Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Glial Fibrillary Acidic Protein
Clone 6F2
Nr kat. M 0761
Wydanie z dn. 13.08.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Glial Fibrillary Acidic Protein, Clone 6F2 jest monoklonalnym przeciwciałem
mysim przeciwko kwaśnemu włóknistemu białku glejowemu, przeznaczonym do zastosowania w
immunocytochemii. Przeciwciało znakuje kwaśne włókniste białko glejowe (GFAP) i może być użyteczne do
identyfikacji astrocytów i komórek astrocytarnych w warunkach normalnych i patologicznych (1). W diagnostyce
różnicowej należy uwzględnić wyniki testów z panelem przeciwciał. Wyniki powinny być interpretowane przez
wykwalifikowanego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i wyników innych badań diagnostycznych.
Wprowadzenie
GFAP jest wewnątrzcytoplazmatycznym białkiem włóknistym o masie 50 kDa, które stanowi część
cytoszkieletu astrocytów i które stało się najbardziej swoistym markerem komórek wywodzących się z
astrocytów. W zakresie centralnej, pałeczkowatej domeny struktura GFAP wykazuje znacznego stopnia
homologię z innymi filamentami pośredniej długości (2). Uważa się, że czynność GFAP jest istotna dla
ruchliwości i utrzymania kształtu astrocytów poprzez stabilizowanie struktury wypustek astrocytów (3).
Po uszkodzeniu CNS w wyniku urazu, zaburzeń genetycznych lub działania związków chemicznych astrocyty
proliferują, wykazując znacznego stopnia powiększenie ciała komórkowego i wypustek, a synteza GFAP
znacząco wzrasta. W procesie rozrostowym obejmującym astrocyty – przeciwnie, dochodzi do coraz większego
zahamowania produkcji GFAP. Tak więc złośliwe gwiaździaki zawierają mniej komórek barwiących się na
GFAP dodatnio i silnie w porównaniu do mniej złośliwych gwiaździaków i preparatów prawidłowej tkanki
mózgowej (3).
Jeżeli chodzi o obecność GFAP poza CNS, to czułymi metodami można je wykryć w komórkach Schwanna,
komórkach gleju jelitowego, nowotworach ślinianek i rakach nerek dających przerzuty. Oprócz powyższych,
wykazano także obecność GFAP w chrząstce nagłośniowej, komórkach przysadki, niedojrzałych
oligodendrocytach, oponiakach brodawkowatych (3) i komórkach mioepitelialnych sutka (4).
Odczynnik dostarczany
Monoklonalne przeciwciało mysie w formie płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej, przedializowane wobec
0,05 mol/L soli fizjologicznej buforowanej TRIS-em (Tris/HCl) o pH 7,2. Zawiera 15 mmol/L NaN3
Klon: 6F2. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysich przeciwciał IgG: Zob. etykieta na fiolce.
Immunogen
Białko GFAP wyizolowane z ludzkiego mózgu.
Swoistość
Przeciwciało znakuje GFAP w astrocytach i komórek z nich się wywodzących, co dowiedziono metodami
immunocytochemicznymi (1, 5, 6).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodu może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2 – 8 °C. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli
produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu.
Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę dodatnią i ujemną. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez
zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako
Przygotowanie próbki
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być stosowane do znakowania skrawków parafinowych preparatów
tkankowych utrwalonych w formalinie. Wymagane jest wstępne odsłonięcie epitopów poprzez ogrzewanie.
Optymalne wyniki uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution nr kat. S 1700, Dako Target Retrieval
Solution, pH 9,0, nr kat. S 2368, Dako Target Retrieval Solution High pH nr kat. S 3308, 10 mmol/L lub bufor
cytrynianowy o pH 6,0. Stwierdzono, że wstępne nadtrawianie tkanek proteinazą K (Dako Proteinase K, nr kat.
S 3020) powoduje zniszczenie epitopu. Skrawki tkankowe nie powinny wysychać podczas trawienia ani
podczas barwienia.
Skrawki mrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków mrożonych
utrwalonych w acetonie.
