BACTEC S.I.R.E. Drug Kit

% BACTEC S.I.R.E. Drug Kit
8
PP118JAA
2010/06
Polski
PRZEZNACZENIE
Zestaw leku BACTEC S.I.R.E. zawiera œrodki przeciwko drobnoustrojom do stosowania wraz z po¿ywk¹ BACTEC 12B Medium przy badaniu pr¹tków gruŸlicy
(Mycobacterium tuberculosis). Podstawowym zastosowaniem zestawu jest wykorzystywanie go wraz z urz¹dzeniem BACTEC 460TB.
Przy jakoœciowych badaniach wra¿liwoœci M. tuberculosis z hodowli zaleca siê stosowanie jako œrodków dodatkowych do po¿ywki BACTEC 12B Culture Medium
leków BACTEC S.I.R.E. (streptomycyny, izoniazydu, ryfampiny i etambutolu).
STRESZCZENIE ORAZ PODSTAWOWE ZASADY DZIA£ANIA
Procedura BACTEC badania wra¿liwoœci pr¹tków Mycobacterium na lek opiera siê na tej samej podstawowej zasadzie, która jest wykorzystywana w
metodzie konwencjonalnej, z tym wyj¹tkiem, ¿e stosuje siê po¿ywkê ciek³¹ i zamiast zliczania kolonii po oko³o 3 tygodniach wzrost monitoruje siê
radiometrycznie, a wyniki uzyskuje siê po 4-12 dniach. Za pomoc¹ metody BACTEC okreœla siê wra¿liwoœæ na leki, postêpuj¹c zgodnie ze zmodyfikowan¹
wersj¹ konwencjonalnej metody proporcji.1 Za proporcjê krytyczn¹ dla opornoœci przyjmuje siê 1% dla wszystkich leków przeciwgruŸliczych. Oznacza to,
¿e je¿eli opornoœæ wykazuje 1% lub wiêcej populacji Mycobacterium, hodowlê uznaje siê za oporn¹ w odniesieniu do wyniku podawanego przez
pracowniê. Opornoœæ oznacza siê poprze z porównanie prêdkoœci wzrostu w fiolce kontrolnej i w fiolkach z po¿ywk¹ 12B Medium, zawieraj¹cych badany
lek.
ZASADY PROCEDURY
Podstawowa zasada radiometrycznego testu opornoœci Mycobacterium BACTEC jest podobna do zasad wykorzystywanych w pierwotnej procedurze
izolowania. Przy wzroœcie Mycobacterium w po¿ywce 7H12, zawieraj¹cej substrat wyznakowany 14C, bakterie wykorzystuj¹ substrat i tworzy siê 14CO2. Iloœæ
wykrywanego 14CO2 œwiadczy o prêdkoœci wzrostu w fiolce, a wyra¿a siê j¹ w postaci „indeksu wzrostu” (GI, „Growth Index”). Jeœli badane drobnoustroje
s¹ wra¿liwe na œrodek przeciwgruŸliczy dodany do po¿ywki, dochodzi do zahamowania wzrostu. To zahamowanie mo¿na wykrywaæ jako zmniejszenie lub
bardzo niewielkie zwiêkszenie dziennego GI w porównaniu z kontrol¹. Je¿eli jednak drobnoustroje s¹ oporne, nie dochodzi do zahamowania lub te¿ jest
ono bardzo nieznaczne.
Podczas wyznaczania 1% wartoœci opornoœci inokulum w fiolce kontrolnej powinno zawieraæ stukrotnie mniejsz¹ iloœæ bakterii ni¿ fiolka zawieraj¹ca lek.
Po inokulacji codziennie bada siê fiolkê z lekiem i fiolkê kontroln¹. Porównuje siê prêdkoœæ zwiêkszania siê GI, czyli iloœciow¹ zmianê w stosunku do dnia
poprzedniego – oznaczan¹ symbolem delta (Δ) GI – fiolki kontrolnej i fiolek zawieraj¹cych leki. Je¿eli dzienne zwiêkszanie siê GI w fiolce z lekiem jest równe
lub wiêksze ni¿ w fiolce kontrolnej, badane drobnoustroje uznaje siê za oporne na lek. W przypadku populacji wra¿liwej dzienne zwiêkszenie GI by³oby
wiêksze dla kontroli ni¿ dla fiolki zawieraj¹cej lek. Na przyk³ad, je¿eli 1% populacji Mycobacterium wykazuje opornoœæ na izoniazyd (INH), to 99% bakterii
ulega³oby zahamowaniu przez INH, a zaledwie 1% wykazywa³oby wzrost w fiolce z lekiem. Prêdkoœæ wzrostu w fiolce z lekiem by³aby podobna do prêdkoœci
wzrostu w fiolce kontrolnej, w której umieszczono zaledwie 1/100 tej iloœci bakterii, która znalaz³a siê w fiolce z lekiem.
