Dako Omnis

FLEX
Monoclonal Rabbit
Anti-Human AMACR
Klon 13H4
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Nr kat. GA060
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, klon 13H4, Ready-to-Use (Dako Omnis), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii z urządzeniami Dako Omnis. Przeciwciała te są przydatne w
identyfikacji gruczolakoraków gruczołu krokowego (1-9). Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego
braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i
innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Racemaza alfa-metyloacylo-koenzymu A, P504S (1, 2).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Królicze przeciwciała monoklonalne przeciwko enzymowi AMACR (racemazie alfa-metyloacylo-koenzymu A)
rozpoznają białko złoŜone z 382 aminokwasów, zidentyfikowane z zastosowaniem subtrakcji bibliotek cDNA, w
połączeniu z masowym badaniem przesiewowym w kierunku gruczolakoraka gruczołu krokowego, prowadzonym
przy uŜyciu mikromacierzy (1). Białko AMACR, znane równieŜ jako P504S, jest enzymem uczestniczącym w
biosyntezie kwasów Ŝółciowych i β-oksydacji kwasów tłuszczowych o łańcuchach rozgałęzionych (10). Ekspresja
białka AMACR zachodzi w komórkach przedzłośliwych gruczołu krokowego o cechach nowotworzenia
śródnabłonkowego duŜego stopnia (HGPIN) i komórkach gruczolakoraka gruczołu krokowego, ale białko to
obecne jest takŜe w małych lub niewykrywalnych ilościach w komórkach nabłonka gruczołowego prawidłowego
gruczołu krokowego i łagodnych rozrostach tego gruczołu (1-9). Białko AMACR ulega ekspresji w normalnych
komórkach nabłonka spoza gruczołu krokowego oraz w rakach niewywodzących się z tego gruczołu (2, 11-23).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje
do systemu detekcji IHC.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciało monoklonalne dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l.
Klon: 13H4 (1-3).
Immunogen
Rekombinowane białko AMACR o pełnej długości (1).
Swoistość
Swoistość
monoklonalnych
przeciwciał
króliczych
przeciwko
AMACR
badano
metodami
immunocytochemicznymi i przy uŜyciu analizy Western blot. Przeciwciała przeciwko AMACR wiązały swoiście
utrwalane w formalinie komórki HEK293 z nadekspresją AMACR, ale nie reagowały z komórkami
transfekowanymi pustym plazmidem. W testach Western blot lizatów z preparatów pierwotnego raka gruczołu
krokowego, przeciwciało znakuje białko o masie 54 kD, która odpowiada przewidywanej masie cząsteczkowej
AMACR (3).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera azydek sodu (NaN3), związek silnie toksyczny w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
(123693-001)
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Podczas przechowywania korek powinien być zamknięty. Nie naleŜy
uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Stabilność w urządzeniu wynosi
80 godzin. Pozostały okres stabilności w urządzeniu jest kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne. W wypadku
nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy
podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
P02076PL_001_GA060/2013.01 s. 1/5
Skrócona instrukcja
uŜytkownika
Krok
Comments (Komentarze)
Utrwalanie/zatapianie
Utrwalone w formalinie, zatopione w
parafinie
Odparafinowanie w urządzeniu
Obróbka wstępna
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat.GV804)
HIER 30 min
Przeciwciało
Produkt gotowy do uŜycia
Inkubacja 17,5 min
Kontrola negatywna
FLEX Negative Control, Rabbit (nr kat.
GA600)
Inkubacja 17,5 min
Wizualizacja
EnVision™ FLEX (nr kat. GV800) +
EnVision™ FLEX+ Rabbit LINKER (nr kat.
GV809)
Blokowanie: 3 min; Wiązanie:
10 min; Polimeryzacja: 20 min;
Chromogen: 5 min
Barwnik kontrastowy
Hematoxylin (nr kat. GC808)
Inkubacja 3 min
Tkanka kontrolna
Gruczolakorak gruczołu krokowego
Odczyn cytoplazmatyczny
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zalecane w celu uzyskania lepszego
przylegania skrawków tkankowych
do szkiełek.
Zamykanie
Wymagane niewodne, trwałe zatapianie
preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia
skrawki muszą być odwodnione,
oczyszczone i zatopione w środku
do trwałego zatapiania.
