia³ Procedury.
Aby zminimalizowaæ potencjalny wyciek podczas inokulacji próbki do fiolki do hodowli, nale¿y u¿yæ koñcówek z za³o¿onymi
na sta³e ig³ami lub zakoñczeñ Luer-Lok.
Przy ka¿dym wprowadzaniu fiolki nale¿y odka¿aæ gumow¹ przegrodê fiolki. Wierzcho³ek ka¿dej fiolki oczyœciæ œrodkiem
odka¿aj¹cym i nastêpnie 70% alkoholem. Do oczyszczania obszaru roboczego i przecierania przegrody fiolki i innych
powierzchni stosowaæ odpowiedni œrodek odka¿aj¹cy. CDC stwierdza: „Zwa¿ywszy na du¿¹ liczbê dostêpnych œrodków
odka¿aj¹cych, nale¿y zapoznaæ siê z broszur¹ informacyjn¹ produktu i sprawdziæ, czy dany œrodek odka¿aj¹cy wykazuje
dzia³anie bakteriobójcze wobec pr¹tków”12.
Praca ze strzykawk¹ i ig³¹ wymaga szczególnej uwagi i zachowania œrodków ostro¿noœci. Stosowaæ strzykawki z ig³ami
przymocowanymi na sta³e lub bezpiecznie zatrzaœniêtych zakoñczeñ Luer-Lok. Ze strzykawk¹ obchodziæ siê z nale¿yt¹
ostro¿noœci¹. Po u¿yciu nie nak³adaæ z powrotem nak³adki na ig³ê. Strzykawki wyrzucaæ do specjalnych pojemników na ostre
przedmioty; z pojemnikami z wyrzuconymi strzykawkami obchodziæ siê ostro¿nie. Zob. zatwierdzone zalecenia NCCLS M29
o ochronie pracowników laboratoriów przed zaka¿eniami zawodowymi „Protection of Laboratory Workers from
Occupationally Acquired Infections”8.
Instrukcja przechowywania
Fiolki z po¿ywk¹ 12B do hodowli pr¹tków BACTEC nale¿y przechowywaæ w temperaturze 2 – 25°C w suchym miejscu.
W zalecanych warunkach przechowywania fiolki z po¿ywk¹ zachowuj¹ stabilnoœæ do up³ywu daty wa¿noœci, podanej na
etykiecie.
Dobr¹ praktyk¹ jest segregowanie materia³u radioaktywnego i sk³adowanie go w pomieszczeniu, do którego dostêp maj¹
tylko osoby upowa¿nione. Pomieszczenie nale¿y oznaczyæ napisem „Uwaga! Materia³y radioaktywne!”.
Nie wystawiaæ po¿ywki na bezpoœrednie dzia³anie silnego œwiat³a. Zawsze najpierw badaæ ka¿d¹ fiolkê 12B na aparacie
systemu 460TB BACTEC w celu ustalenia w fiolce atmosfery 5 – 10% CO2 i wykluczenia z badañ fiolek z du¿ym odczytem t³a.
Fiolki, w których we wstêpnym badaniu uzyskuje siê wynik GI wynosz¹cy 20 lub wiêcej, nale¿y wyrzuciæ.
POBIERANIE PRÓBKI
Pobieranie i obróbkê próbek nale¿y prowadziæ rutynowymi sposobami, opisanymi odpowiednio w podrêczniku CDC3 oraz
w instrukcji procedury i produktu systemu 460TB BACTEC (MA-0029).
PROCEDURA
Dostarczane materia³y:
Po¿ywka 12B BACTEC
Materia³y niezbêdne, ale niedostarczane:
Zestaw PANTA PLUS BACTEC
Zestaw do ró¿nicowania NAP BACTEC
Aparat 460TB BACTEC
Strzykawka tuberkulinowa z ig³¹ zamocowan¹ na sta³e
Roztwór œrodka odka¿aj¹cego
Wacik nas¹czony 70% alkoholem izopropylowym
Ja³owa ig³a z filtrem
Obróbka próbki: Zaleca siê wiele procedur trawienia i dekontaminacji; s¹ one przestrzegane w poszczególnych laboratoriach.
