Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)

Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe
(Dako Omnis)
Numer katalogowy
G111800-2
Przeznaczenie
Sonda Agilent ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) jest przeznaczona do wykrywania
przegrupowań obejmujących gen ALK metodą fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ (ang.
fluorescence in situ hybridization, FISH). W przypadku próbek tkanki płucnej utrwalonych
w formalinie i zatopionych w parafinie (FFPE) zaleca się stosowanie sondy dwukolorowej do
urządzenia Dako Omnis.
Podsumowanie
Sondy typu break apart składają się z dwóch sond podrzędnych, które mają zostać umieszczone
po przeciwnych stronach punktu translokacji dla danego genu. Każda z nich jest znakowana
innym kolorem. W zdrowych komórkach sondy te generują sygnały, które są ściśle dopasowane
wielkością i kolokalizowane (2 fuzje). Po translokacji sygnały są „dzielone” i nie ulegają
kolokalizacji (na przykład: 1 czerwony, 1 zielony, 1 fuzja).
Elementy zestawu
Element
Numer
katalogowy
Ilość
Przechowywanie
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe
(Dako Omnis)
G111800-85510
20 testów
Od –25°C do –15°C
Sondę ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) należy chronić przed działaniem światła,
gdy tylko jest to możliwe. Z zestawem wysyłane jest świadectwo analizy.
Agilent Technologies
Ostrzeżenia i
środki ostrożności
1 Do stosowania w diagnostyce in vitro.
2 Unikać zanieczyszczeń bakteryjnych, które mogą prowadzić do uzyskania błędnych wyników.
3 Ze wszystkimi próbkami biologicznymi i materiałami, z którymi mają one kontakt, należy postępować
4
5
6
7
8
9
10
Stosowanie
preparatów
kontrolnych
Informacje na
temat
bezpieczeństwa
Wskaźniki
niestabilności lub
pogorszenia
jakości
odczynników
Materiały
wymagane, ale
niedostarczane
w taki sposób, jakby mogły przenosić zakażenie. Należy je utylizować z zachowaniem odpowiednich
środków ostrożności, zgodnie z przepisami krajowymi, lokalnymi i miejscowymi. Należy zapoznać się z
odpowiednimi środkami ostrożności dotyczącymi patogenów przenoszonych przez krew, wskazanymi
przez placówkę lub regulacje lokalne. Nigdy nie pipetować ustami. Unikać kontaktu próbki ze skórą i
błonami śluzowymi.
Podczas uzyskiwania, manipulacji i utylizacji potencjalnie rakotwórczych odczynników należy
stosować standardowe środki ostrożności.
Należy zachować ostrożność, aby uniknąć krzyżowego zanieczyszczenia próbek podczas wszystkich
etapów tej procedury, ponieważ może to prowadzić do uzyskania błędnych wyników.
Jeśli to możliwe, należy stosować rękawiczki beztalkowe, aby zminimalizować wprowadzanie
cząsteczek talku do próbki lub materiałów zestawu.
Całkowity okres stabilności sondy ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) wynosi 80 godzin
pod warunkiem przechowywania jej w module Reagent Storage Module urządzenia Dako Omnis.
Czas w urządzeniu jest kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Po zakończeniu cyklu pracy
natychmiast przenieść sondę ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) do przechowywania
w temperaturze od –25°C do –15°C w celu zachowania czasu stabilności w urządzeniu.
Wykazano, że jakość działania sondy ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) pozostaje
niezmienna do maksymalnie 10 cykli zamrażania i rozmrażania.
Interpretacja kliniczna wszystkich wyników testu powinna być dokonywana przez wykwalifikowany
personel w kontekście historii medycznej pacjenta i wyników innych badań laboratoryjnych.
Zalecane jest stosowanie preparatów kontrolnych.
Zaleca się oznaczanie preparatów kontrolnych jednocześnie z preparatami od pacjentów przy użyciu tego
samego protokołu, aby monitorować jakość oznaczenia i ocenić dokładność ustalania liczby sygnałów.