ODCZYNNIKI
Fiolki z lekiem BACTEC S.I.R.E. zawieraj¹ nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki przed przeprowadzeniem badania:
Liofilizowane œrodki przeciwko drobnoustrojom – w ka¿dej fiolce:
Streptomycyna ..........................................................................................1,2 mg
Izoniazyd ................................................................................................0,02 mg
Ryfampina ................................................................................................0,4 mg
Etambutoll ................................................................................................1,5 mg
Ostrze¿enia i œrodki ostro¿noœci:
Do u¿ytku diagnostycznego in vitro.
Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny.
W próbkach klinicznych mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirus zapalenia w¹troby i ludzki wirus nabytego braku odpornoœci (HIV).
Przy kontakcie z ka¿dym materia³em zanieczyszczonym krwi¹ lub innymi p³ynami ustrojowymi nale¿y przestrzegaæ „Uniwersalnych œrodków ostro¿noœci”2-5
i zaleceñ obowi¹zuj¹cych w danej instytucji.
Przed u¿yciem ka¿d¹ fiolkê nale¿y oceniæ pod k¹tem obecnoœci uszkodzeñ, zanieczyszczeñ lub pogorszenia jakoœci. NIE WOLNO u¿ywaæ fiolek wykazuj¹cych
cechy zanieczyszczenia. Fiolki wykazuj¹ce cechy uszkodzenia nale¿y wyrzucaæ. W rzadkich przypadkach szklana butelka mo¿e byæ pêkniêta i podczas
zdejmowania pokrywki albo innych manipulacji mo¿e dojœæ do z³amania jej szyjki.
Przed pobraniem próbek z dodatnich fiolek hodowli z po¿ywk¹ 12B w celu za³o¿enia nowej hodowli, barwienia itp. nale¿y uwolniæ gaz, który mo¿e zostaæ
wytworzony w wyniku metabolizmu bakterii. Nale¿y zawsze stosowaæ metody aseptyczne i ustalone œrodki ostro¿noœci, zabezpieczaj¹ce przed zagro¿eniem
mikrobiologicznym. Procedury nale¿y przeprowadzaæ w odpowiedniej komorze bezpieczeñstwa biologicznego w pomieszczeniu z odpowiednim systemem
wentylacji, zgodnie z zaleceniami CDC.6 Przy manipulacji próbkami i hodowlami, zawieraj¹cymi drobnoustroje potencjalnie patogenne, nale¿y u¿ywaæ
odpowiedniej odzie¿y ochronnej, maski i rêkawiczek. Stosowaæ siê do zaleceñ CDC i OSHA.
W celu zmniejszenia do minimum mo¿liwoœci wycieku w czasie inokulacji stosowaæ strzykawki z ig³ami zamocowanymi na sta³e lub fabrycznie zamkniête
Lok.
koñcówki Luer-L
Stê¿enie leków, stosowane w konwencjonalnym badaniu wra¿liwoœci na leki, mo¿e byæ ró¿ne w ró¿nych pracowniach. Du¿e znaczenie ma dobranie
równowa¿nego stê¿enia leku badanego przy badaniu wra¿liwoœci metod¹ BACTEC, je¿eli chce siê porównaæ wyniki uzyskane dwiema ró¿nymi metodami.
Dodanie odpowiedniej iloœci leku badanego do po¿ywki hodowlanej jest kluczowym etapem w badaniu wra¿liwoœci.
Zalecenia co do przechowywanie
Fiolki z lekiem BACTEC S.I.R.E. nale¿y przechowywaæ w suchym, ch³odnym miejscu (2° – 8°C); nie nale¿y ich wystawiaæ na bezpoœrednie dzia³anie œwiat³a
s³onecznego. Po rozprowadzeniu mo¿na je przechowywaæ nie d³u¿ej ni¿ przez 3 dni w temperaturze 2° – 8°C lub mo¿na je zamroziæ do temperatury -20°C
lub ni¿szej i przechowywaæ do szeœciu miesiêcy. Zamra¿aæ w ma³ych porcjach. Unikaæ wielokrotnego zamra¿ania i rozmra¿ania. Data wa¿noœci dotyczy
nieotwartej butelki z liofilizowan¹ zawartoœci¹, przechowywanej w warunkach zgodnych z zaleceniami.
POBIERANIE PRÓBKI
Do badañ wra¿liwoœci u¿ywa siê izolowanych, czystych, aktywnie rosn¹cych kolonii. Dok³adny opis: zobacz ulotkê do opakowania po¿ywki 12B Medium
(PP116JAA) i Podrêcznik dotycz¹cy zestawu i procedury systemu BACTEC 460TB (MA-0029).
