Monoclonal Mouse Anti-Human Carcinoembryonic Antigen

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Carcinoembryonic Antigen
Klon II-7
Nr kat. M 7072
Wydanie 20.01.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Carcinoembryonic Antigen (CEA), klon II-7, jest przeznaczony do użycia w
immunocytochemii. Przeciwciało znakuje CEA-pozytywne glikokaliksowe powierzchnie komórek układu
pokarmowego i jest użyteczne w identyfikacji raków okrężnicy (1). Dodatkowo przeciwciało znakuje
charakterystyczną ekspresję CEA w przypadkach oponiaków wydzielniczych (2). Diagnostyka różnicowa
powinna być oparta o cały szereg reakcji z różnorodnymi przeciwciałami. Interpretację wyników może
dokonywać osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu chorobowego i innych badań diagnostycznych.
Wstęp
CEA jest jednym z członków oncofetalnej, heterogennej rodziny glikoprotein (3) określanych jako CD66 (4).
Rodzina ta zawiera ponad 17 blisko spokrewnionych genów należących do nadrodziny immunoglobin.(4). CEA jest
normalnie obecne w czasie życia płodowego lecz także czasami występuje w małych ilościach u dorosłych, lecz w
przypadkach niektórych zmian złośliwych szczególnie guzów nabłonkowych jego stężenie znacząco rośnie(3).
Część białkowa CEA zawiera pojedynczy łańcuch polipeptydowy, zawierający 107 aminokwasów w NH-końcowej
domenie oraz trzy wysoce homologiczne domeny 178 aminokwasowe. CEA jest wydzielane w powierzchniach
giykokaliksowych układu pokarmowego przeto jest najczęściej związane z rakami przewodu pokarmowego (5) –
np. adenocarcinoma okrężnicy, żołądka, trzustki. Dodatkowo stwierdzono CEA w adenocarcinoma płuca i sutka
(6). 
Odczynniki dostarczone
Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczone jest w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
oczyszczony przez dializę z 0.05 mol/L buforem Tris/HCl, pH 7.2, i zawiera 15 mmol/L NaN3.
Klon: II-7 (3). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiego IgG : patrz etykieta na opakowaniu.
Immunogen
Oczyszczone ludzkie CEA z przerzutów do wątroby adenocarcinoma płuca (3).
Swoistość
W ELISA, przeciwciało reaguje z CEA preparowanym z komórek linii raka okrężnicy/odbytnicy,
adenocarcinoma płuca oraz komórek raka okrężnicy linii LS 174T, podczas gdy przeciwciało nie reaguje z
izolowanym CEA-odpowiadającym antygenem np.: NCA-55, NCA-95, NCA-160 oraz BGP I (3). W oparciu o
ELISA, używając zredukowanego karboksymetylowanego i degradowanego metodą Smith’a CEA, przeciwciało
jest zdolne do reakcji z konformacyjnie zależnym epitopem, w który włączone są struktury węglowodanowe
glikoproteiny CEA. (3).
Używając konkurencyjne immunooznaczanie na tzw „solid-phase”, przeciwciało monoklonalne anty- CEA zostało
zakwalifikowane do pięciu niezbędnych, nie ulegającym interakcji grup epitopów nazywanych GOLD 1-5.
Przeciwciało monoklonalne o wysokim stopniu specyficzności względem CEA zasadniczo należy do epitopu grup
GOLD 1 lub 3. Monoclonal Mouse Anti-Human Carcinoembryonic Antigen (CEA), Clone II-7, należy do grupy
epitopu GOLD 1 (7).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8C. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe : Przeciwciało może być stosowane do znakowania tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Niezbędne jest odzyskiwanie antygenowości metodą HIER (heat-induced epitope
retrieval). Najlepsze wyniki otrzymuje się po zastosowaniu Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, Dako
Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, 10 mmol/L bufor cytrynianowy, pH 6.0, lub 10 mmol/L bufor
Tris z 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Stwierdzono że, trawienie Proteinazą K jest mniej skuteczne. Nie należy
dopuszczać do wysuszenia tkanki w czasie całej procedury barwienia immunocytochemicznego.
Skrawki mrożone i preparaty komórkowe : Przeciwciało można stosować do reakcji na preparatach z tkanek
mrożonych i rozmazach komórkowych (1, 8).
(108556-002)
M 7072/PL/HEW/20.01.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Procedura barwienia
Rozcieńczenie : Monoclonal Mouse Anti-Human Carcinoembryonic Antigen (CEA), nr kat. M 7072, może być
używane w rozcieńczeniu 1:25-1:50 , po zastosowaniu na utrwalanych w formalinie, zatapianych w parafinie
skrawkach z nornalnej ludzkiej okrężnicy lub raka okrężnicy stosując 20 minut procedurę HIER w Dako Target
Retrieval Solution, nr kat. S 1700, oraz 30 minut inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwszym
przeciwciałem. Optymalne warunki są zależne od rodzaju tkanki oraz zastosowanych metod preparatyki i dlatego
też niezbędne jest ich indywidualne określenie dla każdego laboratorium. Zaleca się stosowanie jako kontroli
negatywnej Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczone do takiego samego stężenia IgG jak pierwsze
przeciwciało. Jeżeli nie udowodniono trwałości przeciwciała i kontroli negatywnej w danej metodzie zaleca się ich
rozcieńczanie tuż przed użyciem, lub zastosowanie do rozcieńczania Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Kontrole pozytywną i negatywną należy wykonywać równolegle z barwieniem materiału tkankowego pobranego od
pacjenta.