Karty charakterystyki (MSDS) dostępne są na stronie internetowej www.agilent.com.
Po dostarczeniu sprawdzić opakowania. Nie stosować zawartości opakowania, jeśli etykieta z plombą jest
otwarta na perforacjach lub przy dostawie zawartość fiolki jest rozmrożona. W celu uzyskania pomocy
lub wsparcia technicznego należy kontaktować się z firmą Agilent Genomics.
Procedurę opisaną w niniejszym dokumencie oparto na następujących materiałach dodatkowych.
Aby uzyskać dalsze informacje, należy zapoznać się z instrukcją obsługi każdego urządzenia.
•
Zaawansowana platforma systemu barwienia Dako Omnis; kod Dako GI100
•
Urządzenie Dako Omnis Mixing Device; kod Dako GC116
•
Pokrywa ISH Lid do urządzenia Dako Omnis; kod Dako GC102
•
Roztwór ISH Ethanol Solution 96% (Dako Omnis); kod Dako GM300 (gotowy do użycia)
•
Roztwór ISH Pre-Treatment Solution (20×) (Dako Omnis); kod Dako GM301
•
Roztwór ISH Pepsin (Dako Omnis); kod Dako GM302 (gotowy do użycia)
•
Bufor ISH Stringent Wash Buffer (20×) (Dako Omnis); kod Dako GM303
•
Clearify (środek czyszczący); kod Dako GC810
•
Bufor Wash Buffer (20×) (Dako Omnis); kod Dako GC807
•
Roztwór ISH Cleaning Solution (Dako Omnis); kod Dako GC207 (gotowy do użycia)
•
Medium Fluorescence Mounting Medium (Dako Omnis); kod Dako GM304 (gotowe do użycia, zawiera
4',6-diamidyno-2-fenyloindol (DAPI))
•
Szkiełka nakrywkowe do zamykania preparatów (24 mm × 50 mm)
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)
2
Przebieg pracy
Sondy ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) można używać do oznaczeń metodą automatycznej,
bezpośredniej fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ (FISH) w urządzeniu Dako Omnis z wykorzystaniem
preparatów wycinków tkanki płucnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie (FFPE).
Automatyczna procedura barwienia FISH w urządzeniu Dako Omnis obejmuje odparafinowanie
skrawków tkankowych, odmaskowanie antygenu, trawienie pepsyną, hybrydyzację oraz dokładne
płukanie. Preparaty rozładowywuje się w stacji rozładunku suchych elementów. Wszystkie etapy
protokołu są wstępnie zaprogramowane w oprogramowaniu Dako Omnis.
Do przetwarzania w urządzeniu Dako Omnis są dostępne dwa protokoły: ALK IQFISH i ALK IQFISH
(Extra Wash). Protokół ALK IQFISH zapewnia nieco krótszy czas pracy i pozwala na przetwarzanie
preparatów HER2 IQFISH pharmDx (Dako Omnis) w jednym stojaku na preparaty Dako Omnis.
W przypadku wymagających próbek zastosowanie protokołu ALK IQFISH (Extra Wash) może
spowodować uzyskanie niższego poziomu tła. Należy pamiętać, że nie można zastosować dwóch
protokołów w ramach jednego stojaka na preparaty. Etapy protokołu automatycznego barwienia można
przeglądać za pomocą stacji roboczej Dako Link Omnis Workstation i podsumowano je w Tabela 1.
