Laboratorium 14

ĆWICZENIE 14
DEZYNFEKCJA POWIETRZA W POMIESZCZENIACH
ZAMKNIĘTYCH
/Opiekun merytoryczny: dr hab. Teodora M. Traczewska, prof. nadzw. PWr
modyfikacja: dr inż. Agnieszka Trusz-Zdybek i mgr inż. Maciej Bełcik/
1.
Zagadnienia szczegółowe:
sposoby uzdatniania powietrza, działanie promieniowania różnego typu na
mikroorganizmy zawieszone w powietrzu, rozmieszczenie lamp bakteriobójczych w
pomieszczeniach, sposób naświetlania i czas naświetlania, oczyszczanie powietrza przez
filtrację, sposoby dezynfekcji chemicznej powietrza, współczynnik fenolowy
2.
Literatura zalecana:
• Krzysztofik B., Ossowska-Cyprzyk K. Ćwiczenia laboratoryjne z mikrobiologii
powietrza. Wydawnictwo Politechniki Warszawskiej, Warszawa 1989, Strony:121 –
130, 139-144, 152- 152, 162-170
• Grabińska-Łoniewska A., Słomczyńska B., Rutkowska-Narożniak A., Łebkowska M.,
Słomczyński T., Zborowska E. Biologia środowiska. Wydawnictwo Seidel-Przywecki
Sp. z o.o., Warszawa 2011, Strony: 361-373
CZĘŚĆ DOŚWIADCZALNA
Zad 1. Dezynfekcja powietrza metodą filtracji w komorze laminarnej
Wykonanie:
• na powierzchni roboczej (blat) komory laminarnej ustawić dwie otwarte szalki
Petriego z agarem odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna);
• po zakończeniu ekspozycji szalek z agarem odżywczym włączyć filtrację powietrza w
laminarze na czas 15 minut;
• ponownie umieścić na powierzchni roboczej kolejne dwie otwarte szalki Petriego z
agarem odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna);
• próbki przed i po filtracji inkubować w 22oC przez 72h i 37oC przez 48h.
Po zakończeniu inkubacji na podstawie ilości kolonii wyrosłych na szalkach Petriego
określić zanieczyszczenie mikrobiologiczne powietrza przed i po zastosowaniu filtrów
w komorze laminarnej oraz ocenić skuteczność dezynfekcji powietrza – porównać
liczbę kolonii baterii przed i po filtracji
Zad 2. Dezynfekcja powietrza promieniami ultrafioletowymi ( UV)
Wykonanie:
• na powierzchni roboczej (blat) boksu mikrobiologicznego ustawić dwie otwarte szalki
Petriego z agarem odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna);
• po zakończeniu ekspozycji (zabraniu) szalek z agarem odżywczym włączyć lampy UV
na czas 15 minut;
• ponownie umieścić na powierzchni roboczej kolejne dwie otwarte szalki Petriego z
agarem odżywczym na czas 15 minut (metoda sedymentacyjna);
• próbki przed i po dezynfekcji przy pomocy UV inkubować w 22oC przez 72h i 37oC
przez 48h.
Po zakończeniu inkubacji na podstawie ilości kolonii wyrosłych na szalkach Petriego
określić zanieczyszczenie mikrobiologiczne powietrza przed i po zastosowaniu
promieniowania UV oraz ocenić skuteczność dezynfekcji powietrza – porównać liczbę
kolonii baterii przed i po dezynfekcji.
Zad 3. Określenie działania
(współczynnik fenolowy) - pokaz
bakteriobójczego
preparatów
dezynfekcyjnych
Przygotowanie:
• przygotować 1% roztwór fenolu;
• do kolejnych probówek wprowadzić: 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7 cm3 1% roztworu fenolu;
• objętość probówek uzupełnić do 10 cm3 roztworem fizjologicznym;
• do probówek wprowadzić po 0,2 cm3 zawiesiny bakterii Pseudomonas fluorescens;
• inkubować przez 10 minut w temperaturze 37oC;
• po inkubacji przenieść sterylnie przy pomocy pipety automatycznej 0,1 cm3 z każdej
• probówki do bulionów odżywczych (zaznaczyć zastosowane stężenia);
• inkubować w temperaturze 37 0C przez 48h;
• w analogiczny sposób przeprowadzić badanie lizolu.
Wykonanie:
• ocenić wzrost bakterii w probówkach na podstawie wizualnego stwierdzenia
zmętnienia lub jego braku;
• obliczyć współczynnik fenolowy wg wzoru:
Zad 4. Ocena bakteriobójczego działania promieni ultrafioletowych (UV) w funkcji
czasu
Przygotowanie:
• na sterylną szalkę Petriego wprowadzić 10 cm3 zawiesin bakteryjnych Escherichia
coli, a na drugą sterylną szalkę Pertiego również wprowadzić 10 cm3 Bacillus subtilis
i obie szalki naświetlać promieniami UV zgodnie z danymi zawartymi w tabeli 1;
• pobrać z naświetlanych zawiesin po 1 cm3 zawiesin i wykonać rozcieńczenia
odpowiednie dla każdego czasu naświetlania (zgodnie z tabelą 1);
• z wybranych rozcieńczeń (dane z tabeli) wykonać posiewy metodą płytek lanych
(1cm3 próbki zalać 10 cm3 rozgrzanegj/ciekłej pożywki mikrobiologicznej – agar
odżywczy, delikatnie wymieszać w celu dokładnego rozprowadzenia próbki w całej
objętości pożywki i pozostawić do zatężenia);
• próbki inkubować w temperaturze 37oC przez 48h.
Wykonanie:
• odczytać wyniki poprzez zliczenie wyrosłych koloni bakterii na każdej z płytek;
• ocenić skuteczność bakteriobójczego działania promieni UV dla bakterii Escherichia
coli i Bacillus subtilis;
• porównać skuteczność bakteriobójczego działania promieni UV dla obu bakterii i
wytłumaczyć czym spowodowane są różnice.
Tab. 1: Dane do zadania 4
czas naświetlania
Rozcieńczenia, z których
należy wykonać posiewy
[sekundy]
0
10-5, 10-6
10
10-4, 10-5
20
10-3, 10-4
30
10-2, 10-3
40
10-1, 10-2
50
100, 10-1
60
100