Monoclonal Mouse Anti-Human CD23, Clone MHM6

Monoclonal Mouse Anti-Human CD23, Clone MHM6
Nr kat. F 7062
Nr kat. R 7108
Przeznaczenie
FITC-Conjugated
RPE-Conjugated
Do badań diagnostycznych in vitro.
F 7062 i R 7108 są przeznaczone do użytku w cytometrii przepływowej. Interpretacja wyników musi być
dokonana przez wykwalifikowaną osobę w kontekście wywiadu chorobowego pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Synonim antygenu
FcRII, BLAST-2, receptor IgE o słabym powinowactwie (3).
Wprowadzenie
CD23 jest glikoproteiną błonową, typu II o masie 45 kDa należącą do rodziny lektyn typu C, identyczną z
receptorem IgE o słabym powinowactwie (FcRII) znajdowanym na komórkach B (2, 4). CD23 występuje
głównie na limfocytach B i monocytach wliczając w to wysoką ekspresję na limfoblastach B przekształconych
przez wirus Epsteina-Barr (1, 3). Stymulacja Interleukiną-4 i Interleukiną-13 zwiększa ekspresję CD23 na
limfocytach B (2). Na limfocytach B CD23 wykazuje selektywną ekspresję na komórkach podwójnie dodatnich
sIgM/sIgD i jest tracone po zróżnicowaniu w komórki wydzielające Ig (3).
CD23 jest także obecne na wielu typach innych komórek takich jak limfocyty T, granulocyty eozynochłonne,
płytki krwi, komórki Langerhansa i nabłonkowe komórki grasicze (3). Jednakże, CD23 nie występuje w
prawidłowych ludzkich tkankach nielimfoidalnych, takich jak ośrodkowy układ nerwowy, gruczoły wydzielania
wewnętrznego, układ trawienny, układ oddechowy, układ moczowy i żeński/męski układ rozrodczy, skóra,
kości, chrząstki, tkanka łączna, mięśnie, nerwy obwodowe, naczynia, mezotelium, błona maziowa, łożysko i
pępowina (5).
Dostarczone odczynniki
Koniugaty anty - CD23, F 7062 i R 7108, zostały wyprodukowane z oczyszczonego, mysiego przeciwciała
monoklonalnego. Są one dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym 1% bydlęcej albuminy
surowiczej (BSA) i 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 L koniugatu do 106
leukocytów z prawidłowej ludzkiej krwi obwodowej).
Isotype: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykieta na fiolce.
Przeciwciało
Nr kat.
Fluorochrom
Kontrola
negatywna Nr kat.
F 7062
FITC (Izotiocjanian fluoresceiny Isomer 1)
X 0927
R 7108
RPE (R-Fikoerytryna)
X 0928
Immunogen
EBV- limfoblastyczne komórki B-przekształcone przez wirus Epsteina-Barr (5).
Swoistość
Na Drugich, Trzecich, Czwartych i Piątych Międzynarodowych Warsztatach i Konferencjach na temat Ludzkich
Antygenów Różnicujących Leukocyty (Boston 1984, Oksford 1986, Wiedeń 1989, Boston 1993), omawiano
MHM6, anty-CD23, a badania licznych laboratoriów potwierdziły jego reaktywność z antygenem CD23 (3).
Antygen CD23 wykazuje ekspresję na komórkach nowotworowych w przypadkach przewlekłej białaczki
limfatycznej B komórkowej i w pewnych przypadkach centroblastycznego/centrocytarnego chłoniaka, natomiast
nie występuje w innych typach nowotworów limfoidalnych (5).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik chemiczny wysoce toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie chociaż nie sklasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodu może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi tworząc silnie wybuchowe odkładanie azydków metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali
w kanalizacji.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury obchodzenia się
z nim.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze 2-8 C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na
fiolce. Jeżeli odczynniki przechowywane były w innych warunkach niż wymagane użytkownik musi sprawdzić
ich stan. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność tego produktu, dlatego pozytywne i
negatywne kontrole powinny być oznaczone równocześnie z próbkami pobranymi od pacjenta. Jeżeli
zaobserwuje się nieoczekiwane barwienie, którego nie można wyjaśnić odchyleniami w procedurach
laboratoryjnych i podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy skontaktować się z serwisem technicznym
producenta.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki zawierającej antykoagulant.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste poprzez odwirowanie w separatorze, ewentualnie spowodować lizę
krwinek czerwonych po kroku 6.
3.
Przepłukać komórki jednojądrzaste 2 razy RPMI 1640 lub PBS, pH 7.2-7.4.
(108416-002)
F 7062/R 7108/PL/KJA/01.09.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
4.
Wymieszać 100 L zawiesiny komórkowej z 10 L anty - CD23 sprzężonego (skoniugowanego) z
fluorochromem.
5.
Użyć niereaktywnego przeciwciała monoklonalnego o tym samym izotypie sprzężonego z tym samym
fluorochromem jako kontroli negatywnej (patrz tabela).
6.
Inkubować w ciemnym miejscu w temperaturze 4 C przez 30 minut.
7.
Przepłukać 2 razy w PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie umieścić komórki w odpowiednim płynie do
cytometrii przepływowej, np. 0.3 mL 1% paraformaldehydu (środek utrwalający) w 0.01 mol/L PBS, pH 7.4.
8
Przeprowadzić analizę w cytometrze przepływowym.
Zaleca się porównanie z odpowiednimi pozytywnymi i negatywnymi kontrolami w każdym teście dla kontroli
odczynnika i procedury. Uwaga: koniugaty fluorochromu są wrażliwe na światło, dlatego próbki powinny być
chronione przed światłem w czasie procedury barwienia aż do momentu analizy
Piśmiennictwo
1.
Sarfati M. BC7. CD23 Workshop Panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings
of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London:
Garland Publishing Inc.; 1997. p.144-7.
2.
Kikutani H, Suemura M, Owaki H, Yamasaki K, Barsumian EL, Nakamura H, et al. B3.3. CD23 is a lowaffinity Fce receptor (FceR): regulation of FceR expression. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S,
Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sep 21-26; Oxford, England. Oxford,
New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 419-22.
3.
Sarfati M, Ishihara H, Delespesse G. B7. CD23 Workshop Panel report. In: Schlossman SF, Boumsell L,
Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation
antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA.
Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 530-3.
4.
Aubry JP, Bonnefoy JY, De Vries JE, Banchereau J. B3.2. The CD23 antigen is the human lymphocyte
receptor for IgE. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al.,
editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International
Workshop and Conference; 1986 Sep 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University
Press; 1987. p. 417-9.
5.
Pallesen G. B2.5. The distribution of CD23 in normal human tissues and in malignant lymphomas. In:
McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing
III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986
Sep 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 383-6.
Objaśnienia symboli
(108416-002)
Numer katalogowy
Zakres temperatur
Termin ważności
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przez światłem (Patrz:
instrukcja przechowywania)
Producent
Przed użyciem zapoznać sie z
instrukcjami
Numer serii
F 7062/R 7108/PL/KJA/01.09.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17