Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse
Anti-Cytokeratin 17
Klon E3
Nr katalogowy M 7046
Wydanie 20.01.03
Zastosowanie
Do diagnostyki in vitro.
Mysie monoklonalne przeciwciało przeciw cytokeratynie 17, klon E3, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje komórki podstawne i mioepitelialne ludzkich tkanek
nabłonkowych, np. krtani, tchawicy, oskrzeli, gruczołu piersiowego, ślinianek, gruczołów potowych, gruczołu
krokowego, kanału szyjki macicy (1, 2), jak również komórek podstawnych nabłonka przejściowego (np.
pęcherza moczowego) (1). Może być ono użytecznym narzędziem do identyfikacji raków płaskonabłonkowych,
np. płuc (3) i szyjki macicy (4, 5). W diagnostyce różnicowej pomocne są badania z użyciem panelu
przeciwciał. Interpretacja wyników musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z
uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych,
Wprowadzenie
Cytokeratyna 17 należy do filamentów pośrednich, które tworzą cytoszkielet niemalże każdej komórki
eukariotycznej. W przeciwieństwie do innych filamentów pośrednich, cytokeratyny (CK) zbudowane są z bardzo
złożonej, wielogenowej rodziny polipeptydów o masie cząsteczkową od 40 do 68 kDa. CK należą do najbardziej
podstawowych markerów różnicowania nabłonków. Do tej pory wyróżniono 20 polipeptydów, które wykryto w
komórkach ludzkich nabłonków (6). Cytokartyny można podzielić na podrodziny: typ A – kwaśny (klasa I), typ B –
obojętno-zasadowy (klasa II). CK 17, białko o masie 46 kDa, należy do typu A – kwaśnego i jego dystrybucja jest
ograniczona do komórek podstawnych i mioepitelialnych i nabłonka przejściowego, jak również zewnętrznej
pochewki mieszka włosowego (1). 
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne mysie przeciwciało jest dostarczone w płynnej postaci jako nadsącz
dializowany w środowisku 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2 i zawierajacy 15 mmol/L NaN3.
hodowli komórkowej
Klon: E3 (1). Izotyp: IgG2b, kappa.
Stężenie mysich IgG: zob. etykieta na opakowaniu.
Immunogen
Frakcja cytoszkieletowa z nabłonka okrężnicy szczura (1).
Swoistość
W jedno- i dwu-kierunkowej SDS-PAGE i immunoblotingu ekstraktu cytoszkieletu z użyciem Tritonu X-100 z
kilku hodowli komórkowych i tkanek, przeciwciało znakuje prążek odpowiadający ludzkiej cytokeratynie 17 (1).
W badaniach immunocytochemicznych wykazano, że przeciwciało reaguje krzyżowo z białkiem królika (7) i
szczura (8) odpowiadającym CK 17.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3 ), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może
reagować
z elementami kanalizacji z miedzi lub ołowiu tworząc silnie wybuchowe azydki tych metali. Przy usuwaniu
odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8C. Nie używać po przekroczeniu daty ważności zaznaczonej na probówce.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż zalecone, użytkownik powinien zweryfikować
warunki przechowywania. Mimo braku wyraźnych objawów wskazujących na utratę stabilności produktu,
kontrole dodatnie i ujemne powinny być prowadzone równocześnie z próbkami pobranymi od pacjenta. Jeśli
pojawi się nieoczekiwany wynik, który nie może być wytłumaczony wariantami procedur laboratoryjnych i
podejrzewa się, że przeciwciało jest przyczyną problemu, należy skontaktować się z serwisem technicznym.
Preparatyka próbki
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być użyte do znakowania tkankowych skrawków parafinowych
utrwalonych w parafinie. Konieczne jest termicznie odkrywanie epitopów. Optymalne rezultaty uzyskuje się przy
użyciu Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr katalogowy S 3308, lub 10 mmol/L buforu Tris , 1 mmol/L
EDTA, pH 9.0. Gorsze wyniki można uzyskać stosując Dako Target Retrieval Solution, nr katalogowy S 1700,
lub 10 mmol/L bufor cytrynianowy, pH 6.0. Wstępne opracowanie z zastosowaniem proteinazy K okazało się
niewystarczające. Nie należy dopuszczać do wyschnięcia skrawków tkankowych podczas opracowania tkanki
jak również podczas procedury barwienia immunocytochemicznego.
