QUANTA LiteTM dsDNA

NOVA Lite® Skeletal Muscle (Primate) IFA Slides
Do diagnostyki in vitro
Tylko na eksport. Nie na sprzedaż w Stanach Zjednoczonych.
Kod produktu:
508320, 508320.10
Złożoność CLIA: Wysoka
Przeznaczenie
Skrawki mięśnia szkieletowego małpy są przeznaczone do używania w pośrednich badaniach
immunofluorescencyjnych, badaniach przesiewowych surowicy ludzkiej na obecność przeciwciał krążeniowych
skierowanych przeciwko komórkom mięśni prążkowanych jako pomoc w diagnozowaniu miastenii.
Podsumowanie i wyjaśnienie testu
Wykrywanie autoprzeciwciał przeciwko mięśniom szkieletowym za pomocą pośredniej immunofluorescencji na
skrawkach tkanki to standardowa metoda diagnostyki serologicznej miastenii.
Przeciwciała przeciwko elementom kurczliwym mięśnia prążkowanego są charakterystycznie powiązane z miastenią
(MG) i różnią się od przeciwciał przeciwko mięśniowi sercowemu. Istnieje szereg białek będących celami przeciwciał, ale
nie są one jeszcze w pełni zbadane i metodą z wyboru jest fluorescencja.
Zasada badania
Te preparaty są stosowane w przypadku pośredniej techniki immunofluorescencyjnej, gdzie próbki pochodzące od
pacjenta i odpowiednie grupy kontrolne są inkubowane wraz ze skrawkami. Niezwiązane przeciwciała są wypłukiwane i
podawane są odpowiednie koniugaty znakowane fluoresceiną. Niezwiązany koniugat jest wypłukiwany jak poprzednio.
Preparaty są oglądane pod mikroskopem fluorescencyjnym a próbki pozytywne wytwarzają jasnozielone zabarwienie
1
fluorescencyjne, które odpowiada obszarom skrawka, do których związało się autoprzeciwciało. .
Odczynniki
Skrawki mięśnia szkieletowego małpy w 4-dołkowych preparatach zapakowane indywidualnie w torebkę foliową z
osuszaczem.
Ostrzeżenia/środki ostrożności
Należy ustalić odpowiednie metody obsługi i utylizacji wszystkich potencjalnie infekcyjnych próbek badanych przy użyciu
tego produktu. Jedynie personel odpowiednio przeszkolony w zakresie tych metod powinien być upoważniony do
wykonywania tych badań.
Warunki przechowywania
Nieotwarte preparaty powinny być przechowywane w temperaturze 2–8°C i mogą być używane w trakcie podanego
terminu ważności. NIE ZAMRAŻAĆ. Gdy preparaty zostaną wyjęte z torebki foliowej, należy ich natychmiast użyć.
Pobieranie próbek
Próbki krwi powinny być pobierane poprzez wkłucie dożylne, powinny w naturalny sposób skrzepnąć, a surowica
powinna zostać jak najszybciej oddzielona, aby nie dopuścić do hemolizy. Surowica przed analizą może być
3
przechowywana w temperaturze 2–8°C do 7 dni lub dłużej, jeśli zostanie podzielona i będzie przechowywana w
temperaturze -20°C lub niższej. NIE zamrażać i rozmrażać surowicy więcej niż jeden raz. Unikać surowicy lipemicznej,
hemolizowanej lub skażonej bakteryjnie, ponieważ może dojść do obniżenia stężenia lub może wystąpić niewyraźne
wybarwienie.
1
Badanie
Dostarczone materiały
1.
2.
