Nr kat. IR619
Transkrypt
Nr kat. IR619
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 7 Klon OV-TL 12/30 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR619 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 7, klon OV-TL 12/30, Ready-to-Use, (Link) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało reaguje z komórkami nabłonka przejściowego i gruczołowego i jest przydatne w identyfikacji gruczolaków płuc (1), sutka i śluzówki macicy, tarczycy (2) i jajnika (3) oraz chromofobowych rakach z komórek nerek (4). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Cytokeratyna 7 naleŜy do filamentów pośrednich, tworzących cytokoszkielet w prawie wszystkich komórkach eukariotycznych. W przeciwieństwie do innych filamentów pośrednich, cytokeratyny (CK) naleŜą do rodziny wysoce złoŜonych białek wielogenowych, o masach cząsteczkowych w zakresie od 40 do 68 kDa. CK powszechnie uwaŜane są za najwaŜniejsze markery róŜnicowania nabłonka i do chwili obecnej w róŜnych typach nabłonka ludzkiego wyodrębniono 20 ich odmian (5, 6). CK moŜna podzielić na odmiany kwaśną typu A (klasa I) i obojętno-zasadową typ B (klasa II). CK7, białko o masie cząsteczkowej 54 kDa, naleŜy do podrodziny obojętno-zasadowej typu B, a jego dystrybucja jest ograniczona do nabłonka gruczołowego i nabłonka przejściowego (5). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Materiały wymagane, ale niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: OV-TL 12/30. Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen OTN 11, linia komórkowa raka jajnika (1, 8). Swoistość Analiza SDS-PAGE wykazała, Ŝe immunoprecypitaty będące wynikiem reakcji preparatów cytoszkieletu z kilku hodowli komórek i tkanek (ekstrakcja za pomocą Triton X-100) i przeciwciał znakują prąŜek 54 kDa, odpowiednio do cytokeratyny 7 (1). Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury (117130-004) Dako Denmark A/S IR619/PL/MNI/2012.06.06 s. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować trzustkę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja odczynu Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciało daje odczyn z duŜą liczbą komórek nabłonka jednowarstwowego, złoŜonego i przejściowego, w tym w nabłonkach przewodów Ŝółciowych i trzustkowych, pęcherzykach płucnych, śluzówki macicy, dystalnych kanalikach krętych i zbiorczych w nerkach (nabłonek jednowarstwowy), oskrzelach i komórkach nabłonka oskrzeli, przewodach gruczołu krokowego, komórkach przewodowych jajowodu i gruczołów śluzówki kanału szyjki, oskrzeli, sutka, gruczołu ślinowego, gruczołu potowego i wewnątrzszyjkowego, trofoblastach łoŜyska (nabłonek złoŜony) oraz wszystkich warstwach komórkowych nabłonka dróg moczowych (nabłonek przejściowy) (2). Ponadto przeciwciało znakuje jajnikowy surowiczy nabłonek śródjamowy (3). Występowanie odczynu obserwowano równieŜ w komórkach przewodowych i podstawnych gruczołu korkowego i mięśniowo-nabłonkowych (2). W trzustce komórki nabłonka duŜych przewodów komórek zrazikowych wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki nabłonka wstawionych przewodów trzustkowych wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Tkanki nieprawidłowe: W ludzkich jajnikach, 12/12 przypadków prostej torbieli, 12/12 przypadków torbielogruczolaka i 60/60 raków zostały oznakowane przeciwciałem (3). Ponadto 6/6 przypadków raków śluzówki macicy, 4/4 przypadki raków wewnątrzszyjkowych, 3/3 przypadki raków sutka i 3/3 przypadki raków tarczycy wykazało odczyn dodatni (2). W komórkach ludzkiego płuca 20/20 przypadków gruczolakoraków róŜnego stopnia, w tym 4 raki pęcherzyków oskrzelowych, wykazało odczyn dodatni z przeciwciałem, natomiast 24/24 przypadki raków płaskonabłonkowych wykazało odczyn ujemny, w tym 6/6 przypadków raków anaplastycznych z duŜych komórek (1) i 10/10 przypadków międzybłoniaków (9). W ludzkim przewodzie pokarmowym 5/6 przypadków gruczolakoraków róŜnego stopnia, 3/3 przypadki raków z komórek sygnetowatych Ŝołądka o niskim stopniu zróŜnicowania, 1/1 przypadek raka trzustki zostało oznakowanych przez przeciwciało, natomiast raki anaplastyczne Ŝołądka, raki jelita cienkiego, raki odbytu oraz gruczolakoraki okręŜnicy o róŜnym stopniu zróŜnicowania wykazały odczyn ujemny (2). 6/6 przypadków chromofobowych raków z komórek nerek wykazało odczyn dodatni w znakowaniu przeciwciałem, a 8/11 przypadków gruczolaków kwasochłonnych odczyn ujemny (4). Piśmiennictwo 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. (117130-004) Dako Denmark A/S van de Molengraft FJJM, van Niekerk CC, Jap PHK, Poels LG. OV-TL 12/30 (keratin 7 antibody) is a marker of glandular differentiation in lung cancer. Histopathology 1993;22:35-8. van Niekerk CC, Jap PHK, Ramaekers FCS, van de Molengraft F, Poels LG. Immunohistochemical demonstration of keratin 7 in routinely fixed paraffin-embedded human tissues. J Pathol 1991;165:145-52. van Niekerk CC, Boerman OC, Ramaekers FCS, Poels LG. Marker profile of different phases in the transition of normal human ovarian epithelium to ovarian carcinomas.Am J Pathol 1991;138:455-63. Leroy X, Moukassa D, Copin MC, Saint F, Mazeman E, Gosselin B. Utility of cytokeratin 7 for distinguishing chromophobe renal cell carcinoma from renal oncocytoma. Eur Urol 2000;37:484-7. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: Patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31:11-24. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann, Harris, editors. Subcellular biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205-62. Ramaekers F, van Niekerk C, Poels L, Schaafsma E, Huijsmans A, Robben H, et al. Use of monoclonal antibodies to keratin 7 in the differential diagnosis of adenocarcinomas. Am J Pathol 1990;136:641-55. Poels LG, Jap PHK, Ramaekers FCS, Scheres JMJC, Thomas CMG, Vooijs PG, et al. Characterization of a hormone-producing ovarian carcinoma cell line. Gynecol Oncol 1989;32:203-14. Baars JH, de Ruijter JLM, Smedts F, van Niekerk CC, Poels LG, Seldenrijk CA, et al. The applicability of a keratin 7 monoclonal antibody in routinely Papanicolaou-stained cytologic specimens for the differential diagnosis of carcinomas. Am J Clin Pathol 1994;101:257-61. IR619/PL/MNI/2012.06.06 s. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (117130-004) Dako Denmark A/S IR619/PL/MNI/2012.06.06 s. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17