Skrawki mrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało może być użyte do znakowania utrwalonych w acetonie,
mrożonych skrawków i rozmazów komórkowych (4).
Procedura barwienia
(111637-002)
Rozcieńczenie: Monoklonalne mysie przeciwciało przeciw cytokeratynie 17 nr kat. M 7046, może być użyte w
rozcieńczeniu 1:20 – 1:40, gdy stosowane jest do skrawków parafinowych ludzkiego gruczołu piersiowego,
utrwalonych formaliną i z użyciem 20 minutowego termicznego odtwkrywania epitopów w Dako Target Retrieval
solution, High pH, nr kat. S 3308 i 30 minutowej inkubacji z pierwotnym przeciwciałem. Optymalne warunki
mogą się zmieniać zależnie od próbki i metody przygotowania, powinny być indywidualnie dobierane przez
każde laboratorium. Zalecana negatywna kontrola to Dako Mouse IgG2b, nr kat. X 0944, rozcieńczone do tego
samego stężenia mysich IgG co pierwotne przeciwciało. Mimo, że stabilność rozcieńczonego przeciwciała i
kontroli negatywnej została ustalona w danej procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczać te reagenty
M 7046/PL/HEW/20.01.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
bezpośrednio przed użyciem lub też rozcieńczać je z pomocą Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Równocześnie z badaną próbką powinny być wykonywane kontrole dodatnia i ujemna .
Uwidacznianie produktu reakcji: Zalecane są: zestaw DAKO LSAB™+/HRP, nr katalogowy K 0679 oraz
zestawy DAKO EnVision™+/HRP, nr-y katalogowe K 4004 i K4006. Dla skrawków mrożonych i preparatów
komórkowych zestaw Dako APAAP, nr katalogowy K 0670 jest alternatywą dla w materiału, w którym występuje
endogenna peroksydaza. Należy postępować zgodnie z procedurą zalecaną przez producenta zestawu
wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest przystosowane do
automatycznych platform, takich jak Dako Autostainer.
barwień
immunocytochemicznych
przy
użyciu
Charakterystyka reaktywnośi Reakcja z przeciwciałami ma charakter cytoplazmatyczny
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki ponad-podstawne nabłonka przełyku (9) utrwalone formaliną,
podczas gdy w mrożonych skrawkach nabłonka przełyku, przy użyciu metod wykrywania o niższej czułości ponadpodstawne warstwy nie zostały wyznakowane (1). W skrawkach mrożonych przeciwciało znakuje warstwę
podstawną nabłonka rzekomowielowarstwowego krtani, tchawicy i oskrzeli, oraz komórki warstwy podstawnej
nabłonka przejściowego pęcherza moczowego. Dodatkowo znakuje komórki mioepitelialne niektórych tkanek, w
tym gruczoły ślinowe, potowe oraz gruczoł krokowy, jak również wewnątrz- i głównie zewnątrz-zrazikową strefę
gruczołu piersiowego (1, 2, 10). Ponad-podstawne komórki oskrzeli i oskrzelików także reagują pozytywnie z
przeciwciałem (3). Ponadto, zewnętrzna pochewka mieszka włosowego również wykazuje pozytywną reakcję z
przeciwciałem (1), jak i komórki nabłonka walcowatego kanału szyjki macicy (2). Normalny nabłonek
wielowarstwowy płaski skóry, części pochwowej szyjki macicy, krtani, jak również nabłonek jednowarstwowy nie
ulegają wyznakowaniu (1). W kilku przypadkach pojawiło się słabe barwienie komórek podstawnych nabłonka
wielowarstwowego części pochwowej szyjki macicy (2).