O niektórych procedurach wiadomo, ¿e nadaj¹ siê do zastosowania tylko do po¿ywek na bazie jaj, natomiast nie s¹
odpowiednie do zastosowania przy metodzie BACTEC. Do systemu 460TB BACTEC zaleca siê metodê wodorotlenku
sodowego (NaOH) i N-acetylo-L-cysteino-NaOH (NALC). Byæ mo¿e istniej¹ inne metody nadaj¹ce siê do zastosowania
w metodzie BACTEC, lecz nie ma dostatecznych danych, które by to ostatecznie potwierdza³y.
W przypadku próbek pobieranych aseptycznie nie ma potrzeby przeprowadzania procedury dekontaminacji. Szczegó³y
– zob. instrukcjê dotycz¹c¹ procedury i produktu systemu 460TB BACTEC.
Inokulacja po¿ywki 12B: Przed inokulacj¹ nale¿y usun¹æ nakrêtkê ze szczytu fiolki i sprawdziæ fiolkê pod wzglêdem pêkniêæ,
zanieczyszczenia, nadmiernego zmêtnienia i uwypuklenia lub przeciêtych przegród. NIE NALE¯Y U¯YWAÆ, je¿eli zauwa¿y siê
jakieœ uszkodzenie.
Zbadaæ wszystkie fiolki z po¿ywk¹ 12B w aparacie systemu 460TB BACTEC, aby wyeliminowaæ fiolki o du¿ym poziomie
odczytu t³a (GI 20) i ustanowiæ w fiolkach atmosferê wzbogacon¹ w CO2.
Po¿ywkê 12B mo¿na stosowaæ jako jedyn¹ po¿ywkê do uzyskiwania pr¹tków. W celu maksymalnego odzysku pr¹tków wraz
z fiolk¹ 12B mo¿na jednak inokulowaæ jedn¹ probówkê po¿ywki Lowensteina-Jensena (LJ), innych modyfikacji po¿ywki LJ lub
7H10/7H11 (p³ytka zwyk³a lub podwójna)13. Decyzjê o tym, czy u¿ywaæ tylko po¿ywki 12B czy tak¿e dodatkowych po¿ywek
konwencjonalnych, nale¿y podj¹æ po rozwa¿eniu doœwiadczeñ w³asnych i wymagañ danej instytucji oraz danych
z piœmiennictwa4-7,14,15.
Zanieczyszczenie mo¿na zmniejszyæ poprzez dodanie do po¿ywki przed inokulacj¹ mieszaniny œrodków przeciwko
drobnoustrojom16 PANTA. Jest to dodatek zawieraj¹cy polimiksynê B, amfoterycynê B, kwas nalidyksowy, trimetoprim
i azlocylinê, dostêpny w postaci liofilizowanej (szczegó³y mo¿na znaleŸæ w instrukcji dotycz¹cej procedury i produktu systemu
460TB BACTEC). Inokulacji próbki trzeba dokonaæ w ci¹gu 2 h od dodania PANTA do fiolki z po¿ywk¹ 12B. Ciecz do
2
rozprowadzania (RF, Reconstituting Fluid) zawiera substancjê sprzyjaj¹c¹ wzrostowi: POES (stearynian polioksoetylenu)17.
Je¿eli zatem nie u¿ywa siê PANTA, zaleca siê przed inokulacj¹ próbki dodaæ do po¿ywki 12B 0,1 mL samego RF.
Now¹, ja³ow¹ strzykawk¹ z zamocowan¹ na sta³e ig³¹ lub z koñcówk¹ Luer-Lok, oddzieln¹ dla ka¿dej próbki, inokulowaæ
0,5 mL dobrze zmieszanego koncentratu próbki do ka¿dej fiolki po¿ywki 12B. Wiêksza objêtoœæ zaburzy³aby pH po¿ywki
ze wzglêdu na wysokie pH inokulum. Jeœli jednak próbki zosta³y pobrane aseptycznie i nie s¹ zanieczyszczone, mo¿na
inokulowaæ a¿ 1,0 mL. Objêtoœæ wiêksza ni¿ 1,0 mL spowodowa³aby rozcieñczenie po¿ywki, co mog³oby wp³yn¹æ na wzrost.