Mięsień szkieletowy (naczelne) – 1 x 4-dołkowy preparat lub mięsień szkieletowy (naczelne) – 10 x 4-dołkowy
preparat
1 broszura z instrukcjami
Wymagane materiały nie dołączone do zestawu
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Bufor PBS do płukania i rozcieńczania próbek
Naczynie do buforu PBS
Mikropipety i jednorazowe końcówki do przenoszenia próbek pobranych od pacjentów
Komora wilgotna do czynności związanych z inkubacją
Mikroskop fluorescencyjny z filtrem wzbudzającym 495 nm i filtrem barierowym 515 nm
Plastikowa gruszka laboratoryjna do wstępnego płukania w buforze PBS
Dodatkowe elementy można zakupić w firmie INOVA Diagnostics: PBS (508002), system kontroli negatywnej IFA
(508186), FITC IgG (H&L), koniugat małpy (504011, 504071), koniugat naczelnych FITC IgG (508128), błękit Evansa
1% (504049), środek do osadzania preparatu (508001, 508005, 508006) i środek do osadzania preparatu PVA (504046,
504047).
Procedura badania
Kontrola jakości
Przy każdym badaniu próbek powinna być stosowana kontrola pozytywna i negatywna.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Środek do osadzania preparatu: Wyjąć środek do osadzania preparatu z chłodziarki, aby przed użyciem
osiągnął temperaturę pokojową (18–28°C).
Rozcieńczyć próbki pochodzące od pacjenta.
Badanie przesiewowe: Rozcieńczyć próbki pochodzące od pacjenta w stosunku 1/5, dodając 20 µl surowicy
do 80 µl buforu PBS.
Miareczkowanie: Wykonać serię rozcieńczeń pozytywnie zweryfikowanych próbek przy użyciu buforu PBS (np.
1/10, 1/20, 1/40, 1/80 itp.).
Na przykład: 100 µl roztworu w rozcieńczeniu 1/5 zmieszać z 100 µl buforu PBS, aby uzyskać roztwór w
rozcieńczeniu 1/10 (powtórzyć dla innych rozcieńczeń).
Preparaty substratu. Preparaty substratu przed wyjęciem z woreczka muszą osiągnąć temperaturę pokojową
(18–28°C).
Odpowiednio oznaczyć preparaty, umieścić w komorze wilgotnej i dodać kontrolę pozytywną oraz negatywną do
odpowiednich dołków. Do pozostałych dołków dodać 50–100 µl rozcieńczonych próbek pochodzących od
pacjenta.
Inkubacja preparatu. Inkubować preparaty przez 30 minut w komorze wilgotnej w temperaturze pokojowej (18–
28°C).
Płukanie PBS. Wyjąć preparaty z komory wilgotnej i krótko przepłukać PBS posługując się gruszką
laboratoryjną. Nie kierować strumienia bezpośrednio na dołki. Umieścić preparaty w statywie, zanurzyć w
buforze PBS i wstrząsać lub mieszać przez 5–10 minut.
Dodanie fluorescencyjnego koniugatu. Strząsnąć nadmiar buforu PBS i osuszyć przestrzeń wokół dołków.
Umieścić preparaty ponownie w komorze wilgotnej i natychmiast przykryć każdy dołek kroplą odpowiednio
rozcieńczonego fluorescencyjnego koniugatu. NIE POZOSTAWIAĆ ODKRYTYCH DOŁKÓW NA CZAS
DŁUŻSZY NIŻ 15 SEKUND. Wyschnięcie substratu w poważnym stopniu wpływa na wyniki. Użycie koniugatu
małpy w znacznym stopniu poprawi wyniki (np. 504011).
Inkubacja preparatu. Inkubować preparaty przez 30 minut w komorze wilgotnej w ciemności, w temperaturze
pokojowej (18–28°C).
Płukanie PBS. Wykonać ponownie płukanie, zgodnie z punktem 5. OPCJONALNE BARWIENIE
KONTRASTOWE. Przed zanurzeniem preparatu dodać 2–3 krople błękitu Evansa 1% na 100 ml buforu PBS.
Osadzanie ze szkiełkiem nakrywkowym. Wyjąć po kolei preparaty z płukanki PBS. Osuszyć szybko obszar
wokół dołków i do każdego dołka dodać kroplę środka do osadzania preparatu. Opuścić ostrożnie preparat na
szkiełko nakrywkowe. Należy starać się nie dopuścić do powstania pęcherzyków powietrza, ale jeśli występują,
nie należy ich usuwać. Zetrzeć nadmiar środka do osadzania wokół krawędzi szkiełka nakrywkowego.