Oprzyrządowanie
Dako Omnis
Odczynniki znajdują się we fiolkach
dostosowanych do urządzenia
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje
przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowlanie
próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości 4 µm.
Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu epitopu (HIER). Zaleca się przeprowadzenie na tkankach HIER z
zastosowaniem odczynnika EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis), nr kat.
GV804. Procesy odparafinowania, nawodnienia i odmaskowania antygenu przeprowadza się w urządzeniu Dako
Omnis. Informacje na ten temat moŜna znaleźć w podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis.
Podczas obróbki wstępnej lub procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek
FLEX IHC Microscope Slides, nr kat. K8020.
Procedura barwienia
Program: w urządzeniu Dako Omnis wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe
informacje dotyczące umieszczania szkiełek mikroskopowych i odczynników w urządzeniu przedstawiono w
podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis. Jeśli w uŜytkowanym urządzeniu Dako Omnis protokoły
nie są dostępne, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji przeprowadza się w temperaturze 32°C w urz ądzeniu Dako Omnis.
Wizualizacja: zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis), nr kat. GV800
łącznie z odczynnikiem EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis), nr kat. GV809. Wizualizacja odbywa
się w urządzeniu Dako Omnis.
Barwienie kontrastowe: zaleca się stosowanie barwnika Hematoxylin (Dako Omnis),nr kat. GC808. Barwienie
kontrastowe odbywa się w urządzeniu Dako Omnis.
Zatapianie: po wykonaniu odczynu w urządzeniu Dako Omnis skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i
zatopione w środku do trwałego zatapiania.
Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać
pozytywne i negatywne próby kontrolne z zastosowaniem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna
powinna obejmować raka gruczołu krokowego, a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany
dla tej tkanki w części „Charakterystyka pracy”. Zalecana kontrola negatywna to FLEX Universal Negative
Control, Rabbit (Dako Omnis), nr kat. GA600.
Interpretacja
wybarwienia
Przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne:
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków) (2-5,11-14)
Nadnercza (12)2
Pęcherz moczowy (7)2
Mózg (5)2
Gruczoły sutkowe (12)2
OkręŜnica (24)11,12
OkręŜnica, polip hiperplastyczny (28)12
(123693-001)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
0/12
0/7
0/5
0/12
20/24 Nabłonek powierzchni jelita grubego, zogniskowany i
w obrębie kanalików
1/28
P02076PL_001_GA060/2013.01 s. 2/5
Endometrium (17)2,11
Pęcherzyk Ŝółciowy (10)2
Serce (5)2
Nerki (12)2
Wątroba (31)2,13
Płuca (18)2,11
Węzły chłonne (7)2
Jajniki (14)2,11
Trzustka (15)2
Gruczoł krokowy, prawidłowy (34)2,11
Gruczoł krokowy, łagodne (156)3,4,5
Ślinianki (7)2
Skóra (10)2,11
Jelito cienkie (18)2
Śledziona (12)2
śołądek (13)2
śołądek, nabłonek nienowotworowy (44)14
Jądra (5)2
Tarczyca (5)2
0/17
10/10 Komórki nabłonka
0/5
12/12 Komórki nabłonka kanalików
18/31 Hepatocyty
12/18 Komórki nabłonka oskrzeli
0/7
0/14
0/15
0/34
11/156
0/7
0/10
0/18
0/12
0/13
2/44
0/5
0/5
Tkanki nieprawidłowe: przeciwciała przeciwko AMACR wykazują immunoreaktywność z większością
przebadanych komórek raków gruczołu krokowego (2-8,11).
Komórki nabłonka hiperplastycznego gruczołu krokowego powinny wykazywać wynik ujemny lub bardzo słaby
zogniskowany odczyn cytoplazmatyczny. Większość komórek nowotworowych w przypadku gruczolakoraka
gruczołu krokowego powinna wykazywać odczyn cytoplazmatyczny o nasileniu od umiarkowanego do silnego.
