Nr kat. IR083

FLEX
Monoclonal Rabbit
Anti-Human
Cyclin D1
Klon EP12
Gotowy do uŜycia
(Link)
Nr kat. IR083
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Odczynnik FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, klon EP12, gotowy do uŜycia (Link), jest
przeznaczony do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer Link. Przeciwciała przeciwko
cyklinie D1 są przydatne w identyfikacji chłoniaków z komórek płaszcza (1-3). Interpretacja kliniczna wystąpienia
lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób
kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii
klinicznej pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
PRAD-1, CCND1, Bcl-1 (1).
Streszczenie i
informacje ogólne
Cyklina D1 jest białkiem o masie 36 kDa kodowanym przez gen CCND1 (bcl-1) zlokalizowany na chromosomie
11q13. Cyklina D1 wiąŜe się i aktywuje cyklinozaleŜne kinazy (CDK) CDK4 i CDK6 (1,4,5). Białko to działa jako
zaleŜny od cyklinozaleŜnych kinaz regulator cyklu komórkowego, wywołując fosforylację i inaktywację białka
retinoblastomy, co pozwala na przejście fazy G1-S cyklu komórkowego (1,4,5). Cyklina D1 odgrywa takŜe rolę w
cyklu komórkowym lub funkcjach niezaleŜnych od cyklinozaleŜnych kinaz, w tym łączenie się i regulację
rozmaitych czynników transkrypcji oraz koregulatorów transkrypcji. Wykazano ponadto, Ŝe cyklina D1 ma udział
w regulacji metabolizmu komórkowego, róŜnicowaniu komórek tłuszczowych i migracji komórek (1,4,5).
Nadekspresja cykliny D1 jest związana z rozwojem nowotworu, stwierdzono zwiększenie poziomu i/lub
nadekspresję cykliny D1 w róŜnych rodzajach nowotworów ludzkich, w tym w chłoniakach z komórek płaszcza,
rakach piersi, rakach płaskonabłonkowych głowy i szyi oraz rakach przełyku (1,6). Wśród nowotworów
limfoidalnych ekspresję cykliny D1 obserwowano w podzbiorze przypadków przewlekłej białaczki limfocytarnej,
chłoniaka drobnokomórkowego limfocytarnego i szpiczaka mnogiego. Stwierdzono, Ŝe następujące nowotwory
są ujemne w teście na ekspresję cykliny D1: rozlany chłoniak z duŜych komórek B, chłoniak strefy brzeŜnej
pozawęzłowy typu MALT, chłoniak pęcherzykowy, chłoniak strefy brzeŜnej, chłoniak limfoplazmatyczny (z linii
komórkowych 1T i 1B), pozawęzłowy chłoniak z komórek NK/T, chłoniak obwodowy z komórek T, pozostałe
nowotwory osobno niewymienione, anaplastyczny chłoniak wielokomórkowy, chłoniak ziarniczy (7, 8).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z
zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Procedura barwienia, 6) Kontrola jakości,
7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia monoklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l.
Klon: EP12.
Immunogen
Syntetyczny peptyd odpowiadający resztom w pobliŜu końca C ludzkiej cykliny D1.
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórkowych MCF7 przeciwciało barwi główny prąŜek o masie cząsteczkowej
ok. 36 kDa odpowiadający oczekiwanej masie cząsteczkowej cykliny D1.
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
(121328-002)
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywać w temperaturze 2-8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
P01468PL_002_IR083/2011.04 str. 1/3
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) przy uŜyciu aparatu Dako
PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link.
Optymalne wyniki uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek poprzez 20-minutową inkubację w odczynniku
EnVisionFLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004/K8023) w temperaturze 97°C, a
następnie 5-minutowe zanurzenie w buforze EnVision™ FLEX Wash Buffer (nr kat. K8007).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych zalecana jest procedura przygotowania preparatu „3 w 1” w aparacie Dako PT Link. Postępować według
procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004/K8023). Uwaga: Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe osadzić poddać
odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego nakryć.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Link) (nr kat. K8000/K8023). W systemie
Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość aplikacji
odczynnika wynosi 1 x 200 µl lub 2 x 150 µl na jeden preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania
szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli
protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Program instalacyjny słuŜący do uzupełniania oprogramowania DakoLink w aparacie
Autostainer Link o dane protokołu i odczynnika Anti-Cyclin D1, klon EP12 moŜna znaleźć pod adresem
www.dako.com/Installer. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się róŜnić w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z
róŜnym nasileniem odczynu preparatów, moŜna zmodyfikować czas inkubacji i wybór systemu
EnVision FLEX Visualization System. NaleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy
Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w
części „Charakterystyka działania”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą odczynnika EnVision FLEX Hematoxylin, (Link)
(nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego środka do trwałego osadzania preparatu.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów zaleca się wykonywanie dodatnich i ujemnych