PROCEDURA
Dostarczane materia³y: Zestaw z lekiem BACTEC S.I.R.E.
Materia³y wymagane, ale niedostarczane: Po¿ywka BACTEC 12B Medium, urz¹dzenie BACTEC 460TB, p³yn do rozcieñczania BACTEC, strzykawka 5 mL, woda
destylowana/dejonizowana, strzykawka tuberkulinowa z ig³¹ przymocowan¹ na sta³e, roztwór odka¿aj¹cy, 70% alkohol izopropylowy.
Procedura badania
Leki BACTEC S.I.R.E. (streptomycyna, izoniazyd, ryfampina i etambutol) s¹ dostarczane w postaci liofilizowanej. Nale¿y postêpowaæ zgodnie ze standardow¹
procedur¹ i stosowaæ odpowiednie stê¿enie leków. Stê¿enie leków po rozprowadzeniu w 5 mL ja³owej wody destylowanej/dejonizowanej i po rozcieñczeniu
(zgodnie z potrzeb¹) jest nastêpuj¹ce:
Lek
Po rozprowadzeniu
Wspó³czynnik
rozcieñczenia
Streptomycyna
5 mL
——————
Streptomycyna
5 mL
Rozcieñczenie 1:3
Izoniazyd
5 mL
——————
Stê¿enie/mL
IloϾ dodawana do
po¿ywki 12B Medium
Ostateczne stê¿enie w
po¿ywce 12B Medium/mL
240 µg
0,1 mL
80 µg
0,1 mL
6,0 µg
2,0 µg*
4 µg
0,1 mL
0,1 µg*
Ryfampina
5 mL
——————
80 µg
0,1 mL
2,0 µg*
Etambutol
5 mL
——————
300 µg
0,1 mL
7,5 µg
Etambutol
5 mL
Rozcieñczenie 1:3
100 µg
0,1 mL
2,5 µg*
*Równowa¿nik stê¿enie krytycznego zalecanego przez CDC.
Przyk³ady konwencjonalnych równowa¿nych stê¿eñ po¿ywek dla leków pierwszego i drugiego rzutu mo¿na znaleŸæ w Podrêczniku dotycz¹cym zestawu
i procedury BACTEC 460TB, rozdzia³ IV.
Je¿eli do osi¹gniêcia po¿¹danego stê¿enia leku (zob. wy¿ej) niezbêdne jest rozcieñczenie, nale¿y w warunkach aseptycznych dokonaæ rozcieñczenia w
wodzie destylowanej/dejonizowanej. Energicznie wstrz¹sn¹æ.
Przygotowanie po¿ywki lekowej: Stosowaæ œwie¿o sporz¹dzony roztwór leku lub rozmroziæ probówkê z zamro¿onego zapasu roztworu leku. Za pomoc¹
strzykawki jednorazowej 1 mL dodaæ dok³adnie 0,1 mL do 4-mililitrowej fiolki z po¿ywk¹ BACTEC 12B Medium. Do ka¿dego leku u¿yæ oddzielnej strzykawki.
Nale¿y zwróciæ uwagê, aby w strzykawce nie znalaz³y siê pêcherzyki powietrza i aby nie u¿ywaæ ostatniej 0,1 mL porcji ze strzykawki. Wszystkie fiolki po¿ywki
12B Medium stosowane w badaniu nale¿y przed badaniem poddaæ testom wstêpnym na urz¹dzeniu BACTEC 460TB, aby utworzyæ atmosferê CO2 i wykluczyæ
wszystkie fiolki, w których GI wynosi³by 20 lub wiêcej.
Przygotowanie inokulum bakteryjnego: Do rozpoczynania badania wra¿liwoœci u¿ywa siê aktywnie rosn¹cych hodowli M. tuberculosis w po¿ywce 12B
Medium lub na po¿ywce sta³ej.
Je¿eli na fiolce BACTEC 12B jest napis „≥ 10", nale¿y dokonaæ ponownej inkubacji i przeprowadzaæ codzienne badanie. Przy rozpoczynaniu badania
wra¿liwoœci nale¿y korzystaæ z poni¿szej tabeli.
ODCZYT DZIENNY
DZIA£ANIE
GI 300 – 499
Inkubowaæ przez jeszcze jeden dzieñ, po czym rozpocz¹æ badanie.
GI 500 – 799
Rozpocz¹æ badanie tego samego dnia.
GI ≥ 800
Rozcieñczyæ w stosunku 1:2, stosuj¹c 1 mL p³ynu do rozcieñczania; rozpocz¹æ badanie.