Gumow¹ przegrodê ka¿dej fiolki odkaziæ odpowiednim œrodkiem odka¿aj¹cym po inokulacji lub po pobraniu porcji
z inokulowanej fiolki, a nastêpnie oczyœciæ j¹ wacikiem nas¹czonym 70% alkoholem.
Inokulowane fiolki nale¿y inkubowaæ w temperaturze 37° ±1°C, nie wstrz¹saj¹c, i badaæ w aparacie systemu 460TB BACTEC
z zawartoœci¹ 5 – 10% CO2 w powietrzu. Fiolki badaæ co 2 – 3 dni przez pierwsze dwa tygodnie i potem co tydzieñ, w sumie
przez szeœæ tygodni. Schemat badania mo¿e byæ ró¿ny w zale¿noœci od obci¹¿enia laboratorium prac¹.
Je¿eli podejrzewa siê, ¿e próbka zawiera pr¹tki wymagaj¹ce optymalnej temperatury innej ni¿ 37°C, (np. M. marinum
i M. chelonae wymagaj¹ temperatury 30°C), nale¿y inokulowaæ dwa zestawy po¿ywek i jedn¹ inkubowaæ w temperaturze
37°C, a drug¹ w temperaturze optymalnej.
Z fiolki z po¿ywk¹ 12B BACTEC przy GI 50–100 sporz¹dziæ rozmaz. Je¿eli jest on dodatni pod wzglêdem AFB, wydaæ wynik
jako „wynik hodowli dodatni, identyfikacja zostanie ukoñczona w terminie póŸniejszym”. Wykonaæ podhodowlê na po¿ywce
sta³ej. Podhodowlê inkubowaæ w temperaturze 37°±1°C.
Ró¿nicowanie TB: Gdy fiolka z po¿ywk¹ 12B osi¹gnie wartoœæ GI = 50, wykonaæ test NAP BACTEC wed³ug zalecanej
procedury. Procedura pozwala rozró¿niæ kompleks TB od pr¹tków innych ni¿ pr¹tek gruŸlicy (MOTT, „mycobacteria other
than tuberculosis”).
Oznaczenie gatunku pr¹tka nale¿y wykonaæ technik¹ konwencjonaln¹ zgodnie z zaleceniami Oœrodków Zwalczania Chorób
i Profilaktyki (Centers for Disease Control and Prevention)3
Podhodowla: Przed wykonaniem podhodowli ustawiæ fiolkê pionowo i umieœciæ wacik nasycony alkoholem nad przegrod¹.
Aby obni¿yæ ciœnienie w fiolce, wbiæ steryln¹ ig³ê z odpowiednim filtrem lub wacikiem poprzez wacik i przegrodê. Ig³a
powinna byæ usuniêta bezpoœrednio po obini¿eniu ciœnienia i przed pobraniem próbki z fiolki do podhodowli. Wk³ucie
i wycofanie ig³y nale¿y wykonaæ w linii prostej, unikaj¹c jakichkolwiek ruchów obrotowych.
Badanie wra¿liwoœci na leki: Badanie wra¿liwoœci M. tuberculosis na leki mo¿na rozpocz¹æ po osi¹gniêciu GI 300 +1
dodatkowy dzieñ inkubacji, lub przy GI ≥ 500 (szczegó³y – zob. instrukcjê procedury i produktu dotycz¹c¹ systemu
460TB BACTEC).
KONTROLA JAKOŒCI
NIE U¯YWAÆ fiolek do hodowli po up³ywie ich daty wa¿noœci.
NIE U¯YWAÆ fiolek hodowlanych, które wykazuj¹ pêkniêcia lub defekty; utylizowaæ fiolkê w odpowiedni sposób.
Z ka¿dym opakowaniem kartonowym pod³o¿y dostarczane s¹ certyfikaty kontroli jakoœci. W certyfikatach kontroli jakoœci
podane s¹ nazwy drobnoustrojów u¿ywanych do badañ, w tym hodowle ATCC wyszczególnione w normie NCCLS Quality
Assurance for Commercially Prepared Microbiological Culture Media (gwarancja jakoœci dla przygotowanych do handlu
po¿ywek hodowlanych)18.