prób kontrolnych z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka działania”. Zalecany odczynnik do kontroli ujemnej to
FLEX Negative Control, Rabbit, (Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja
wybarwienia
Przeciwciała dają głównie odczyn jądrowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: (9)
Rodzaj tkanki
(liczba testowanych przypadków)
Grasica (3)
Gruczoł krokowy (3)
Gruczoły sutkowe (2)
Jajniki (3)
Jądra (3)
Jelito cienkie (3)
Jelito grube (3)
Komórki międzybłonka (3)
Macica (3)
Mięsień sercowy (3)
Mięśnie szkieletowe (3)
Migdałki (3)
Mózgowie (3)
MóŜdŜek (3)
Nadnercza (3)
(121328-002)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
3/3 Komórki limfoidalne (<1%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego i komórki zrębu (10%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego i komórki zrębu (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<10%), komórki zrębu (<5%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka przewodów (<10%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka przewodów (<1%), jądrowy
2/3 Komórki zrębu jajnika (nieliczne), jądrowy
3/3 Komórki zrębu (<1%), jądrowy
3/3 Komórki nabłonka mieszka (40–50%), jądrowy
3/3 Komórki nabłonka (20–30%), jądrowy, komórki zrębu (nieliczne), jądrowy
0/3
3/3 Komórki nabłonka endometrium i komórki zrębu (<5%), jądrowy
1/3 Komórki mięśnia sercowego (<10%), jądrowy, komórki tkanki
łącznej i zrębu (<5%), jądrowy
1/3 Tkanka łączna (<5%), jądrowy
0/3
3/3 Komórki nabłonka (30%), jądrowy, limfocyty (nieliczne), jądrowy
2/3 Nieliczne komórki dodatnie (<1%), jądrowy
2/3 Astrocyty (<1%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<1%), jądrowy
P01468PL_002_IR083/2011.04 str. 2/3
Nerki (3)
Nerwy obwodowe (3)
Płuca (3)
Przełyk (3)
Przysadka mózgowa (3)
Przytarczyce (3)
Skóra (3)
Szpik kostny (3)
Szyjka macicy (2)
Śledziona (3)
Ślinianki (3)
Tarczyca (3)
Trzustka (3)
Wątroba (3)
śołądek (3)
1/3 Komórki nabłonka (<5%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka (10-20%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonkowe mezenchymalne (<1%), jądrowy
1/3 Komórki Schwanna (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka pęcherzyków (30%)
2/3 Komórki nabłonka pęcherzyków (10–20%)
3/3 Komórki nabłonka (20–30%), jądrowy, komórki zrębu (nieliczne), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<10%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka (40%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<1%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (30%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka płaskiego (30–40%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka płaskiego (<5%), jądrowy
1/3 Komórki szpikowe (<1%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka warstwy przypodstawnej (10%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka warstwy przypodstawnej (40%), jądrowy
1/3 Limfocyty i komórki brzeŜne (10%), jądrowy
2/3 Limfocyty i komórki brzeŜne (5%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego (10%), jądrowy i cytoplazmatyczny
2/3 Komórki nabłonka pęcherzyków i komórki zrębu (<1%), jądrowy
3/3 Komórki nabłonka (25-30%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka miąŜszu (20%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka miąŜszu (<1%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka (<5%), jądrowy
Uwaga: W większości badanych tkanek prawidłowych obserwowano dodatni odczyn komórek nabłonka.
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Donnellan R, Chetty R. Cyclin D1 and human neoplasia. J Clin Pathol: Mol Pathol 1998;51:1-7.
De Boer CJ, Schuuring E, Dreef E, Peters G, Bartek J, Kluin PM, van Krieken HJM. Cyclin D1 protein
analysis in the diagnosis of mantle cell lymphoma. Blood 1995;86:2715-23.
Falini B, Martelli MP, Tiacci E, Ascani S, Thiede C, Pileri SA. Immunohistochemical surrogates for genetic
alterations of CCDN1, PML, ALK, and NPM1 genes in lymphomas and acute myeloid leukemia. Best
Practice & Research Clin Haematol 2010:23:417-31.
Lukas J, Pagano M, Staskova Z, Draetta G, Bartek J. Cyclin D1 protein oscillates and is essential for cell
cycle progression in human tumour cell lines. Oncogene 1994;9:707-18.
Fu M, Wang C, Li Z, Sakamaki T, Pestell RG. Minireview: Cyclin D1: normal and abnormal functions.
Endocrin 2004;145:5439-47.
Reis-Filho JS, Savage K, Lambros MBK, James M, Steele D, Jones RL, et al. Cyclin D1 protein
overexpression and CCND1, PML, ALK, and NPM1 genes in lymphomas and AML. Clin Haematology.
2006:19:999-1009.
Cheuk W, Wong K, Wong C, Chan J. Consistent immunostaining for Cyclin D1 can be achieved on a
routine basis using a newly available rabbit monoclonal antibody. Am J Surg Pathol 2004;28:801-7.
Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, et al. Rabbit monoclonal antibodies: A
comparative study between a novel category of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal
antibodies. Am J Clin Pathol 2005;124:1-8.
M3642 (IHC003-D03559).
Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, klon EP12, są produkowane przez firmę Epitomics Inc. przy
uŜyciu technologii produkcji monoklonalnych przeciwciał króliczych chronionej patentami nr 5,675,063 oraz 7,402,409.
Wydanie 05/11
(121328-002)
P01468PL_002_IR083/2011.04 str. 3/3