Tkanki zmienione patologicznie: Przeciwciało znakuje rogowaciejące komórki raka inwazyjnego przełyku w 10 na
22 przypadkach (9). W skrawkach mrożonych szyjki macicy przeciwciało wykrywa cytokeratynę 17 w całej grubości
nabłonka w 10 na 11 przypadków niedojrzałej metaplazji płaskonabłonkowej. W 42/42 przypadki dojrzałej
metaplazji płaskonablonkowej przeciwciało znakuje warstwę podstawną nabłonka, podczas gdy w przypadkach
różnych stopni raka in situ (CIN) szyjki macicy, 1/4 (stopień 1), 1/6 (stopień 2) i 8/16 (stopień 3) przypadków
wybarwiło się przeciwciałem (2). W dalszych badaniach nad rakiem szyjki przeciwciało wybarwiało 5/5 przypadków
rogowaciejących
raków
płaskonabłonkowych,
11/11
przypadków
nierogowaciejących
raków
olbrzymiokomórkowych, 5/5 przypadków gruczolakoraków kanału szyjki macicy, 4/4 przypadki raka endometrium i
3/3 przypadki raków gruczołowopłaskonabłonkowych (4). W różnych podtypach raka płuc, przeciwciało
zidentyfikowało 30/30 przypadków raka płaskonabłonkowego, 6/14 przypadków gruczolakoraków, 1/6 przypadków
raka drobnokomórkowego i 1/6 przypadków rakowiaków (3). W preparatach inwazyjnego raka gruczołu piersiowego
przeciwciało wykryło 36/115 przypadków (10)
Piśmiennictwo
1. Troyanovsky SM, Guelstein VI, Tchipysheva TA, Krutovskikh VA, Bannikov GA. Patterns of expression of
keratin 17 in human epithelia: dependency on cell position. J Cell Sci 1989;93:419-26.
2. Smedts F, Ramaekers F, Troyanovsky S, Pruszczynski M, Robbben H, Lane B, et al. Basal-cell keratins in
cervical reserve cells and a comparison to their expression in cervical intraepithelial neoplasia. Am J Pathol
1992;140:601-12.
3. Wetzels RHW, Schaafsma HE, Leigh IM, Lane EB, Troyanovsky SM, Wagenaar SS, et al. Laminin and type
VII collagen distribution in different types of human lung carcinoma: correlation with expression of keratins 14,
16, 17 and 18. Histopathology 1992;20:295-303.
4. Smedts F, Ramaekers F, Troyanovsky S, Pruszczynski M, Link M, Lane B, et al. Keratin expression in cervical
cancer. Am J Pathol 1992;141:497-511
5. Martens J, Baars J, Smedts F, Holterheus M, Kok MJ, Vooijs P, et al. Can keratin 8 and 17
immunohistochemistry be of diagnostic value in cervical cytology? A feasibility study. Cancer 1999;87:87-92.
6. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann, Harris,
editors. Subcellular Biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205-62.
7. Zedda M, Farina V. Basket and basal-duct cells in domestic animals: different cytokeratin expression and
shape. Anat Histol Embryol 1996;25:257-62.
8. Bartel-Friedrich S, Friedrich RE, Moll R, Lautenschlager C. Immunohistochemical detection of cytokeratins
in the irradiated mandibular gland of the Wistar rat. Laryngorhinootologie 1999;78:326-31.
9. Takahashi H, Shikata N, Senzaki H, Shintaku M, Tsubura A. Immunohistochemical staining patterns of
keratins in normal oesophageal epithelium and carcinoma of the oesophagus. Histopathology 1995;26:4550.
10. Wetzels RHW, Kuijpers HJH, Lane EB, Leigh IM, Troyanovsky SM, Holland R, et al. Basal cell-specific and
hyperproliferation-related keratins in human breast cancer. Am J Pathol 1991;138:751-63.
Objaśnienie symboli
(111637-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7046/PL/HEW/20.01.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17