W ramach codziennej kontroli nale¿y badaæ na aparacie BACTEC fiolki do badania wydajnoœci (BACTEC Performance Test
Kit). Uzyskanie niskiego odczytu, je¿eli fiolki do badania wydajnoœci zbadano prawid³owo, wskazuje na mo¿liwoœæ awarii
aparatu (zob. ulotkê do opakowania PTK BACTEC PP-046JAA).
Nale¿y spe³niaæ wymagania co do kontroli jakoœci zgodnie z odpowiednimi przepisami miejscowymi, krajowymi i/lub
federalnymi lub wymaganiami akredytacji laboratorium i jego standardowymi procedurami kontroli jakoœci. U¿ytkownikowi
zaleca siê zapoznanie siê z odpowiednimi zaleceniami NCCLS i przepisami CLIA w zakresie przeprowadzania kontroli jakoœci.
WYNIKI
Aparat daje odczyty bezpoœrednio w skali 0–999 (GI, Growth Index – indeks wzrostu). Wyniku nie trzeba przeliczaæ. Indeks
wzrostu jest miar¹ radioaktywnoœci 14CO2 aspirowanego do komory jonizacyjnej i jest wprost proporcjonalny do aktywnego
wzrostu w fiolce.
Aktualne przepisy federalne (CLIA '88) wymagaj¹, aby wydrukom wyników badania z aparatu towarzyszy³a odpowiednia
próbka pobrana od pacjenta. Wydruki nale¿y przechowywaæ przez co najmniej dwa lata. Przepisy miejscowe lub krajowe
mog¹ byæ bardziej restrykcyjne ni¿ przepisy federalne: prosimy zapoznaæ siê z nimi w zakresie ewentualnych dodatkowych
wymogów.
Gdy GI osi¹gnie wartoœæ 10 lub wy¿sz¹, wynik hodowli nale¿y uznaæ za „przypuszczalnie H dodatni” i fiolkê nale¿y badaæ
codziennie. Dla potwierdzenia obecnoœci pr¹tków istotne znaczenie ma rozmaz AFB. Po zaobserwowaniu AFB w rozmazie
z fiolki, dla której wynik by³ dodatni, mo¿na wydaæ wynik „hodowla dodatnia pod wzglêdem AFB; identyfikacja zostania
dokonana w terminie póŸniejszym”. Ujemny wynik hodowli mo¿na wydaæ po up³ywie szeœciu tygodni inkubacji.
Czas wykrywania dla hodowli dodatnich wykazuje znaczne ró¿nice w zale¿noœci od czynników takich, jak typ próbki, liczba
drobnoustrojów w próbce, stan leczenia pacjenta i temperatura inkubacji. Istotn¹ rolê w czasie wykrywania odgrywaj¹
ró¿nice w procedurze, zw³aszcza sposób dekontaminacji. Œredni czas wykrywania dla M. tuberculosis z próbek klinicznych
(z ujemnym wynikiem rozmazu i z dodatnim wynikiem rozmazu) wynosi wed³ug piœmiennictwa od 7 do 12 dni. Pr¹tki MOTT
wykrywa siê zwykle 2 – 3 dni wczeœniej ni¿ M. tuberculosis4,6,7,14,15.
Czêstoœæ wystêpowania zanieczyszczenia jest ró¿na w ró¿nych laboratoriach i zale¿y od stosowanej procedury dekontaminacji.
Zanieczyszczenie w fiolce 12B do izolowania jest zwykle mniejsze ni¿ obserwowane w po¿ywkach konwencjonalnych, w których
dopuszcza siê zanieczyszczenie do 5%. Prowadziæ rejestr zanieczyszczeñ i okresowo obliczaæ odsetek zanieczyszczenia.