System detekcji : Zaleca się stosowanie zestawów: DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, lub DAKO
EnVision™+/HRP, nr-y kat. K 4004 i K 4006. Dla skrawków przygotowanych z tkanek mrożonych zaleca
się zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, będący dobrą alternatywą jeżeli występuje barwienie endogennej
peroksydazy. Procedurę barwienia należy przeprowadzić zgodnie z przepisem dołączonym do zestawu
wizualizacji.
Automation: Przeciwciało jest dostosowane do użycia w automatach do barwień immunocytochemicznych
takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka wyników
Komórki wyznakowane przez przeciwciało wykazują zabarwienie w cytoplazmie. W wycinkach z normalnej
ludzkiej okrężnicy, CEA jest zazwyczaj zlokalizowane w wierzchołkowych partiach komórek nabłonka. W
preparatach z raka okrężnicy CEA jest najczęściej zlokalizowane w szczytowych partiach struktur gruczołowych
podczas gdy znakowanie w cytoplazmie przeważa w bardziej zbitych partiach guza.
Tkanka zdrowa : Przeciwciało znakuje normalną ludzką okrężnicę. W skrawkach mrożonych przeciwciało znakuje
śluzówkę okrężnicy oraz dołeczki żołądka. Dodatkowo przeciwciało znakuje komórki mezynchymalne w
wycinkach z 2/3 żołądkach, 1/9 okrężnic oraz 1/3 śledzion (1). Nie stwierdzono znakowania w komórkach
przewodów i komórkach groniastych trzustki, komórkach przewodów żółciowych, komórkach Kupffera w
wątrobie, monocytach śledziony oraz komórkach wielojądrowych śledziony (8), a także w komórkach
parenchymlnych i mezenchymalnych w 1 dwunastnicy, 2 jelit , 3 wątrób , 2 trzustek , 1 płuca, 1 grasicy i 8
ślinianek jak również nie stwierdzono znakowania w parenchymie w 2 żołądkach, 1 łożyska, 1 skóry, 1
migdałka i 2 śledzion (1).
Tkanka patologiczna : Przeciwciało znakuje 6/6 raków okrężnicy, 2/2 raków pęcherzyka żółciowego 2/3 raki
brodawki Vatera. Dodatkowo przeciwciało znakuje 31/31 oponiaków wydzieniczych (2). W tkankach mrożonych
przeciwciało znakuje 8/9raków okrężnicy 1/2 gruczolakoraków żołądka i 1/1 raków drobnokomókowych oskrzela
(1). Nie stwierdzano znakowania w 1 pleomorfotycznym gruczolaku ślinianki przyusznej, 1 raku
płaskonabłonkowym oskrzela, 1 gruczolakoraku oskrzela, 2 rakach krtani, 2 rakach pęcherza moczowego, 3
rakach sutka , 9 rakach szyjki macicy, 3 czerniakach złośliwych, 2 złośliwych białaczkach typu non-Hodkin´s oraz 2
grasiczakach (1).
Literatura
1. Zoubir F, Zeromski J, Sikora J, Szmeja J, Hedin A, Hammarström S. Tumor specificity of monoclonal
antibodies to carcinoembryonic antigen. Tumor Biol 1990;11:5-19.
2. Probst-Cousin S, Villagran-Lillo R, Lahl R, Bergmann M, Schmid KW, Gullotta F. Secretory meningioma.
Clinical, histologic, and immunohistochemical findings in 31 cases. Cancer 1997;79:2003-15.
3. Hedin A, Zoubir F, Lundgren T, Hammarström S. Epitope specificity and cross-reactivity pattern of a large
series of monoclonal antibodies to carcinoembryonic antigen. Mol Immunol 1986;23:1053-61.
4. Skubitz KM, Micklem K, van der Schoot E. M14. CD66 and CD67 cluster workshop report. In: Schlossman
SF et al., eds. Leucocyte Typing V. White Cell Differentiation Antigens. Oxford-New York-Tokyo: Oxford
University Press, 1995:889-99.
5. Larsson Å, Ghosh R, Hammarström S. Relative positions of some epitopes on carcinoembryonic antigen.
Cancer Immunol Immunother 1989;30:92-6.
6. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. 1st ed.
London: Oxford University Press; 1999. p. 37-8.
7. Hammerstrom S, Shively JE, Paxton RJ, Beatty BG, Larsson Å, Ghosh R, et al. Antigenic sites in
carcinoembryonic antigen. Cancer Res 1989;49:4852-8.
8. Nap M, Hammarström M-L, Börmer O, Hammarström S, Wagener C, Handt S, et al. Specificity and affinity
of monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigen. Cancer Res 1992;52:2329-39.
Objaśnienia symboli
(108556-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7072/PL/HEW/20.01.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17