Procedura barwienia
(113787-002)
Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Human Glial Fibrillary Acidic Protein, nr kat. M 0761, stosuje się w
rozcieńczeniach w zakresie 1:50-1:100 przy zastosowaniu skrawków parafinowych ludzkiego mózgu
utrwalanych formaliną, przeprowadzając termiczne odsłanianie epitopów w roztworze Dako Target Retrieval
Solution, nr kat. S 1700, przez 20 minut oraz inkubując preparat przez 30 minut w temperaturze pokojowej z
przeciwciałem pierwotnym. Ponieważ optymalne warunki procedury zależą od zastosowanych próbek oraz
metod ich przygotowania, powinny one być wyznaczone indywidualnie przez każde laboratorium. Jako kontrolę
ujemną zaleca się preparat Dako Mouse IgG2a, nr kat. X 0943, rozcieńczony do tego samego stężenia mysich
M 0761/PL/CE/13.08.03 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
przeciwciał IgG, co przeciwciało pierwotne. Jeśli nie stwierdzono, że rozcieńczone przeciwciała oraz kontrola
ujemna w trakcie wykorzystywanej procedury barwienia zachowują trwałość, zaleca się, by odczynniki te
rozcieńczać natychmiast przed użyciem lub rozcieńczać w Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Jednocześnie z próbkami pacjenta należy inkubować kontrole dodatnie i ujemne.
Uwidocznienie: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, n-ry kat. K 4004 i K 4006. Do oznaczania skrawków mrożonych i preparatów komórkowych,
gdy występuje problem z wybarwianiem przez endogenną peroksydazę, wskazanym zamiennikiem jest zestaw
Dako APAAP, nr kat. K 0670. Procedura wykonania jest opisana w każdym z zestawów.
Charakterystyka wyników
Komórki wybarwione przez przeciwciała wykazują wzór barwienia ograniczony do cytoplazmy.
Normalne tkanki: Przeciwciało znakuje astrocyty i komórki z nich się wywodzące w mózgu.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało silnie znakuje komórki pochodzenia astrocytarnego w gęstych blaszkach
rdzeniowych w chorobie Alzheimera, Creutzfelda-Jakoba, zapaleniu mózgu w przebiegu HIV, zawale mózgu,
gwiaździaku pilocytarnym i glejaku. Znakowanie słabe do średniego obserwowano w rozsianej postaci choroby
ciałek Lewy’ego i przewlekłej gliozie, jak też w grupie kontrolnej. Nie obserwowano znakowania komórek w
rozsianych blaszkach w chorobie Alzheimera (1). Przeciwciało znakowało komórki w 18/24 (75%) przypadków
glejaków (5). W innym badaniu przeciwciało znakowało młode postacie gwiaździaków pilocytarnych i
anaplastycznych, podczas gdy kilka glejaków wykazywało strefy odróżnicowania, słabo znakujące się
przeciwciałem (6).
Piśmiennictwo
1.
Leroy K, Duyckaerts C, Bovekamp L, Müller O, Anderton BH, Brion JP. Increase of adenomatosus
polyposis coli immunoreactivity is a marker of reactive astrocytes in Alzheimer’s disease and in other
pathological conditions. Acta Neuropathol 2001;102:1-10.
2.
Rutka JT, Murakami M, Dirks PB, Hubbard SL, Becker LE, Fukuyama K, et al. Role of glial filaments in
cells and tumors of glial origin: a review. J Neurosurg 1997;87:420-30.
3.
Eng LF, Ghirnikar RS, Lee YL. Glial fibrillary acidic protein:GFAP-thirty-one years (1969-2000). Neurochem
Res 2000;25:1439-51.
4.
Viale G, Gambacorta M, Coggi G, Dell'Orto P, Milani M, Doglioni C. Glial fibrillary acidic protein
immunoreactivity in normal and diseased human breast. Virchows Arch A Pathol Anat 1991;418:339-48.
5.
Sembritzki O, Hagel C, Lamszus K, Deppert W, Bohn W. Cytoplasmic localization of wild-type p53 in
glioblastomas correlates with expression of vimentin and glial fibrillary acidic protein. Neuro-Oncol
2002;4:171-78.
6.
Ylagan LR, Quinn B. CD44 expression in astrocytic tumors. Mod Pathol 1997;10:1239-46.
Objaśnienie symboli
(113787-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 0761/PL/CE/13.08.03 p. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17