Dako Omnis

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-S100
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Nr kat. GA504
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Polyclonal Rabbit Anti-S100, Ready-to-Use (Dako Omnis), jest przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii w urządzeniu Dako Omnis. Przeciwciała te znakują komórki wykazujące ekspresję S100 i są
przydatne w identyfikacji nowotworów wykazujących dodatni odczyn na S100, takich jak czerniak złośliwy (1, 2),
histocytoza komórek Langerhansa (3), chrzęstniak zarodkowy (4) i nerwiak (5). Panel obejmujący przeciwciała Dako
Polyclonal Anti-S100 został zastosowany przez grupę International Lymphoma Study Group do klasyfikacji guzów z
komórek przypuszczalnie histiocytarnych/dendrytycznych (6). Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego
braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna
być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
S100 naleŜy do rodziny wysoce złoŜonych wielogenowych białek wiąŜących wapń (Ca2+), o niskich masach
cząsteczkowych (Mr między 9000 a 13000). Rodzina składa się z 19 elementów, które podlegają róŜnej ekspresji w
wielu typach komórek. Dlatego S100B (wcześniej S100β) występuje najczęściej w komórkach glejowych
ośrodkowego i obwodowego układu nerwowego, w melanocytach, chondrocytach i adipocytach, podczas gdy
S100A1 (wcześniej S100A/S100α) występuje najczęściej w kardiomiocytach, wolnokurczliwych komórkach mięśni
szkieletowych, nabłonku komórek ślinowych i komórkach nerkowych. Ponadto S100B występuje w komórkach guza i
populacji neuronów, natomiast S100A1 wykryto takŜe w neuronach hipokampa. S100A6 podlega ekspresji w
fibroblastach i komórkach mięśni gładkich i serca (5) .
Element rodziny S100 brał udział w regulacji zaleŜnej od jonów Ca2+ róŜnych wewnątrzkomórkowych procesów np.
fosforylacji białka, proliferacji komórek (w tym zwyrodnienie nowotworowe) i róŜnicowaniu (7).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje do
systemu detekcji IHC.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
S100 wyizolowane z mózgu wołowego.
Swoistość
Przeciwciało było poddawane absorpcji w fazie stałej z białkami osocza ludzkiego i białkami surowicy wołowej.
W technice Western blot oczyszczonych ludzkich białek S100 przeciwciało wykazuje silny odczyn w przypadku
S100B, słaby w przypadku S100A1 i bardzo słaby dla S100A6. Nie obserwowano odczynu w innych testowanych
białkach S100, S100A2, S100A3 i S100A4 (8).
W testach wykonywanych pośrednią metodą ELISA nie obserwuje się reakcji z ludzkim osoczem ani surowicą
wołową.
W badaniach immunohistochemicznych na tkankach utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie przeciwciało
wykazuje reaktywność krzyŜową z białkowym odpowiednikiem S100 u krów, psów, koni, szczurów i świń.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
(123431-001)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Przechowywa ć z zamknietą pokrywką. Nie naleŜy uŜywać odczynników po
upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Stabilność systemu wynosi 80 godzin. Pozostała stabilność systemu
jest kontrolowana przez oprogramowanie Dako Omnis. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ
podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na
niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać
kontrole pozytywne i negatywne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z
działem wsparcia technicznego firmy Dako.
P02244PL_001_GA504/2012.12 p. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR nr 33 21 13 17
Skrócona instrukcja
uŜytkownika
Krok
Utrwalanie/zatapia
nie
Utrwalane formaliną, zatapiane w parafinie
Comments (Komentarze)
Odparafinowanie
Obróbka wstępna
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. GV804)
HIER 30 min
Przeciwciało
Produkt gotowy do uŜycia
Inkubacja 17,5 min
Kontrola
negatywna
FLEX Negative Control, Rabbit (nr kat. IR600)
Inkubacja 17,5 min
Wizualizacja
EnVision™ FLEX (nr kat. GV800)
Block: 3 min; Polymer: 20 min;
Chromogen: 5 min
Barwnik
kontrastowy
Hematoxylin (nr kat. GC808)
Inkubacja 3 min
Tkanka kontrolna
OkręŜnica
Odczyn jądrowy i cytoplazmatyczny
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zaleca się stosowanie w celu uzyskania
lepszego przylegania skrawków
tkankowych do szkiełek
Zatapianie
preparatu
Wymagane niewodne, trwałe zatapianie
preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia, skrawki
muszą być odwodnione, oczyszczone i
zakryte za pomocą środka do trwałego
zatapiania
Oprzyrządowanie
Dako Omnis
Odczynniki znajdują się w fiolkach
dostosowanych do urządzenia
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje przeprowadzania
procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie
próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości 4 µm.
Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Zaleca się przeprowadzenie na tkankach HIER z
zastosowaniem odczynnika EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis), nr kat.
GV804. Procesy odparafinowania, odparowania i odmaskowania antygenu przeprowadza się w urządzeniu Dako
Omnis. Informacje moŜna znaleźć w Podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
Program: w systemie Dako Omnis wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe
informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Podstawowym
podręczniku uŜytkownika urządzenia Dako Omnis. Jeśli protokoły są niedostępne w uŜywanym urządzeniu Dako
Omnis, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji
przeprowadza się w temperaturze 32 °C w urz ądzeniu dako Omnis.
Wizualizacja: zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis), nr kat. GV800.
Wizualizacja odbywa się w Dako Omnis.
Barwienie kontrastowe: zaleca się stosowanie barwnika Hematoxylin (Dako Omnis), nr kat. GC808. The
counterstaining is performed onboard Dako Omnis.
Zatapianie: po barwieniu w Dako Omnis skrawki naleŜy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą
środka do trwałego zatapiania.
Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać pozytywne i
negatywne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna powinna obejmować
okręŜnicę a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka wydajnościowa". Zalecana kontrola negatywna to FLEX Universal Negative Control, Rabbit (Dako
Omnis), nr kat. GA600.
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują zarówno wzór odczynu cytoplazmatycznego, jak i jądrowego.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe:
stwierdzono odczyn w komórkach Langerhansa i melanocytach skóry, komórkach
międzypalczastych retikulum węzłów chłonnych, komórkach retikularnych nabłonka rdzenia w grasicy,
chondrocytach w tkance chrzęstnej, w adypocytach z niektórych biopsji, komórkach mięśniowo-nabłonkowych w
gruczołach ślinowych i sutka, komórkach gwiaździstych grudek przysadki i komórkach Schwanna oraz komórkach
glejowych tkanki nerwowej. Słaby odczyn wykazano w komórkach nabłonka gruczołów sutkowych i potowych. Nie
stwierdzono barwienia w przypadku prawidłowych hepatocytów, nabłonka przewodów Ŝółciowych, nabłonka
pęcherzyka Ŝółciowego, przełyku, Ŝołądka, nabłonka jelita cienkiego i grubego, nabłonka nerkowego oraz komórkach
dróg moczowych i śródbłonka (9). W okręŜnicy komórki satelitarne obwodowego układu nerwowego w splocie
Auerbacha wykazują umiarkowany lub silny odczyn cytoplazmatyczny, a takŜe odczyn jądrowy. Adypocyty i komórki
zwojowe w splocie Auerbacha wykazują słaby lub umiarkowany odczyn cytoplazmatyczny lub jądrowy.
Tkanki nieprawidłowe: przeciwciało znakowało 31/31 przypadków (100%) czerniaka złośliwego skóry, 23/24 (96%)
przypadków czerniaka przerzutowego, w tym 10 bezbarwnikowych, 6/6 desmoplastycznych i 1/1 przypadek
śluzowatego czerniaka złośliwego. W 30 przypadkach zmian łagodnych i 15 znamion dysplastycznych
zaobserwowano uniwersalne homogeniczne barwienie we wszystkich przypadkach (1). W innym badaniu
pierwotnych czerniaków złośliwych (2) stwierdzono 67/67 (100%) przypadków barwienia z uŜyciem przeciwciała, w
tym 5/5 przypadków guzów wrzecionowatokomórkowych i desmoplastycznych. W 27 przypadkach histocytozy
komórek Langerhansa przeciwciało znakowało 88,5% przypadków, uwzględniając zlokalizowane oraz rozsiane
choroby (3). Z 30 zbadanych chrzęstaniaków zarodkowych wszystkie wykazały silne barwienie chondroblastów z
(123431-001)
Dako Denmark A/S
P02244PL_001_GA504/2012.12 p. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR nr 33 21 13 17
