Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse
Anti-Human uPAR
Klon R4
Nr kat. M7294
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeznaczenie
Przeciwciała Monoclonal Mouse-Anti Human uPAR, klon R4, są przeznaczone do stosowania
w immunohistochemii. Przeciwciała znakują białko uPAR (receptor urokinazowego aktywatora plazminogenu)
i są użytecznym narzędziem oceny guzów inwazyjnych, w których ekspresja białka występuje w części
komórek przewodowych w nowotworach gruczołów w przebiegu raka okrężnicy (1) oraz w podpopulacji
makrofagów podścieliska naciekających guzy w przebiegu raka gruczołowego okrężnicy i sutka (1, 2). Wyniki
panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona
przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod
diagnostycznych.
Synonimy antygenu
CD87 (3).
Streszczenie
i informacje ogólne
Białko uPAR, oznaczone także symbolem CD87 (3), to receptor powierzchniowy urokinazowego aktywatora
plazminogenu (uPA). uPAR jest silnie glikozylowanym białkiem składającym się z 283 reszt aminokwasowych
połączonym końcem C z błoną komórkową kotwicą glikozylofosfatydyloinozytolową (GPI) (4). Białka uPAR
i uPA należą do systemu uPA, który obejmuje również 2 inhibitory endogenne: inhibitor aktywatora
plazminogenu nr 1 (PAI-1) oraz inhibitor aktywatora plazminogenu nr 2 (PAI-2). uPA aktywuje plazminogen do
plazminy, która z kolei katalizuje rozkład składników błon podstawnych i substancji międzykomórkowej (ECM).
Wiązanie uPA do uPAR nasila aktywność uPA i powoduje powstanie wysoce efektywnego
i wyspecjalizowanego systemu proteolitycznego na błonie komórkowej.
Ekspresję uPAR wykazuje podpopulacja makrofagów i wewnątrznaczyniowych neutrofili, zaś ekspresja ta
nasila się po aktywacji leukocytów (3). W przebiegu raków gruczołowych okrężnicy, ekspresję uPAR wykazują
przede wszystkim makrofagi na styku guz-podścielisko oraz niektóre pączkujące komórki rakowe w gruczołach
objętych nowotworem, zlokalizowane na czole nacieku (1). W rakach sutka ekspresję uPAR wykazują przede
wszystkim makrofagi naciekające guz w bezpośrednim sąsiedztwie komórek rakowych ognisk nowotworu (2).
Wysnuto wniosek, że system uPA uczestniczy w procesie inwazyjnym i przerzutowym raka (4, 5). W wielu
ludzkich guzach złośliwych obserwuje się podwyższone poziomy uPA i uPAR, zaś wysokie poziomy tych
białek mają związek z inwazyjnością nowotworu. Jednak poziomy białek uPA i uPAR w nowotworach tego
samego typu różnią się znacznie u poszczególnych pacjentów (4, 5).
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub
następujące
części
instrukcji
do
systemu
detekcji
IHC:
1)
Zasady
procedury,
2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu,
5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9)
Ograniczenia metody.
Monoklonalne przeciwciała mysie dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej
(zawierający płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris/HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i
azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L.
Dostarczany
odczynnik
Klon: R4. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysich IgG mg/L: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Oczyszczone ludzkie białko uPAR uzyskane z linii komórkowej U937 stymulowanej PMA (6, 7).
Swoistość
W testach Western blot lizatu komórek U937 stymulowanych PMA przeciwciała znakują prążek 50–65 kDa
odpowiadający masie białka uPAR oraz rozpoznają epitop nieuczestniczący w wiązaniu ligandów (7).
Analiza SDS-PAGE immunoprecypitatów wytwarzanych w reakcji między uPAR znakowanym 125I
i fragmentami (po trawieniu chymotrypsyną) uPAR znakowanymi 125I a przeciwciałem wykazuje, że
przeciwciało strąca białko o masie ~60 kDa będące odpowiednikiem uPAR (7).
W badaniach immunohistochemicznych na skrawkach tkankowych utrwalanych w formalinie i zatapianych
w parafinie przeciwciało nie wykazywało reaktywności krzyżowej z białkiem będącym odpowiednikiem uPAR u
krów, psów, koni, myszy, szczurów i świń.
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie
wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do
przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(114126-003)
Dako Denmark A/S
M7294/PL/JOG/16.05.06 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu.
Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania,
Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego
produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać
dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się
skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu
(HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek polegającej na odmaskowaniu HIER
przy użyciu roztworu Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700 lub S1699. Przed zanurzeniem preparatów
należy ogrzać roztwór do odmaskowania antygenu.
HIER w łaźni wodnej: 40 minut w temp. 95–99 °C.
Po obróbce cieplnej należy pozostawić naczynie z buforem i preparatami na 20 minut, aż ostygnie do
temperatury pokojowej. Po zakończeniu procedury HIER delikatnie przepłukać skrawki roztworem buforu lub
wodą dejonizowaną. W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki
nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca
się stosowanie szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mrożakowe i rozmazy komórkowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków mrożakowych utrwalanych acetonem (2).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-human uPAR, nr kat. M7294, mogą być używane
w zakresie rozcieńczeń 1:25–1:50 na utrwalanych w formalinie, zatopionych w parafinie skrawkach
tkankowych, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej, w połączeniu z systemem wizualizacji
Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse, nr kat. K4061. Zaleca się rozcieńczenie przeciwciał
odczynnikiem Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809. Możliwe jest również stosowanie przeciwciał w zakresie
rozcieńczeń 1:900–1:1800 przy 15-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej, jeśli używany jest system
wizualizacji Dako CSA II System/HRP Mouse, nr kat. K1497. W takim wypadku zaleca się rozcieńczenie
przeciwciał w odczynniku Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components, nr kat. S3022.
Podane informacje mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne warunki mogą się zmieniać w
zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w
każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1, nr kat.
X0931, rozcieńczony do tego samego stężenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono
stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu,
zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem. Równolegle z odczynami na
materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie systemów Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse, nr
kat. K4061, lub Dako CSA II System/HRP Mouse, nr kat. K1497. Postępować zgodnie z procedurą
dostarczoną z systemem do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych
w systemach zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer.
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przeciwciałami wykazują odczyn błonowy. W niektórych komórkach obserwuje się odczyn
błonowy i cytoplazmatyczny (1, 2).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciała znakują podpopulację makrofagów, eozynofili i neutrofili w tkance sutka oraz
blaszce właściwej jelita (1, 2). Przeciwciała znakują także podpopulację makrofagów i neutrofili w tkance
migdałków, nie znakują natomiast komórek mózgu, nabłonka sutka, wątroby ani trzustki.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciała znakowały podpopulację skojarzonych z guzami makrofagów podścieliska
na inwazyjnym czole złośliwego nabłonka w przebiegu raka okrężnicy (1) i sutka (2), jak również część
komórek przewodowych w nowotworach gruczołów w przebiegu raka okrężnicy (1) i komórki rakowe w
niektórych rakach sutka (2). Przeciwciała znakowały makrofagi podścieliska w 16/21 przypadków raka
okrężnicy i 8/19 przypadków raka sutka.
(114126-003)
Dako Denmark A/S
M7294/PL/JOG/16.05.06 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1. Pyke C, Ralfkiær E, Rønne E, Høyer-Hansen G, Kirkeby L, Danø K. Immunohistochemical detection of the
receptor for urokinase plasminogen activator in human colon cancer. Histopathology 1994;24:131-8.
2. Pyke C, Græm N, Ralfkiær E, Rønne E, Høyer-Hanse-n G, Brünner N, et al. Receptor for urokinase is
present in tumor-associated macrophages in ductal breast carcinoma. Cancer Res 1993;53:1911-5.
3. Todd R, Magdolen V, Cines D, Kramer M, Mizukami I, Mazar A, et al. CD87 workshop panel report. In:
Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors.
Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and
Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc. 1997. p. 1016-20.
4. Andreasen PA, Egelund R, Petersen HH. The plasminogen activation system in tumor growth, invasion,
and metastasis. Cell Mol Life Sci 2000;57:25-40.
5. Duffy MJ. The urokinase plasminogen activator system: Role in malignancy. Cur Pharm Des 2004;10:39-49.
6. Behrendt N, Rønne E, Ploug M, Petri T, Løber D, Nielsen LS, et al. The human receptor for urokinase
plasminogen activator. J Biol Chem 1990;265:6453-60.
7. Rønne E, Behrendt N, Ellis V, Ploug M, Danø K, Høyer-Hansen G. Cell-induce potentiation of the
plasminogen activation system is abolished by a monoclonal antibody that recognizes the NH 2-terminal
domaine of the urokinase receptor. FEBS 1991;288:233-6.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
(114126-003)
Dako Denmark A/S
Producent
M7294/PL/JOG/16.05.06 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17