Je¿eli zachodzi potrzeba od³o¿enia na póŸniej badania wra¿liwoœci, fiolkê 12B nale¿y zamroziæ. Badanie wra¿liwoœci nale¿y wówczas rozpocz¹æ w ci¹gu
jednego tygodnia.
Sporz¹dziæ jednorodne inokulum bakteryjne poprzez wci¹ganie po¿ywki do jednorazowej strzykawki z ig³¹ przymocowan¹ na sta³e na przemian z
wypychaniem jej zawartoœci do fiolki. Czynnoœæ powtórzyæ kilkakrotnie bez wyjmowania ig³y z przegrody fiolki. To inokulum stosuje siê bezpoœrednio w
badaniu wra¿liwoœci na leki.
Hodowla na po¿ywce sta³ej: Sporz¹dziæ jednolit¹ zawiesinê kilku kolonii na po¿ywce sta³ej. Hodowla nie powinna mieæ wiêcej ni¿ 4-5 tygodni. Dobraæ
zmêtnienie zawiesiny tak, by odpowiada³o wartoœci 1,0 w skali McFarland przy stosowaniu schematu codziennego lub 0,5 – przy stosowaniu schematu
dla dni roboczych. Je¿eli nie jest znana ¿ywotnoœæ lub wiek hodowli, nale¿y rozpocz¹æ z danej hodowli kolejn¹, na po¿ywce 12B Medium, aby uzyskaæ
œwie¿y wzrost.
Inokulacja: Fiolki z po¿ywk¹ 12B Medium ustawiæ na tacy i odpowiednio oznaczyæ (zwykle jako: „kontrola”, „streptomycyna”, „izoniazyd”, „ryfampina”,
„etambutol”). Bêdzie potrzebne po jednej fiolce dla ka¿dego stê¿enia leku i jedna fiolka kontrolna. (Mo¿na wykorzystaæ kartonowe tace transportowe).
Po za³o¿eniu rêkawic gumowych, w komorze bezpieczeñstwa biologicznego inokulowaæ po 0,1 mL zawiesiny bakterii do ka¿dej fiolki z po¿ywk¹ 12B
Medium BACTEC, zawieraj¹cej lek. Do inokulacji stosowaæ jednorazow¹ strzykawkê tuberkulinow¹ z ig³¹ przymocowan¹ na sta³e.
W przypadku fiolki kontrolnej nie dokonywaæ bezpoœredniej inokulacji zawiesiny, lecz najpierw rozcieñczyæ zawartoœæ w stosunku 1:100, przenosz¹c 0,1 mL
zawiesiny do 9,9 mL specjalnego p³ynu do rozcieñczania. Po starannym zmieszaniu (co najmniej 10-krotne odwrócenie do góry dnem) inokulowaæ 0,1 mL
tego rozcieñczenia do kontrolnej fiolki z po¿ywk¹ 12B Medium (bez leku).
Wierzcho³ek ka¿dej inokulowanej fiolki przetrzeæ gazikiem zamoczonym w odpowiednim œrodku odka¿aj¹cym i nastêpnie przetrzeæ 70% alkoholem.
Inkubowaæ w temperaturze 37°C ±1°C.
Schemat odczytu:
Schemat badania codziennego: Fiolki badaæ codziennie (tak¿e w weekendy i œwiêta) mniej wiêcej o tej samej porze (± 2 h) na urz¹dzeniu BACTEC 460TB
a¿ do uzyskania w fiolce kontrolnej GI wynosz¹cego co najmniej 30. Badaæ co najmniej przez 4 dni i co najwy¿ej przez 12 dni. Przy tym schemacie badanie
wra¿liwoœci na leki mo¿na rozpocz¹æ w dowolnym dniu tygodnia.
Schemat badania w dni robocze: Procedura jest podobna jak przy opisanym powy¿ej badaniu codziennym, z nastêpuj¹cymi wyj¹tkami:7 (a) Wszystkie
hodowle dodatnie nale¿y zbieraæ razem i wszystkie badania wra¿liwoœci rozpoczynaæ tylko w pi¹tki. Nale¿y postêpowaæ zgodnie z procedurami
opisanymi powy¿ej. (b) Je¿eli u¿ywa siê dodatniej fiolki BACTEC – zob. tabelê powy¿ej.
Badanie inokulowanych fiolek rozpoczynaæ w poniedzia³ek, pomijaj¹c weekend. Fiolki nale¿y badaæ co najmniej w poniedzia³ek, wtorek i œrodê (co
najmniej przez 5 dni od inokulacji i co najwy¿ej przez 12 dni), mniej wiêcej o tej samej porze ka¿dego dnia (± 2 h).