Rodzaj tkanki (liczba testowanych przypadków)2,11-23
Nowotwór kory nadnerczy (20)2
Rak podstawnokomórkowy skóry (20)2
Rak przewodów Ŝółciowych (14)2
Gruczolakorak sutka (315)2,11,15
Rakowiaki płuc i przewodu pokarmowego (10)2
Raki okręŜnicy (233)11,12,16,17
OkręŜnica (35)11,16
Dobrze zróŜnicowane (58)12
Umiarkowanie zróŜnicowane (88)12
Słabo zróŜnicowane (30)12
Przerzutowy (22)17
Rak endometrioidalny (10)2
Guzy zarodkowe (14)2
Rak wątrobowokomórkowy (72)2,13
Rak płuc (300)2,11,18
Rak (28)11
Gruczolakorak (151)2,18
Rak z komórek płaskonabłonkowych (121)18
Czerniak (41)2,11
Rak neuroendokrynny przewodu pokarmowego, płuc i wątroby
(167)2,18
Gruczolakorak jajnika (76)2,11,17
Gruczolakorak trzustki (13)2
Międzybłoniak opłucnej (16)2
Gruczolakorak gruczołu krokowego (640)2-8,11
Guzy nerek (105)19,20
Rak jasnokomórkowy (77)19,20
Rak barwnikooporny (24)19,20
Onkocytoma (29)19,20
Rak z komórek przewodu Belliniego/nabłonka dróg
moczowych (5)19
Rak z komórek śluzowych i wrzecionowatych (5)19
Rak z komórek brodawkowatych (96)19,20
Rak mięsakowaty (15)20
Nowotwory ślinianek (28)2
Rak drobnokomórkowy płuc i skóry (15)2
Mięsak nabłonkowaty tkanki miękkiej (12)2
Mięsak maziówkowy tkanki miękkiej (6)2
Rak płaskonabłonkowy skóry i błon śluzowych (25)2
Gruczolakorak Ŝołądka (413)2,14,21,22
Rak niezróŜnicowany (27)2
Grasiczak (8)2
(123693-001)
Liczba preparatów z nowotworów
dających odczyn dodatni
1/20
0/20
2/14
54/315
0/10
16/35
45/58
66/88
11/30
7/22
0/10
0/14
59/72
4/28
75/151
27/121
2/41
95/167
2/76
1/13
0/16
587/640
17/77
1/24
4/29
0/5
5/5
96/96
0/15
1/28
0/15
1/12
0/6
0/25
262/413
0/27
0/8
P02076PL_001_GA060/2013.01 s. 3/5
Guzy tarczycy (54)2
Rak z komórek nabłonka dróg moczowych (50)2,20,23
Rak z komórek nabłonka dróg moczowych (17)20
Rak z komórek nabłonka przejściowego, pęcherza (29)2
Gruczolakorak jasnokomórkowy (4)23
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
(123693-001)
0/54
2/17
9/29
4/4
Xu J, Stolk JA, Zhang X, Silva SJ, Houghton RL, Matsumura M, Vedvick TS, Leslie KB, Badaro R, Reed SG.
Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and microarray.
Canc Res. 2000; 60:1677
Jiang Z, Fanger GR, Woda BA, Banner BF, Algate P, Dresser K, Xu J, Chu PG. Expression of α-methylacylCoA racemase (P504S) in various malignant neoplasms and normal tissues: A study of 761 cases. Human
Pathology. 2003; 34(8):792
Jiang Z, Woda BA, Rock KL, Xu Y, Savas L, Khan A, Pihan G, Cai F, Babcook JS, Rathanaswami P, Reed
SG, Xu J, Fanger GR. P504S: a new molecular marker for the detection of prostate carcinoma. Am J Surg
Pathol. 2001; 25(11):1397
Jiang Z, Wu C, Woda BA, Dresser K, Xu J, Fanger GR, Yang XJ. P504S/α-methylacyl-CoA racemase: a
useful marker for diagnosis of small foci of prostatic carcinoma on needle biopsy. Am J Surg Path. 2002;
26(9):1169
Yang XJ, Wu C, Woda BA, Dresser K, Tretiakova M, Fanger GR, Jiang Z. Expression of α-methylacyl-CoA
racemase (P504S) in atypical adenomatous hyperplasia of the prostate. Am J Surg Path. 2002; 26(7):921
Zhou M, Jiang Z, Epstein JI. Expression and diagnostic utility of alpha-methylacyl-CoA-racemase (P504S) in
foamy gland and pseudohyperplastic prostate cancer. Am J Surg Path. 2003; 27(6):772
Beach R, Gown AM, de Peralta-Venturina MN, Folpe AL, Yaziji H, Salles PG, Grignon DJ, Fanger GR, Amin
MG. P504S immunohistochemical detection in 405 prostatic specimens including 376 18-gauge needle