Ponownie rozwa¿yæ protokó³ obróbki i ewentualnie dokonaæ niezbêdnych modyfikacji. Zanieczyszczon¹ fiolkê z po¿ywk¹ 12B
mo¿na poddaæ ponownej obróbce; procedura – zob. instrukcjê procedury i produktu dotycz¹c¹ systemu 460TB BACTEC.
3
OGRANICZENIA PROCEDURY
Nale¿y przedsiêwzi¹æ œrodki ostro¿noœci, aby zapobiec kontaminacji podczas pobierania i inokulacji do fiolki BACTEC.
Zanieczyszczona próbka da odczyt dodatni, co jednak nie oznacza wyniku istotnego klinicznie. Takie ustalenie musi byæ
wykonane przez u¿ytkownika na podstawie takich czynników jak: typ wykrytych drobnoustrojów, wystêpowanie tego
samego drobnoustroju w wielu hodowlach, historia choroby pacjenta, odpowiednie kontrole aparatury itp. Zanieczyszczenie
mo¿e byæ tak¿e skutkiem nieprawid³owej konserwacji igie³ i przewodów BACTEC, niedostatecznego oczyszczania lub
nieprawid³owego dzia³ania jednostki grzewczej igie³ BACTEC (zob. instrukcjê obs³ugi i konserwacji 460TB BACTEC).
Poziom GI odzwierciedla prêdkoœæ i iloœæ wzrostu w po¿ywce, lecz nie mo¿na go oceniæ iloœciowo tak dok³adnie, jak liczby
kolonii na po¿ywce sta³ej. Morfologia oraz pigmentacja kolonii mo¿e byæ ustalana tylko na po¿ywkach sta³ych.
Z powodu charakteru materia³u biologicznego zawartego w pod³o¿ach i naturalnej ró¿norodnoœci organizmów u¿ytkownik
powinien zdawaæ sobie sprawê z potencjalnej ró¿norodnoœci wyników przy wzroœcie niektórych drobnoustrojów.
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA
W badaniu przeprowadzonym przez Tortoli i wsp. Porównywano odzyskiwanie pr¹tków w dwóch systemach automatycznych
i jednym systemie manualnym. W systemie 460 BACTEC z zastosowaniem po¿ywki 12B uzyskano 201 izolatów w porównaniu
ze 190 izolatami w systemie MGIT 960 BACTEC i 167 izolatami w po¿ywce Lowensteina-Jensena. Œredni czas wykrywania przy
zastosowaniu systemu 460 BACTEC i po¿ywki 12B wynosi³ 14,8 dnia19.
TABELA 1. Odzyskiwanie pr¹tków w poszczególnych systemach i kombinacjach systemówa
Ca³kowita liczba odzyskanych drobnoustrojów (%)
Pr¹tek lub
próbka
Wszystkie
Wszystkie
po¿ywki
System
MGIT
960
BACTEC
System
BACTEC
460
Po¿ywka
LowensteinaJensena
System MGIT
System 460
960 BACTEC +
BACTEC+ po¿ywka
po¿ywka
LowensteinaLowensteina-Jensena
Jensena
236
190 (80)
201 (85)
167 (71)
212 (90)
225 (95)
Kompleks M. tuberculosis 169
149 (88)
153 (92)
124 (74)
158 (94)
160 (95)
M. xenopi
24
13 (54)
11 (46)
17 (71)
21 (87)
22 (92)
Kompleks M. avium
22
21 (95)
22 (100)
16 (73)
21 (95)
22 (100)
Inne MOTTb
21
7 (33)
15 (71)
10 (48)
12 (57)
Z dodatnim wynikiem
rozmazu
228
122 (53)
121 (53)
103 (45)
125 (55)
127 (56)
Z ujemnym wynikiem
rozmazu
108
68 (63)
80 (74)
64 (59)
87 (80)
98 (91)
a
b
21 (100)
Czêœciej wystêpuj¹ce jednostki taksonomiczne ujêto oddzielnie, podobnie jak próbki z dodatnim wynikiem rozmazu i próbki z ujemnym
wynikiem rozmazu.
b MOTT: pr¹tki inne ni¿ M. tuberculosis.
DOSTÊPNOŒÆ
Nr kat.