przeciwciałem (4). W przypadku typowych nerwiaków osłonkowych ze zmianami łagodnymi odczyn wykazało 12/12
przypadków oraz 2/4 przypadki złośliwych nerwiaków osłonkowych. Z włókniakonerwiaków 6/6 przypadków
wykazało słabą ekspresję S100, z wyjątkiem niektórych wyizolowanych komórek i kilku procesów komórkowych,
które wykazały odczyn wyraźnie dodatni (5). NaleŜy zwrócić uwagę, Ŝe ekspresję S100 wykazano w 15 z 133
przypadkach pierwotnych nowotworów skóry innych niŜ barwnikowe tj. w 7/16 przypadkach nowotworów
wydzielających na zewnątrz, w 2/8 przypadkach przerzutowych raków narządów trzewnych, w 2/2 przypadki
złośliwych nerwiaków osłonkowych i w 4/5 przypadkach mięśniakomięsaków (2). Przeciwciało znakowało 24/25
(84%) przypadków gruczolakoraków jajników, 12/15 (80%) ślinianek, 28/36 (78%) endometrium, 15/23 (65%) nerek,
12/20 (60%) sutka, 7/28 (25%) okręŜnicy/odbytu, 2/10 (20%) Ŝołądka i 2/27 (7%) płuc. Nie odnotowano barwienia w
badaniach gruczolakoraków przełyku, pęcherzyka Ŝółciowego, trzustki i stercza. Większość pierwotnych
nowotworów, które wykazują ekspresję S100 wykazywały takŜe dodatni odczyn w ognisku przerzutowym (10).
Przeciwciało znakowało 7/60 (12%) przypadków mięśniakomięsaki prąŜkowanokomórkowe. Nowotwory wykazywały
takŜe dodatni odczyn S100 w przypadku wimentyny i desminy (11).
Piśmiennictwo
1.
Orchard GE. Comparison of immunohistochemical labelling of melanocyte differentiation antibodies melan-A,
tyrosinase and HMB 45 with NKIC3 and S100 protein in the evaluation of benign naevi and malignant
melanoma. Histochem J 2000; 32:475-81.
2.
Wick MR, Swanson PE, Rocamora A. Recognition of malignant melanoma by monoclonal antibody HMB-45.
An immunohistochemical study of 200 paraffin-embedded cutaneous tumors. J Cutan Pathol 1988; 15:201-7.
3.
Ye F, Huang S-W, Dong H-J. Histiocytosis X. S-100 protein, peanut agglutinin, and transmission electron
microscopy study. Am J Clin Pathol 1990; 94:627-31.
4.
Edel G, Ueda Y, Nakanishi J, Brinker KH, Roessner A, Blasius S, et al. Chondroblastoma in bone. A clinical,
radiological, light and immunohistochemical study. Virchows Arch A Pathol Anat 1992; 421:355-66.
5.
Gould VE, Moll R, Moll I, Lee I, Schwechheimer K, Franke WW. The intermediate filament complement of the
spectrum of nerve sheath neoplasms. Lab Invest 1986; 55:463-74.
6.
Pileri SA, Grogan TM, Harris NL, Banks P, Campo E, Chan JKC, et al. (review). Tumours of histiocytes and
accessory dendritic cells: an immunohistochemical approach to classification from the International Lymphoma
Study Group based on 61 cases. Histopathology 2002; 41:1-29.
7.
Donato R. Functional roles of S100 proteins, calcium-binding proteins of the EF-hand type (review). Biochim
Biophys Acta 1999; 1450:191-231.
8.
Ilg EC, Schäfer BW, Heizmann CW. Expression pattern of S100 calcium-binding proteins in human tumors. Int
J Cancer 1996; 68:325-32.
9.
Vanstapel M-J, Gatter KC, de Wolf-Peeters C, Mason DY, Desmet VD. New sites of human S-100
immunoreactivity detected with monoclonal antibodies. Am J Clin Pathol 1986; 85:160-8.
10.
Herrera GA, Turbat-Herrera EA, Lott RL. S-100 protein expression by primary and metastatic
adenocarcinomas. Am J Clin Pathol 1988; 89:168-76.
11. Coindre J-M, de Mascarel A, Trojani M, de Mascarel I, Pages A. Immunohistochemical study of rhabdomyosarcoma. Unexpected staining with S100 protein and cytokeratin. J Pathol 1988; 155:127-32.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
ZuŜyć przed
(123431-001)
Dako Denmark A/S
Producent
P02244PL_001_GA504/2012.12 p. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR nr 33 21 13 17