Tabela 1
Uproszczony przegląd protokołów automatycznego barwienia dla ALK IQFISH wykonywanych w urządzeniu
Dako Omnis
Etap
Odczynnik
Dewaxing
Clearify (środek czyszczący)
(Odparafinowanie)
Czas i temperatura
10 minut, 38°C
Target retrieval
(Odmaskowanie
antygenu)
Roztwór ISH Pre-Treatment Solution (Dako Omnis)
15 minut, 97°C
Wash (Płukanie)
Roztwór ISH Ethanol Solution 96% (Dako Omnis)
2 × 3 minuty, 32°C
Digestion
(Wytrawianie)
ISH Pepsin (Dako Omnis)
30 minut
Drying (Suszenie) —
15 minut, 45°C
Denaturation
(Denaturacja)
—
10 minut, 66°C
Hybridization
(Hybrydyzacja)
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)
75 minut, 45°C
Stringent wash
(Dokładne
płukanie)
Bufor ISH Stringent Wash Buffer (Dako Omnis)
10 minut, 61°C
Cool down wash Protokół ALK IQFISH: bufor ISH Stringent Wash Buffer (Dako Omnis)
(Płukanie
Protokół ALK IQFISH (Extra Wash): bufor Wash Buffer (Dako Omnis)
chłodzące)
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)
Krótkie płukanie, 1 cykl
Krótkie płukanie, 2 cykle
3
Tabela 2 zawiera opis procedur uwzględniających zastosowanie sondy ALK IQFISH Break-Apart Probe
(Dako Omnis) przy użyciu protokołów automatycznego barwienia Dako Omnis. Instrukcje dotyczące
ładowania preparatów, pokrywy ISH Lid i odczynników można znaleźć w podręcznikach użytkownika
urządzeń Dako Omnis.
Tabela 2
Procedury
Procedury przygotowania odczynnika do histologii
1 Przygotować sondę ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis). Dostarczona fiolka odczynnika zawiera
metalową kulkę pokrytą złotem przeznaczoną do mieszania. Przed załadowaniem fiolki do urządzenia Dako Omnis
odczynnik należy rozmrozić i dokładnie wymieszać, ponieważ podczas zamrażania ulega rozdziałowi na fazy.
Sondy należy mieszać za pomocą urządzenia Dako Omnis Mixing Device, zgodnie z opisem poniżej. W celu uzyskania
dalszych szczegółów należy zapoznać się z Podręcznikiem użytkownika urządzenia Mixing Device. Zawsze
wymieszać zawartość fiolki sondy ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) tuż przed załadowaniem do
urządzenia. Nie wstrząsać fiolki.
• Wyjąć fiolkę sondy ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) z zamrażarki i załadować ją do urządzenia Dako
Omnis Mixing Device.
• Podłączyć urządzenie Mixing Device i upewnić się, że zielona lampka stanu jest włączona. Wybrać program
Thaw + Mix (Rozmroź + mieszaj), aby rozpocząć mieszanie zawartości fiolki.
• Po ukończeniu programu Thaw + Mix (Rozmroź + mieszaj) usunąć fiolkę sondy z urządzenia Mixing Device.
• Po rozmrożeniu i zmieszaniu trzymać fiolkę w pozycji pionowej, aby zapobiec gromadzeniu się roztworu sondy
w korku fiolki.
• Otworzyć korek zamknięcia kabłąkowego, odchylić do tyłu i zatrzasnąć w wycięciu (szczegóły znajdują się
w Podstawowym podręczniku użytkownika Dako Omnis).
• Niezwłocznie załadować fiolkę do modułu Reagent Storage Module urządzenia Dako Omnis. Jeśli podczas
barwienia używana jest funkcja ciągłego ładowania odczynników, należy upewnić się, że czas upływający od
mieszania do pobrania z fiolki w urządzeniu Dako Omnis wynosi co najmniej 10 minut.
• Po zakończeniu przebiegu natychmiast przenieść sondę ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis) do
przechowywania w temperaturze od –25°C do –15°C.
UWAGA: Jeśli fiolka jest używana bezpośrednio po odebraniu w suchym lodzie, przed załadowaniem do urządzenia
Mixing Device należy ją rozmrozić, a następnie użyć programu Mix only (Tylko mieszaj) w celu wymieszania
zawartości fiolki (nie należy używać programu Thaw + Mix (Rozmroź + mieszaj)).
