Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV Klon CIV 22 Nr
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV Klon CIV 22 Nr
Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV Klon CIV 22 Nr kat. M 0785 Wydanie z 20.01.03 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV, Klon CIV 22, jest przeznaczone do badań immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje kolagen typu IV i stanowi cenne narzędzie w identyfikacji błon podstawnych. Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne. Wstęp Kolagen IV stanowi podstawowy składnik w szczególności lamina densa błon podstawnych i ultrastrukturalnie jest bezpostaciowy. Błony podstawne są cienkimi zewnątrzkomórkowymi matrycami rozdzielającymi komórki miąższowe, śródbłonka i nabłonka od leżącej pod nimi tkanki łącznej. W błonach podstawnych kłębuszkowych i kanalikowych 40% białka to kolagen typu IV. Wykrywanie wewnątrzkomórkowego kolagenu typu IV jest z reguły trudne w związku z jego małym stężeniem. Jednak można wykryć wewnątrzkomórkowy kolagen typu IV w nowopowstałych naczyniach włosowatych w miejscach zapalnych maziówki w reumatoidalnym zapaleniu stawów (1). Pod względem struktury białko składa się z czterech domen. Jedna z nich, potrójna helikalna domena kolagenu IV jest utworzona przez połączenie dwóch łańcuchów polipeptydowych typu 1 i jednego typu 2. Domena ta posiada długość 340 nm i jest mocno usieciowana mostkami dwusiarczkowymi (1, 2). Diagnostyczne zastosowanie immunobarwienia kolagenu typu IV szczególnie skupia się na udowodnieniu obecności blaszki podstawnej w guzach inwazyjnych. W szczególności wykazanie obecności natywnej błony podstawnej wykorzystuje się do rozróżnienia łagodnych proliferacji gruczołowych takich, jak choroba mikrogruczołów i dysplazja włóknista sutka od wyraźnie odróżniających się postaci raka, jak rak z kanalików piersi (3). Odczynnik dostarczony Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant z hodowli komórkowej oczyszczony przez dializę z 50 mmol/L Tris/HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN 3. Klon: CIV 22 (2). Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie IgG: zob. informacja podana na etykiecie fiolki. Immunogen Oczyszczone fragmenty pepsynowe kolagenu typu IV z ludzkich nerek (2). Swoistość Swoistość przeciwciała stwierdzono w badaniu radioimmunologicznym (RIA) podczas którego przeciwciało rozpoznaje obecność epitopu w ludzkim kolagenie typu IV w natywnej zgodności, natomiast nie rozpoznaje zredukowanego i alkilowanego białka w stanie zdenaturalizowanym. Barwienie immunoblotów przez przeciwciało było ujemne, co dodatkowo wskazuje, że przeciwciało rozpoznaje potwierdzający epitop na kolagenie typu IV (2). Podczas immunoblottingu lub RIA nie wykryto żadnych reakcji krzyżowych przeciwciała z wyizolowanym ludzkim kolagenem typu I, II, III i V (2). Jak wykazano w badaniu RIA, przeciwciało reaguje krzyżowo z białkowym odpowiednikiem kolagenu IV u krowy (2). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować właściwe procedury postępowania. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej naszej firmy. Przygotowanie próbek Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700. Mniej optymalne wyniki uzyskuje się przy zastosowaniu 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0 (107859-002) M 0785/PL/COS/20.01.03 s. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Jednak Dako Target Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat. S 3308 i wstępne przygotowanie tkanek za pomocą proteinazy K okazały się nieskuteczne. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego. Skrawki zamrożone i przygotowanie komórek: Przeciwciało można stosować do znakowania utrwalonych w acetonie skrawków zamrożonych (5, 6). Procedura barwienia Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV, nr kat. M 0785, można rozcieńczać w zakresie 1:25-1:50 w przypadku stosowania na skrawkach parafinowych ludzkich nerek utrwalonych w formalinie, stosując podwyższoną temperaturę podczas odzyskiwania epitopu w Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki i metody przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta. Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, stanowi dobrą alternatywę dla zamrożonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazy endogennej. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji. Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer. Charakterystyka działania Tkanki normalne: Przeciwciało wykazuje charakterystyczne znakowanie błon podstawnych w różnych badanych tkankach i organach, w tym w nerkach, skórze, mięśniach prostych i gładkich, śledzionie, węzłach chłonnych, płucach, łożysku i ścięgnach. W śledzionie i węzłach chłonnych obserwuje się spodziewane fragmentaryczne znakowanie przerwanych błon podstawnych zatok podczas, gdy inne naczynia krwionośne wykazują liniowe, ciągłe znakowanie. W nerkach przeciwciało znakuje błony podstawne naczyń włosowatych, fragmenty matrycy mezangialnej i torebki Bowmana oraz błony podstawne kanalików. Jedynie błona podstawna nabłonka rogówki wykazuje ujemne znakowanie przy użyciu przeciwciała. Wszystkie inne struktury, oprócz błony podstawnej podczas znakowania przeciwciałem są niezmiennie ujemne (2). Tkanki patologiczne: We wrodzonym pęcherzowym oddzielaniu się naskórka (EB) przeciwciało umożliwiło szybkie rozróżnienie pomiędzy głównymi wariantami choroby, EB simplex i EB dystrophica (4). Wokół rozszerzonych naczyń, tzw. port wine stains, przeciwciało znakowało dużo szersze pasma, niż wokół naczyń w normalnej skórze (5) a w angioimmunoblastycznym uogólnionym powiększeniu węzłów chłonnych, przeciwciało wiarygodnie ujawniło proliferację naczyniową i małe ilości wewnątrzkomórkowych włókienek kolagenowych (6). Piśmiennictwo 1. Matsubara T, Trüeb B, Fehr K, Rüttner JR. The localization and secretion of type IV collagen in synovial capillaries by immunohistochemistry using a monoclonal antibody against human type IV collagen. Expl Cell Biol 1984;52:159-69. 2. Odermatt BF, Lang AB, Rüttner JR, Winterhalter KH, Trüeb B. Monoclonal antibodies to human type IV collagen. Useful reagents to demonstrate the heterotrimeric nature of the molecule. Proc Natl Acad Sci 1984;81:7343-47. 3. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. 1st ed. London: Oxford University Press; 1999. p. 125-6. 4. Bolte C, Gonzalez S. Rapid diagnosis of major variants of congenital epidermolysis bullosa using a monoclonal antibody against collagen type IV. Am J Derm 1995;17:580-3. 5. Mitsuhashi Y, Odermatt BF, Schneider BV, Schnyder UW. Immunohistological evaluation of endothelial markers and basement membrane components in port-wine stains. Dermatologica 1988;176:243-50. 6. Knecht H, Odermatt BF, Maurer R, Rüttner JR. Diagnostic and prognostic value of monoclonal antibodies in immunophenotyping of angioimmunoblastic lymphadenopathy/lymphogranulomatosis X. Br J Haematol 1987;67:19-24. Objaśnienia symboli (107859-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Sprawdzić w instrukcji stosowania Zużyć przed Producent M 0785/PL/COS/20.01.03 s. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17