Obejrzeć preparaty pod mikroskopem fluorescencyjnym. Preparaty mogą być przechowywane do 3 dni w
temperaturze 2–8°C, w ciemności, bez istotnej utraty fluorescencji.
2
Wyniki
Kontrola jakości
Próbka surowicy zawierająca autoprzeciwciała mięśnia prążkowanego powinna wykazać żywe jasnozielone zabarwienie
włókien mięśnia prążkowanego. Kontrola negatywna powinna wykazać zgniłozielone zabarwienie we wszystkich
tkankach, bez dostrzegalnej fluorescencji. Jeśli powyżej opisane kontrole nie zostaną uzyskane, badanie jest
nieprawidłowe i należy je powtórzyć.
Interpretacja wyników
Kolorowy przykład fotograficzny tego wzoru można znaleźć w punkcie ref. 2. Wyniki są raportowane jako pozytywne lub
negatywne. UWAGA: Każde laboratorium powinno ustalić, na którym etapie wynik pozytywny jest traktowany jako
klinicznie istotny.
Ograniczenia badania
1.
2.
3.
Źródło światła, filtry i przyrządy optyczne różnych producentów mikroskopów fluorescencyjnych wpływają na
wrażliwość zestawu. Działanie mikroskopu jest w dużym stopniu uzależnione od prawidłowej
obsługi/serwisowania. Szczególnie dotyczy to wycentrowania lampy rtęciowej oraz jej wymiany, zgodnie z
zaleceniami serwisowymi.
Przydatność do stosowania z odczynnikami IFA innych producentów nie została sprawdzona, ale stosowanie z
takimi odczynnikami nie koniecznie musi być wykluczone.
Test ten, gdy przeprowadza się go jako jedyny, nie powinien być rozpatrywany jako diagnostyczny. Muszą
zostać uwzględnione wszystkie inne czynniki, w tym historia kliniczna pacjentów oraz inne wyniki serologiczne
lub wyniki badań biopsyjnych.
Podsumowanie badania
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Doprowadzić środek do osadzania preparatu do temperatury pokojowej.
Rozcieńczyć bufor PBS wodą destylowaną.
Rozcieńczyć surowicę pacjenta buforem PBS w stosunku 1/5.
Doprowadzić preparaty substratu do temperatury pokojowej (18–28°C).
Do odpowiednich dołków wlać 50–100 µl grupy kontrolnej pozytywnej i negatywnej oraz rozcieńczoną surowicę
pacjenta.
Inkubować w komorze wilgotnej przez 30 minut.
Płukać przez 5–10 minut w buforze PBS.
Osuszyć obszar wokół każdego dołka i natychmiast pokryć każdy dołek kroplą koniugatu.
Inkubować zgodnie z punktem 6.
Przepłukać zgodnie z punktem 7.
Zamontować.
Obejrzeć preparat pod mikroskopem fluorescencyjnym.
3
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
Weller T. H. & Coons A. H. (1954). Fluorescent antibody studies with agent of Varicella and Herpes Zoster
propagated in vitro: Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 86: 789-794.
Bradwell A.R. et al (2008). Atlas of Tissue Autoantibodies (Third Edition). Publ. The Binding Site Ltd.,
Birmingham, UK
rd
Protein Reference Handbook of Autoimmunity (3 Edition) 2004. Ed. A. Milford Ward, G.D. Wild. Publ. PRU
Publications, Sheffield. 14.
Wyprodukowano przez:
NOVA Lite jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics, Inc.
Copyright 2011. Wszelkie prawa zastrzeżone©
Wyprodukowano przez:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
Stany Zjednoczone Ameryki
Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): 00+ 1 858-805-7950
[email protected]
Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert, Niemcy
Tel.: +49-6894-581020
Faks.: +49-6894-581021
www.mt-procons.com
628320POL
Merzec 2011
Wersja 0
4