2 Przygotować roztwór SH Pre-Treatment Solution. Przygotować roztwór roboczy przez rozcieńczenie roztworu ISH
Pre-Treatment Solution (20×) (Dako Omnis) w stosunku 1:20 w następujący sposób:
• Napełnić butelkę na płyny 3,5 l Dako Omnis oznaczoną jako PTB (niebieska etykieta, kod GC109) do linii
napełnienia wodą dejonizowaną (3,325 l). Przed napełnieniem umieścić butelkę na płyny na płaskiej powierzchni.
• Przelać zawartość jednej butelki ze 175 ml koncentratu roztworu ISH Pre-Treatment Solution (20x) (Dako Omnis)
do butelki na płyny. Koncentrat zawiera środek przeciwbakteryjny i obojętny zielony barwnik umożliwiający łatwą
identyfikację.
• Przenieść odczepianą etykietę z butelki po koncentracie na butelkę na płyny. Dokręcić nakrętkę i delikatnie
odwrócić butelkę na płyny do góry dnem 2–3 razy.
• Użyć ręcznego skanera kodów paskowych Dako Omnis do identyfikacji odczynnika (zeskanować odczepianą
etykietę i butelkę na płyny).
• Niezwłocznie załadować butelkę na płyny do urządzenia Dako Omnis.
Jeśli rozcieńczony roztwór jest przechowywany w urządzeniu Dako Omnis, należy go zużyć w ciągu 7 dni. Czas
w urządzeniu jest kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Niewykorzystany rozcieńczony roztwór można
przechowywać w temperaturze 2–8°C przez 30 dni. Po przechowywaniu w chłodnym miejscu należy przed
załadowaniem do urządzenia Dako Omnis ogrzać rozcieńczony roztwór do co najmniej 18°C.
UWAGA: W przypadku zmętnienia rozcieńczony roztwór nie nadaje się do użycia.
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)
4
Tabela 2
Procedury
3 Przygotować bufor ISH Stringent Wash Buffer. Przygotować roztwór roboczy poprzez rozcieńczenie buforu ISH
Stringent Wash Buffer (20×) (Dako Omnis) w stosunku 1:20 w następujący sposób:
• Napełnić butelkę na płyny 3,5 l Dako Omnis oznaczoną jako PTB (niebieska etykieta, kod GC109) do linii
napełnienia wodą dejonizowaną (3,325 l). Przed napełnieniem umieścić butelkę na płyny na płaskiej powierzchni.
• Przelać zawartość butelki ze 175 ml koncentratu buforu ISH Stringent Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) do butelki
na płyny. Koncentrat zawiera środek przeciwbakteryjny, detergent i obojętny żółty barwnik umożliwiający łatwą
identyfikację.
• Przenieść odczepianą etykietę z butelki po koncentracie na butelkę na płyny. Dokręcić nakrętkę i delikatnie
odwrócić butelkę na płyny do góry dnem 2–3 razy.
• Użyć ręcznego skanera kodów paskowych Dako Omnis do identyfikacji odczynnika (zeskanować odczepianą
etykietę i butelkę na płyny).
• Niezwłocznie załadować butelkę na płyny do urządzenia Dako Omnis.
Jeśli rozcieńczony roztwór jest przechowywany w urządzeniu Dako Omnis, należy go zużyć w ciągu 7 dni. Czas
w urządzeniu jest kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Niewykorzystany rozcieńczony roztwór można
przechowywać w temperaturze 2–8°C przez 30 dni. Po przechowywaniu w chłodnym miejscu należy przed
załadowaniem do urządzenia Dako Omnis ogrzać rozcieńczony roztwór do co najmniej 18°C.
UWAGA: W przypadku zmętnienia rozcieńczony roztwór nie nadaje się do użycia.
4 Załadować roztwór ISH Ethanol Solution 96% (Dako Omnis). Roztwór ISH Ethanol Solution 96% (Dako Omnis) jest
odczynnikiem gotowym do użycia. Przed jego załadowaniem do urządzenia Dako Omnis należy otworzyć korek
zamknięcia kabłąkowego, odchylić do tyłu i zatrzasnąć w wycięciu.
