Wprowadzenie Cukry (mono-, di- i trisacharydy) stanowią

Wprowadzenie
Cukry (mono-, di- i trisacharydy) stanowią dominujący składnik miodów. Jedną z wielu
metod, która moŜe słuŜyć do ich analizy ilościowej jest wysokosprawna chromatografia
cieczowa (HPLC).
Cel
Celem ćwiczenia jest wykonanie analizy ilościowej miodu pod kątem zawartości
węglowodanów, a w szczególności mono-, di- i trisacharydów: glukozy, fruktozy, sacharozy,
trehalozy, melecytozy i turanozy. Oznaczenia zostaną wykonane metodą krzywej
kalibracyjnej (patrz punkt Literatura).
Wykonanie
Ćwiczenie to jest podzielone na 2 części: w pierwszej zostaną wykonane czynności niezbędne
do oznaczenia ilościowego cukrów dominujących w miodzie: glukozy, fruktozy i sacharozy;
druga dotyczyć będzie analiz cukrów występujących w małych ilościach: trehalozy,
melecytozy i turanozy.
Część I. Analiza glukozy, fruktozy i sacharozy
Ćwiczenie obejmuje następujące czynności:
1.
2.
3.
4.
5.
Sporządzenie roztworów wzorcowych
Sprawdzenie powtarzalności nastrzyku
Sprawdzenie dokładności przygotowania próbki
Wykonanie oznaczeń do krzywej kalibracyjnej
Weryfikacja postępowania – analiza sztucznej mieszaniny cukrów
4.5e-005
glukoza 5mg/ml
fruktoza 5mg/ml
sacharoza 5mg/ml
miod 20mg/ml
4e-005
3.5e-005
3e-005
A=803
2.5e-005
2e-005
A=709
1.5e-005
1e-005
A=326
A=324
5e-006
A=305
0
A=1
-5e-006
300
350
400
450
500
550
600
650
700
Wyniki analiz jakościowych dla wzorców cukrów. Wartości na wykresie oznaczają
powierzchnie odpowiednich pików.
Ad. 1. Sporządzić roztwór MeOH+Woda: zmieszać metanol i wodę w stosunku
objętościowym 3:7. Przygotować po 20ml (w MeOH+Woda) roztworów roboczych glukozy,
fruktozy o stęŜeniu 42 mg/ml oraz sacharozy 1 mg/ml. Przygotować roztwory wzorców wg
tabeli:
Wzorzec nr
1
2
3
4
5
6
7
8
Glukoza, ml
0
4
1
2
0
1
1
1
Fruktoza, ml
0
2
4
1
2
2
2
2
Sacharoza, ml
0
1
2
4
0
4
4
4
Woda, ml
10
0
0
0
5
5
5
5
Ad. 2. Wykonać trzykrotnie analizę tej samej próbki fruktozy (wzorzec 5) – 3x7min
Ad. 3. Wykonać trzykrotnie analizę próbek o tym samym stęŜeniu (wzorzec 6,7 i 8) 3x11min
Ad. 4. Wykonać analizę próbek (wzorzec 1, 2, 3, 4) 4x11min
Ad. 5. Wykonać analizę mieszaniny glukozy, fruktozy i sacharozy o nieznanym stęŜeniu,
Analizy poszczególnych próbek na HPLC (Kolumna -NH2, eluent: acetonitryl+woda 83:17,
przepływ 1.3ml/min, detektor: RI, objętość próbki: 10ul). Zanotować tR dla poszczególnych
cukrów i pola powierzchni pod pikami.
Opracowanie sprawozdania
W sprawozdaniu naleŜy zamieścić:
1. Chromatogramy uzyskane dla analizowanych próbek.
2. Podstawową analizę statystyczną dla błędu nastrzyku, przygotowania próbki oraz
oznaczenia w próbce o niewiadomym składzie ilościowym
3. Krzywą kalibracyjną - wykres Powierzchnia_piku=f(stęŜenie_wzorca_w_mg_na_ml)
4. Wyniki obliczeń dla nieznanej, analizowanej próbki
Część II. Analiza trehalozy, melecytozy i turanozy
Ad. 1. Sporządzić roztwór MeOH+Woda: zmieszać metanol i wodę w stosunku
objętościowym 3:7. Przygotować po 25ml (w MeOH+Woda) roztworów roboczych trehalozy,
melecytozy i turanozy o stęŜeniu 1 mg/ml. Przygotować roztwory wzorców wg tabeli:
Wzorzec nr
1
2
3
4
5
Trehaloza, ml
0
2
2
5
1
Melecytoza, ml
0
2
3
1
5
Turanoza, ml
1
2
1
0
0
Ad. 2. Ad. 3. Ad. 4. Wykonać analizę próbek (wzorzec 1, 2, 3, 4 i 5)
Ad. 5. Wykonać analizę mieszaniny trehalozy, melecytozy i turanozy o nieznanym stęŜeniu,
Przeprowadzić analizy poszczególnych próbek na HPLC (Kolumna -NH2, eluent:
acetonitryl+woda 83:17, przepływ 1.3 ml/min, detektor: RI, objętość próbki: 10ul).
Zanotować tR dla poszczególnych cukrów i pola powierzchni pod pikami.
Opracowanie sprawozdania
W sprawozdaniu naleŜy zamieścić:
1. Chromatogramy uzyskane dla analizowanych próbek.
3. Krzywą kalibracyjną - wykres Powierzchnia_piku=f(stęŜenie_wzorca_w_mg_na_ml)
4. Wyniki obliczeń dla nieznanej, analizowanej próbki
Literatura
http://www.pg.gda.pl/chem/Dydaktyka/Analityczna/LC/Chromatografia_Ci
eczowa_Ksiazka_MK/166Oznaczanie_ilosciowe_w_HPLC.pdf
http://www.pg.gda.pl/chem/Dydaktyka/Analityczna/LC/Analiza_ilosciowa
.pdf