Ćwiczenie 9

EKSTRAKCJA DNA Z WĄTROBY METODĄ KAY’A
Porcję ok. 3 g świeżej, wychłodzonej wątroby pokroić na szalce Petriego, przenieść do zlewki o
objętości 50 ml i następnie:
1) zhomogenizować w 30 ml SSC przez 2 min. przy niskich obrotach,
2) homogenat przelać do probówki o objętości 30 ml i odwirować 5 min. przy 3500 rpm/min
3) supernatant odrzucić, osad zawiesić w 30 ml SSC, przenieść go do zlewki o obj. 50 ml
i łagodnie zhomogenizować przez 1 min.,
4) homogenat przenieść do probówki i odwirować 10 min. przy 3500 rpm/min.
5) supernatant odrzucić, uzyskany osad zawiesić w 30 ml SSC, przenieść do zlewki o obj.
50 ml i łagodnie zhomogenizować przez 30 sek.
6) do homogenatu dodać 3 ml roztworu SDS i mieszać bagietką przez 8-10 min.
w temperaturze pokojowej,
7) dodać ok. 2 g NaCl, mieszać przez 10 min. (końcowe stężenie roztworu NaCl powinno
wynosić 1 M),
8) roztwór przelać do probówki odwirować 15 minut przy 5000 rpm/min.
9) supernatant zlać do probówki 0 obj. 50 ml, a osad białkowy odrzucić,
10) do supernatantu dodać powoli schłodzonego 96% C2H5OH, powstałe nitki DNA nawinąć
na bagietkę,
Zagadnienia do przygotowania:
1. Zasady purynowe – rodzaje, numeracja atomów pierścienia purynowego.
2. Zasady pirymidynowe – rodzaje, numeracja atomów pierścienia pirymidynowego.
3. Nukleozydy – budowa, podział, nazewnictwo.
4. Nukleotydy – budowa, podział, nazewnictwo.
5. Budowa i rodzaje DNA
6. Rola DNA
7. Metody ekstrakcji DNA
Obowiązująca literatura:
1. Kwasy nukleinowe [w] Ćwiczenia z biochemii pod red. Kłyszejko-Stefanowicz L., str. 360470
2. Struktura i funkcja kwasów nukleinowych [w] Biochemia Harpera, str. 443-455
3. Nukleotydy [w] Bańkowski E. Biochemia, Podręcznik dla studentów uczelni medycznych,
str. 386-394
4. Kwasy nukleinowe, [w] Bańkowski E. Biochemia, Podręcznik dla studentów uczelni
medycznych, str. 422-442
5. Chemiczne właściwości DNA i RNA [w] Kędryna T., Gałka-Walczak M., Ostrowska B.
Wybrane zagadnienia z biochemii ogólnej z ćwiczeniami, str. 321-346.