Całkowity okres stabilności roztworu ISH Ethanol Solution 96% (Dako Omnis) wynosi 80 godzin pod warunkiem
przechowywania go w module Reagent Storage Module urządzenia Dako Omnis. Czas w urządzeniu jest
kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Po wykonaniu analizy roztwór ISH Ethanol Solution 96%
(Dako Omnis) można przechowywać w temperaturze 2–8°C, aby zachować czas stabilności w urządzeniu.
5 Załadować produkt ISH Pepsin (Dako Omnis). Odczynnik ISH Pepsin (Dako Omnis) jest odczynnikiem gotowym do
użycia. Przed jego załadowaniem do urządzenia Dako Omnis należy upewnić się, że odczynnik jest rozmrożony,
otworzyć korek zamknięcia kabłąkowego, odchylić do tyłu i zatrzasnąć w wycięciu.
Całkowity okres stabilności odczynnika ISH Pepsin (Dako Omnis) wynosi 80 godzin pod warunkiem przechowywania
go w module Reagent Storage Module urządzenia Dako Omnis. Czas w urządzeniu jest kontrolowany przez
oprogramowanie Dako Omnis. Po wykonaniu analizy produkt ISH Pepsin (Dako Omnis) można przechowywać
w temperaturze od –18°C do 8°C, aby zachować czas stabilności w urządzeniu.
6 Załadować dodatkowe akcesoria Dako Omnis. Załadować akcesoria wymienione poniżej do urządzenia Dako
Omnis, jak określono w podręczniku użytkownika Dako Omnis:
• Woda dejonizowana
• Roztwór roboczy buforu Wash Buffer rozcieńczony z buforu Wash Buffer (20×) (Dako Omnis), kod GC807
• Clearify (środek czyszczący), kod GC810
• Roztwór ISH Cleaning Solution (Dako Omnis), kod GC207
• Pokrywa ISH Lid, kod GC102
Procedury przed barwieniem
1 W oprogramowaniu Dako Link Omnis stacji roboczej wybrać protokół stosowany w odniesieniu do każdego
preparatu. W obszarze protokołów IQFISH wybrać ALK IQFISH lub ALK IQFISH (Extra Wash).
2 Wydrukować etykiety preparatów i przykleić je do szkiełek podstawowych.
3 Umieścić preparaty w statywie na preparaty. W celu uzyskania szczegółowych informacji należy zapoznać się z
Podstawowym podręcznikiem użytkownika Dako Omnis. W statywie na preparaty może znajdować się od jednego
do pięciu preparatów. Zaleca się, aby podczas barwienia odczynnikiem ALK IQFISH wybarwić co najmniej dwa
preparaty.
4 Załadować statyw na preparaty do urządzenia Dako Omnis.
5 Załadować pokrywę/-y ISH Lid do urządzenia Dako Omnis (jedna pokrywa ISH Lid na każdy statyw na preparaty).
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)
5
Tabela 2
Procedury
6 Sprawdzić, czy w urządzeniu Dako Omnis znajdują się butelki z płynami i są w nim zarejestrowane. Do wymaganych
płynów należą: Clearify (środek oczyszczający), rozcieńczony roztwór ISH Pre-Treatment Solution (Dako Omnis),
rozcieńczony bufor ISH Stringent Wash Buffer (Dako Omnis) oraz rozcieńczony bufor Wash Buffer (Dako Omnis).
Sposób przygotowania tych roztworów opisano w Procedury przygotowania odczynnika do histologii powyżej.
7 Upewnić się, że do modułu przechowywania odczynników załadowano fiolki zawierające roztwór ISH Ethanol
Solution 96% (Dako Omnis), ISH Pepsin (Dako Omnis) oraz świeżo zmieszaną sondę ALK IQFISH Break-Apart Probe
(Dako Omnis). Sprawdzić, czy wszystkie korki zamknięcia kabłąkowego są otwarte. Sposób przygotowania tych
roztworów opisano w Procedury przygotowania odczynnika do histologii powyżej.