2
Bezpoœrednie badanie wra¿liwoœci na lek: Je¿eli próbka jest dodatnia ze wzglêdu na AFB w rozmazie, zwykle zawiera Mycobacterium w iloœci dostatecznej do
wykonania badania wra¿liwoœci na lek w po¿ywce 12B Medium. Procedura jest w zasadzie taka sama, jak w przypadku poœredniego badania wra¿liwoœci.
Ró¿nice w procedurze s¹ nastêpuj¹ce:
Po obróbce próbki po¿ywkê hodowlan¹ inokulowaæ i sporz¹dziæ rozmaz do barwienia AFB. Zamroziæ pozosta³¹ czêœæ koncentratu próbki.
Zbadaæ rozmaz AFB. Je¿eli jest on dodatni w metodzie Ziehla-Neelsena lub w metodzie fluorochromowej, rozpocz¹æ tego samego dnia badanie
wra¿liwoœci.
Do wszystkich fiolek zawieraj¹cych lek i do wszystkich fiolek niezawieraj¹cych leku (kontrolnych) dodaæ BACTEC PANTA. Do fiolek zawieraj¹cych lek
dodaæ 0,1 mL dok³adnie zmieszanego koncentratu próbki. Koncentrat próbki rozcieñczyæ w stosunku 1:10 i inokulowaæ 0,1 mL do fiolki kontrolnej.
Inkubowaæ w temperaturze 37°C i badaæ fiolki na urz¹dzeniu systemu BACTEC 460TB co 2-3 dni, co najwy¿ej przez 21 dni. Próbki o wybitnie dodatnim
wyniku z rozmazu badaæ codziennie.
Wyniki interpretowaæ, gdy GI kontroli osi¹ga 20 lub wiêcej. Wyniki potwierdziæ poœrednim badaniem wra¿liwoœci. Wyniki mo¿na wydawaæ dopiero po
potwierdzeniu to¿samoœci M. tuberculosis testem BACTEC NAP lub innymi testami.
Kontrola jakoœci
NIE U¯YWAÆ fiolek po up³ywie ich daty wa¿noœci.
NIE U¯YWAÆ fiolek, które wykazuj¹ pêkniêcia lub defekty; utylizowaæ fiolkê w odpowiedni sposób.
Do ka¿dego zestawu S.I.R.E. s¹ do³¹czone certyfikaty kontroli jakoœci. W certyfikatach kontroli jakoœci znajduj¹c siê informacje o drobnoustrojach
stosowanych do danego typu produktu.
Przed u¿yciem nale¿y oceniæ wszystkie fiolki pod k¹tem ewentualnych cech pogorszenia jakoœci. Nie nale¿y u¿ywaæ fiolek wykazuj¹cych zmêtnienie,
zanieczyszczenie lub zmianê zabarwienia (ciemniejsz¹ barwê). Nie nale¿y stosowaæ fiolek z lekiem S.I.R.E. wykazuj¹cych obecnoœæ wilgoci (brak „pulchnego”
wygl¹du). Wydajnoœæ leków mo¿na sprawdzaæ poprzez badanie wra¿liwoœci jednego lub wiêcej ni¿ jednego drobnoustroju kontrolnego za ka¿dym razem,
gdy rozpoczyna siê badanie wra¿liwoœci.
Szczep
Nr ATCC
27294
M. tuberculosis, H37Rv wra¿liwy na leki S.I.R.E.
35820
M. tuberculosis, H37Rv oporny na streptomycynê
35822
M. tuberculosis, H37Rv oporny na izoniazyd
35837
M. tuberculosis, H37Rv oporny na etambutol
35838
M. tuberculosis, H37Rv oporny na ryfampinê
Nale¿y zawsze stosowaæ szczep H37Rv ATCC 27294 i powinien on zawsze wykazywaæ wra¿liwoœæ. Je¿eli ta hodowla wykazuje opornoœæ na jakikolwiek lek
lub jeœli kontrola badania wra¿liwoœci jakiejœ hodowli nie wykazuje wzrostu (w ci¹gu 12 dni), wyniku nie nale¿y wydawaæ. Badanie powtórzyæ.
W ramach codziennej obs³ugi nale¿y badaæ fiolki kontroli wydajnoœci (z zestawu kontroli wydajnoœci BACTEC) na urz¹dzeniu BACTEC. Je¿eli uzyskuje siê
niskie odczyty, a fiolki kontroli wydajnoœci zosta³y prawid³owo zbadane, mo¿e to wskazywaæ na obecnoœæ problemów z urz¹dzeniem (zob. ulotkê do
opakowania BACTEC PTK, PP046JAA).