Opis
442004
Po¿ywka 12B BACTEC, 4 mL, 100 na opakowanie kartonowe
444764
Zestaw PANTA Plus BACTEC, liofilizowany suplement o dzia³aniu przeciwko drobnoustrojom (PANTA), 5 fiolek,
ciecz do rozprowadzania;10 mL, 5 fiolek
442103
Zestaw do ró¿nicowania NAP BACTEC, 5 µg NAP na fiolkê, 10 fiolek na opakowanie kartonowe
445203
Aparat systemu 460TB BACTEC
442102
Zestaw leków SIRE BACTEC (100 testów)
442104
P³yn do rozcieñczania BACTEC (10 testów)
442146
Izoniazyd – 1 fiolka
442139
Po¿ywka testowa PZA (5 testów)
442143
Lek/ciecz do rozprowadzania PZA (50 testów)
PIŒMIENNICTWO
1.
Middlebrook, G. et al. Automated radiometric detection of growth of Mycobacterium tuberculosis in selective
media. Am. Rev. Respir. Dis. 115: 1066-1069, 1977.
2.
Bannister, E.R. et al. Comparison of detection, identification and drug susceptibility testing of mycobacteria
by using the BACTEC radiometric method and conventional methods. Abstract C260, A.S.M. Annual Meeting,
Las Vegas, 1985.
3.
Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease
Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, 1985.
4.
Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug
susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin.
Microbiol. 18:689-696, 1983.
5.
Fadda, G. et al. Recovery and susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from extrapulmonary
specimens by the BACTEC radiometric method. J. Clin. Microbiol. 19:720-721, 1984.
4
6.
Morgan, M.A. et al. Comparison of a radiometric method (BACTEC) and conventional culture media for
recovery of mycobacteria from smear-negative specimens. J. Clin. Microbiol. 18:384-388, 1983.
7.
Takahashi, H. et al. Detection and recovery of mycobacteria by a radiometric procedure. J. Clin. Microbiol.
17:380-381, 1983.
8.
National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of
laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, PA.
9.
Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and
Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals.
Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80.
10.
U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical
laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.
11.
Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection
of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the
meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
12.
Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology: Centrifugal efficiency and digestant toxicity. Abstract U-2.
A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984.
13.
Libonati, J.P. et al. The role of solid media in the BACTEC system for mycobacterial isolation and identification.
Abstract U-71. A.S.M. Meeting, Atlanta, GA, 1987.
14.
Kirihara, J. M. et al. Improved detection times of Mycobacterium avium complex and M. tuberculosis with the
BACTEC radiometric system. J. Clin. Microbiol. 22:841-845, 1985.
15.
Park, C.H. et al. Rapid recovery of mycobacteria from clinical specimens using automated radiometric
technique. Am. J. Clin. Path. 81:341-345, 1984.
16.
Siddiqi, S.H. et al. A new antimicrobial mixture (polymyxin B, amphotericin B, nalidixic acid, trimethoprim and
azlocillin) for effective suppression of non-mycobacterial contamination during primary isolation of
mycobacteria. Abstract U-35. A.S.M. Meeting, Washington, D.C., 1986.
17.
Siddiqi, S.H. Studies to further enhance mycobacterial growth in radiometric 7H12 Medium. Abstract U-46.
A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, NV, 1985.
18.
National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1996. Approved Standard M22-A2, Quality assurance
for commercially prepared microbiological culture media, 2nd ed., NCCLS, Wayne, PA.
19.
Tortoli, E., P. Cinchero, C. Piersimoni, M.T. Simonetti, G. Gesu, and D. Nista. 1999. Use of BACTEC MGIT 960 for
recovery of mycobacteria for clinical specimens: multicenter study. J. Clin Microbiol. 37:3578-3582.
5
6
%
O
$
Becton, Dickinson and Company
7 Loveton Circle
Sparks, MD 21152 USA
800-638-8663
www.bd.com/ds
Benex Limited
Rineanna House
Shannon Free Zone
Shannon, County Clare, Ireland
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
BD, BD Logo, BACTEC, Luer-Lok, MGIT and PANTA are trademarks of Becton, Dickinson and Company. ©2010 BD.