8 Aby rozpocząć cykl pracy przy użyciu wybranego protokołu barwienia, należy postępować zgodnie z instrukcjami na
ekranie dotykowym Dako Omnis i nacisnąć przycisk Done (Gotowe), aby rozpocząć procedurę barwienia. Można
monitorować postęp wykonywania protokołu barwienia na stacji roboczej Dako Link Omnis.
Jeśli po zakończeniu cyklu pracy nie są planowane kolejne cykle barwienia ISH, wszystkie odczynniki należy
umieścić w zalecanych temperaturach przechowywania.
Procedury po barwieniu
1 Po zakończeniu protokołu barwienia usunąć preparaty ze stacji rozładunku suchych elementów urządzenia Dako
Omnis.
2 Wyjąć medium Fluorescence Mounting Medium (Dako Omnis) zawierające filtr DAPI z chłodni w celu użycia poza
urządzeniem Dako Omnis.
3 Nałożyć maks. 30 l medium Fluorescence Mounting Medium (Dako Omnis) na powierzchnię docelową preparatu i
przykryć szkiełkiem nakrywkowym. Preparat tkankowy musi zostać całkowicie pokryty medium zamykającym.
Po użyciu medium Fluorescence Mounting Medium (Dako Omnis) należy niezwłocznie umieścić w temperaturze
przechowywania (2–8°C).
4 Obejrzeć preparaty pod mikroskopem fluorescencyjnym z filtrem podwójnym Cy3/FITC lub pomarańczowo-zielonym.
Odczyt preparatów można przeprowadzić po 15 minutach lub w ciągu 7 dni od zatopienia.
5 Preparaty należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od –18°C do 8°C w celu zminimalizowania
możliwości ich blaknięcia.
Ograniczenia
procedury
Wsparcie
techniczne
Prawidłowe przechowywanie odczynników i próbek oraz postępowanie z nimi są niezwykle istotne dla
jakości działania zestawu. Cały sprzęt laboratoryjny używany do przygotowania preparatu docelowego
podczas tej procedury powinien być kalibrowany i poddawany konserwacji w celu zapewnienia
dokładności. Niedokładne odmierzenie odczynników może wpłynąć negatywnie na wynik procedury.
Kraj
E-mail
Austria
[email protected]
Telefon (lokalny, bezpłatny)
01 25125 6800
Belgia
[email protected]
02 404 92 22
Dania
[email protected]
45 70 13 00 30
Finlandia
[email protected]
010 802 220
Francja
[email protected]
0810 446 446
Niemcy
[email protected]
0800 603 1000
Włochy
[email protected]
800 012575
Holandia
[email protected]
020 547 2600
Hiszpania
[email protected]
901 11 68 90
Szwecja
[email protected]
08 506 4 8960
Szwajcaria
[email protected]
0848 8035 60
Wielka Brytania/Irlandia [email protected]
0845 712 5292
Pozostałe kraje
http://www.agilent.com/genomics/contactus
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)
6
Tabela symboli
Numer katalogowy
Europejski znak zgodności
Numer serii
Data ważności
Granica temperatury
Producent
Zawiera odczynnik w ilości wystarczającej na <n>
testów
Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro
Działa drażniąco
Sprawdzić w instrukcji stosowania
Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej
Agilent Technologies, Inc.
1834 State Highway 71 West
Cedar Creek, Texas 78612
USA
AGILENT TECHNOLOGIES FRANCE
PARC TECHNOPOLIS - ZA COURTABOEUF
3 AVENUE DU CANADA
CS 90263
91978 LES ULIS CEDEX
FRANCJA
© Agilent Technologies, Inc. 2016
Wersja A0, marzec 2016 r.
*5991-9573
5991-9573
Sonda ALK IQFISH Break-Apart Probe (Dako Omnis)
7