Nale¿y stosowaæ siê do wymagañ odnoœnie do kontroli jakoœci zgodnie z przepisami miejscowymi, krajowymi i/lub federalnymi, i do standardowych procedur
kontroli jakoœci pracowni. Zaleca siê, aby u¿ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich zaleceñ CLSI (dawniej NCCLS) i przepisów CLIA, dotycz¹cych sposobów
kontroli jakoœci.
INTERPRETACJA WYNIKÓW
Gdy fiolki kontrolne osi¹gaj¹ wartoœæ GI wynosz¹c¹ 30 lub wiêcej, wyniki nale¿y interpretowaæ w nastêpuj¹cy sposób: je¿eli wartoœæ ΔGI jest mniejsza w fiolce
z lekiem ni¿ w fiolce z kontrol¹, populacja jest wra¿liwa; je¿eli jest wiêksza, populacja jest oporna.
ΔGI (kontrola) > ΔGI (lek) – „wra¿liwoœæ”
ΔGI (kontrola) < ΔGI (lek) – „opornoœæ”
ΔGI (kontrola) ≈ ΔGI (lek) – „wartoœæ graniczna”
W tabeli poni¿ej przedstawiono dane uzyskane z M. tuberculosis hodowanego na po¿ywce sta³ej i badanego z zastosowaniem metody badania wra¿liwoœci
BACTEC. Podobne dane uzyskano dla M. tuberculosis hodowanego pocz¹tkowo w po¿ywce 12B Medium. Ze wzglêdu jednak na mniejsz¹ liczbê komórek
w inokulum, pocz¹tkowe odczyty mog¹ byæ ni¿sze.
Dzienny odczyt GI
Dzieñ
Kontrola
Streptomycyna
Izoniazyd
Ryfampina
1
5
40
50
38
Etambutol
76
2
11
20
100
19
100
3
24
12
250
10
100
4
65
14
500
12
91
ΔGI
+41
+2
+250
+2
-9
Wyniki
—
Wra¿liwe
Oporne
Wra¿liwe
Wra¿liwe
OGRANICZENIA PROCEDURY
Zmiana sposobu przygotowania inokulum wp³ywa na wyniki badania wra¿liwoœci – zw³aszcza obecnoœæ du¿ych skupisk i nieprawid³owe rozcieñczenie 1:100
w fiolce kontrolnej. Je¿eli wzrost w fiolce kontrolnej jest niezadowalaj¹cy, badanie nale¿y powtórzyæ.
Zanieczyszczenie
Nale¿y zachowaæ ostro¿noœæ, aby nie dopuœciæ do zanieczyszczenia w czasie inokulacji do fiolki BACTEC 12B. Zanieczyszczona próbka da odczyt dodatni, lecz
nie wskazuje na odpowiedni wynik kliniczny. Takiego ustalenia musi dokonaæ u¿ytkownik na podstawie analizy takich czynników, jak typ uzyskanego
drobnoustroju, wystêpowanie tego samego drobnoustroju w wielu hodowlach, wywiad pacjenta, odpowiednie kontrole aparatury itd. Zanieczyszczenie
mo¿e byæ tak¿e skutkiem nieprawid³owej konserwacji igie³ i przewodów BACTEC, niew³aœciwego oczyszczania przegrody lub nieprawid³owego dzia³ania
jednostki g³owicy ig³y BACTEC (zob. instrukcjê obs³ugi i konserwacji TB Hood).
Z powodu natury materia³u biologicznego zawartego w pod³o¿ach i wrodzonej ró¿norodnoœci organizmów u¿ytkownik powinien zdawaæ sobie sprawê
z potencjalnej ró¿norodnoœci wyników przy wzroœcie niektórych organizmów.
3
OCZEKIWANE WARTOŒCI
W przypadku ryfampiny, streptomycyny i izoniazydu zwykle pocz¹tkowo obserwuje siê przez kilka dni znaczne zmniejszenie GI, je¿eli populacja jest
wra¿liwa. W przypadku etambutolu obserwuje siê zwykle niewielkie pocz¹tkowe zwiêkszenie GI, po czym wartoœci GI zaczynaj¹ siê zmniejszaæ. Prêdkoœæ
zmniejszania siê GI zale¿y od prêdkoœci dzia³ania leku i od wra¿liwoœci bakterii. Je¿eli hodowla M. tuberculosis zawiera mieszan¹ populacjê drobnoustrojów
wra¿liwych i opornych, wartoœci ΔGI w stosunku do czasu bêd¹ siê zmniejszaæ w zale¿noœci od odsetka populacji wra¿liwej.