biopsies. Am J Surg Pathol. 2002; 26(12):158
Wu C-L, Yang XJ, Tretiakova M, Patton KT, Halpern EF, Woda BA, Young RH, Jiang Z. Analysis of αmethylacyl-coA racemase (P504S) expression in high-grade prostatic intraepithelial neoplasia. Hum Pathol
2004;35(8):1008-13
Jiang Z, Woda B, Wu C-L, Yang X. Discovery and clinical application of a novel prostate cancer marker. Am
J Clin Pathol 2004;122:275-89
Ferdinandusse S, Denis S, Ijst L, Dacremont G, Waterham HR, Wanders JA. Subcellular localization and
physiological role of α-methylacyl-CoA racemase. Journal of Lipid Research. 2000; 41:1890
Nassar A, Amin MB, Sexton DG, Cohen C. Utility of α-methylacyl coenzyme A racemase (P504S) antibody)
as a diagnostic immunohistochemical marker for cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol
2005;13(3):252-5
Jiang Z, Fanger GR, Banner BF, Woda BA, Algate P, Dresser K, Xu J, Reed SG, Rock KL, Chu PG. A
dietary enzyme: alpha-methylacyl-CoA racemase/P504S is overexpressed in colon carcinoma. Cancer
Detect Prev. 2003;27(6):422
Li W, Cagle PT, Botero RC, Liang JJ, Zhang Z, Tan D. Significance of overexpression of alpha methylacylcoenzyme A racemase in hepatocellular carcinoma. J Exp Clin Cancer Res 2008;27:21
Lee WA. α-methylacyl-CoA-racemase expression in adenocarcinoma, dysplasia and non-neoplastic
epithelium of the stomach. Oncology 2006;71:246-50
Witkiewicz AK, Varambally S, Shen R, Mehra R, Sabel MS, Ghosh D, Chinnaiyan AM, Rubin MA, Kleer CG.
α-methylacyl CoA racemase protein expression is associated with the degree of differentiation in breast
cancer using quantitative image analysis. Canc Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14(6):1418-23
Osunkoya AO, Netto GJ, Epstein JI. Colorectal adenocarcinoma involving the prostate: report of 9 cases.
Human Pathol 2007;38:1836-41
Logani S, Oliva E, Arnell PM, Amin MB, Young RH. Use of novel immunohistochemical markers expressed in
colonic adenocarcinoma to distinguish primary ovarian tumors from metastatic colorectal carcinoma. Mod
Pathol 2005;18:19-25
Shilo K, Dracheva T, Mani H, Fukuoka J, Sesterhenn IA, Chu W-S, Shih JH, Travis WD, Franks TJ. αmethylacyl CoA racemase in pulmonary adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, and neuroendocrine
tumors. Arch Pathol Lab Med 2007;131:1555-60
Molinié V, Balaton A, Rotman S, Mansouri D, de Pinieux I, Homsi T, Guillou L. Alpha-methyl CoA racemase
expression in renal cell carcinomas. Human Pathol 2006;37:698-703
Tretiakova MS, Sahoo S, Takahashi M, Turkyilmaz M, Vogelzang NJ, Lin F, Krausz T, Teh BT, Yang XJ.
Expression of alpha-methylacyl-coA racemase in papillary renal cell carcinoma. Am J Surg Pathol
2004;28(1):69-76
Truong CD, Li W, Feng W, Cagle P, Khoury T, Sadir A, Xie K, Yao J, Tan D. Alpha-methylacyl-CoA
racemase expression is upregulated in gastric adenocarcinoma: a study of 249 cases. Int J Clin Exp Path
2008;1:518-23
Cho EY, Kim K-M, Park CK, Kim JJ, Sohn TS, Kim DW. AMACR is highly expressed in gastric adenomas
and intestinal-type carcinomas. APMIS 2007;115:713-8
Sun K, Huan Y, Unger PD. Clear cell adenocarcinoma of urinary bladder and urethra: another urinary tract
lesion immunoreactive for P504S. Arch Pathol Lab Med 2008;132:1417-22
P02076PL_001_GA060/2013.01 s. 4/5
Wydanie 10/12
(123693-001)
P02076PL_001_GA060/2013.01 s. 5/5