W przypadku bezpoœredniego badania wra¿liwoœci, powodzenie i niezbêdny czas bêdzie zale¿a³ od tego, czy rozmaz bêdzie dodatni. W literaturze
opisywano, ¿e œrednia, przy dobrej zgodnoœci z wynikami testów konwencjonalnych, wynosi 10-12 dni.8,9
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCI
W niektórych opublikowanych badaniach donoszono, ¿e wyniki uzyskane metod¹ badania wra¿liwoœci BACTEC wykazywa³y dobr¹ zgodnoœæ z
konwencjonaln¹ metod¹ proporcji (z wykorzystaniem po¿ywek 7H10/7H11) i z metod¹ stosunku opornoœci (z zastosowaniem po¿ywki z jaj LowensteinaJensena).1,10-15 Oceniono tak¿e dok³adnoœæ i powtarzalnoœæ metody badania wra¿liwoœci BACTEC: wyniki czêsto uzyskiwano w ci¹gu 4-6 dni.16-20
Badanie Huang i wsp., porównuj¹ce system BACTEC 460TB z metod¹ proporcji, da³o nastêpuj¹ce wyniki:21
Tabela 1. Wyniki badañ wra¿liwoœci drobnoustrojów i indeksów wydajnoœci diagnostycznej, oceniane
w porównaniu z metod¹ rozcieñczania na agarze, przeprowadzone na 47 izolatach M. tuberculosis.
Liczba izolatów, dla których uzyskano wymienione wyniki†
Lek, metoda,
i stê¿enie leku*
W obu W
w
systemie
BACTEC
460TB,
Indeksy wydajnoœci diagnostycznej
W obu O
Agar W
– BACTEC – O
Agar R
– BACTEC – W
SwoistoϾ
(%)
Czu³oœæ
(%)
STR
BACTEC 2,0 µg/mL
36
9
0
2
100
81,8
BACTEC 0,1 µg/mL
16
29
1
1
94,1
96,7
BACTEC 2,0 µg/mL
30
14
1
2
96,8
87,5
BACTEC 2,0 µg/mL
35
2
4
6
89,7
25
INH
RMP
EMB
*W metodzie rozcieñczania na agarze leki badano w nastêpuj¹cym stê¿eniu: STR – 2 µg/mL; INH – 0,2 µg/mL; RMP – 1,0 µg/mL, EMB – 5 µg/mL.
†W
= wra¿liwe; O = oporne.
W badaniu przeprowadzonym przez Bemer i wsp. Porównywano system BACTEC 460TB S.I.R.E. z systemem BACTEC MGIT 960 S.I.R.E. Przebadano sto
dziesiêæ szczepów, uzyskuj¹c ogóln¹ zgodnoœæ wynosz¹c¹ 93,5%. Czas obrotu wynosi³ od 4,0 do 10,0 dni dla BACTEC 460TB S.I.R.E. (œrednio 7,0 dni).22
Tabela 2. Wyniki badania
i BACTEC 460TB.†
podatnoœci
na
leki
klinicznych
szczepów
M.
tuberculosis ,
badanych
w
systemach
BACTEC
MGIT
960
Liczba wyników, które by³y:
Lek
Liczba testów
(stê¿enie w µg/mL)
W w obu
O w MGIT 960;
W w MGIT 960;
O w obu
ZgodnoϾ
systemach
W w 460TB
O w 460TB
systemach
(%)
INH (0,1)
110
81
4
25
96,4
INH (0,4)
29
5
3
21
89,7
RIF (2,0)
110
92
1
17
99,1
EMB (2,5)
110
93
3
13
96,4
EMB (7,5)
17
7
3
7
82,4
STR (2,0)
110
76
9
25
91,8
34
12
10
12
70,6
520
366
33
120
93,5
STR (6,0)
Ca³kowita liczba testów
†W
1
1
– wra¿liwy; O – oporny.
W badaniu przeprowadzonym przez Bergmann i Woods porównywano leki: etambutol i streptomycynê w systemie BACTEC 460TB S.I.R.E. z metod¹
proporcji. Wyniki przedstawiono w poni¿szej tabeli:23
Tabela 3. Pocz¹tkowe wyniki badania opornoœci na etambutol i streptomycynê
w systemie BACTEC i metod¹ proporcji.†
Liczba wyników, które by³y:
system BACTEC
Lek
Etambutol
Streptomycyna
†Skróty:
MOP
Liczba izolatów
W
W
63
O
O
8
W
O
3
W
W
59
O
O
14
O
W
1
MOP – metoda proporcji; W, wra¿liwe; O, oporne.
W oddzielnym badaniu Bergmann i Woods zajêli siê równie¿ izoniazydem i streptomycyn¹ na systemie BACTEC 460TB S.I.R.E. i porównywali je z metod¹
proporcji:24
4
Tabela 4. Wyniki badania wra¿liwoœci izolatów klinicznych M. tuberculosis
metod¹ proporcji, BACTEC 460TB.
Liczba izolatów z wynikamia:
Leki
MOP
i wynik
BACTEC
460TB
Izoniazyd (stê¿enie niskieb)
Wra¿liwe
Oporne
16
16
4
4
19
18
1
2
17
17
3
3
Izoniazyd (stê¿enie wysokiec)
Wra¿liwe
Oporne
Ryfampina
Wra¿liwe
Oporne
aMOP
– metoda proporcji.
bstê¿enie
niskie – 0,2 µg/mL dla metody proporcji i 0,1 µg/mL dla BACTEC 460TB.
cstê¿enie
wysokie – 1,0 µg/mL dla metody proporcji i 0,4 µg/mL dla BACTEC 460TB.
DOSTÊPNOŒÆ
Numer katalogowy
Opis
442102
Zestaw leków BACTEC S.I.R.E., 2 fiolki liofilizowanej streptomycyny, 2 fiolki liofilizowanego izoniazydu, 2 fiolki liofilizowanej
ryifampiny, 2 fiolki liofilizowanego etambutolu.
442146
BACTEC Isoniazid – 1 fiolka liofilizowanego izoniazydu.
442004
BACTEC 12B Medium – 4 mL, 100 w opakowaniu.
PIŒMIENNICTWO:
1.
Canetti, G. et al. Advances in techniques of testing mycobacterial drug susceptibility, and the use of sensitivity test in tuberculosis programmes. Bull.
W.H.O. 1969, 41:21-43.
2.
National Commitee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired
infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, PA.
3.
Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control
and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80.
4.
U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S.
Government Printing Office, Washington, D.C.
5.
Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure
to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000,
p. 0021-0045.
6.
Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and
Consultation. Atlanta, GA, 1985.
7.
Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23:934-937, 1986.
8.
Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual
Meeting, St. Louis, MO, 1984.
9.
Stager, C.E. et al. Identification and susceptibility testing of M. tuberculosis by direct inoculation of smear-positive specimens into BACTEC 12A media.
Abstract, C301, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984.
10. Bannister, E.R. et al. Comparison of detection, identification and drug susceptibility testing of mycobacteria by using the BACTEC radiometric method
and conventional methods. Abstract C260, A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, 1985.
11. Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium
tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18:689-696, 1983.
12. Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981,
13:908-912.
13. Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric procedure and two conventional methods. J.
Clin. Microbiol. 1985, 22:919-923.
14. Vincke, G. et al. Rapid susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric technique. J. Antimicrobiol. Chemother. 1982, 10:351- 354.
15. Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123:402-406, 1981.
16. Good, R.C. et al. Reproducibility of drug susceptibility tests with M. tuberculosis. Abstract U5, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984.
17. Siddiqi, S.H. et al. Accuracy and reproducibility of the BACTEC drug susceptibility testing of M. tuberculosis. Abstract 1041, I.C.A.A.C. Annual Meeting,
Las Vegas, NV, 1983.
18. Terrand, J.J. et al. Evaluation of the BACTEC radiometric method for detection of 1% resistant populations of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin.
Microbiol. 1985, 21:941-946.
19. Woodley, C.L. Evaluation of streptomycin and ethambutol concentrations for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and
conventional procedures. J. Clin. Microbiol. 1986, 23:385-386.
20. Heifets, L.B. "Drug susceptibility in the chemotherapy of mycobacterial infection." C.R.C. Press, Inc., Boca Raton, FL, 1991.
21. Huang, T., H. Tu, S. Lee, W. Huang and Y. Liu. 2002 Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs: comparisons of
the MGIT 960 and BACTEC 460 systems. Ann. Clini. Lab. Sci. 32:142-147.
5
22. Bemer, P., F., Palicova, S., Rüsch-Gerdes, H., Drugeon, and G., Pfyffer, 2002. Multicenter evaluation of fully automated BACTEC Mycobacteria Growth
Indicator Tube 960 System for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 40:150-154.
23. Bergmann, J.S., and G.L. Woods. 1997. Reliability of mycobacteria growth indicator tube for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to
ethambutol and streptomycin. J. Clin. Microbiol. 35:3325-3327.
24. Bergmann, J.S., and G.L. Woods. 1998. Evaluation of the ESP culture system II for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis isolates to four
primary antituberculosis drugs. J. Clin. Microbiol. 36:2940-2943.
6
7
%
O
Becton, Dickinson and Company
7 Loveton Circle
Sparks, MD 21152 USA
800-638-8663
www.bd.com/ds
$
Benex Limited
Rineanna House
Shannon Free Zone
Shannon, County Clare, Ireland
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
BD, BD Logo, BACTEC, MGIT, PANTA and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. © 2010 BD.