Nr kat. IR500

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Alpha-1-Fetoprotein
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR500
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Fetoprotein, Ready-to-Use, (Link), są przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała przeciwko alfa-1-fetoproteinie mogą
być uŜyteczne w identyfikowaniu nowotworowych i nienowotworowych schorzeń wątroby, guzów pęcherzyka
Ŝółtkowego i mieszanych guzów germinalnych (1–3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi
być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być
przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Alfa-1-fetoproteina (AFP) jest glikoproteiną o masie 70 kDa, która zawiera 590 reszt aminokwasowych. Glikoproteina
jest syntetyzowana przez komórki embrionalnego pęcherzyka Ŝółtkowego, komórki wątroby płodowej i płodowego
przewodu pokarmowego (4, 5). AFP jest bardzo uŜytecznym znacznikiem umoŜliwiającym wykrywane licznych
defektów rozwojowych i patologii — zmienionych nowotworowo i nienowotworowo (6). Ekspresję AFP stwierdzono w
ponad 44% raków z komórek wątrobowych, a takŜe w komórkach gonadowych i zewnątrzgonadowych guzach
germinalnych, takŜe w guzach pęcherzyka Ŝółtkowego. Badania za pomocą odczynów immunohistochemicznych nie
wykazały obecności AFP w prawidłowych tkankach osób dorosłych (4). Ślady AFP występują w prawidłowej
surowicy osób dorosłych, a w większych stęŜeniach w surowicy matki i płodu oraz w płynie owodniowym (7).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
Alfa-1-fetoproteina wyizolowana z surowicy ludzkiej krwi pępowinowej.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z ludzką alfa-1-fetoproteiną. Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez absorpcję w
fazie stałej z innymi białkami ludzkiego osocza.
W testach wykonywanych pośrednią metodą ELISA nie obserwuje się istotnych reakcji z prawidłowym ludzkim
osoczem.
Jak wykazano w badaniach metodą immunoelektroforezy rakietkowej, przeciwciało wykazuje reaktywność krzyŜową
z białkami stanowiącymi odpowiedniki AFP pochodzącymi od kotów i gnu (8).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków
w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na
fiolce. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu.
Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w
procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek i materiały
dodatkowe
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link.
(115623-003)
Dako Denmark A/S
IR500/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target
Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być
odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
urządzeniu Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy
skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link)
(nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować komórki raków
zarodkowych, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji
taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX
Negative Control, Rabbit, (Link (nr kat. IR600).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn cytoplazmatyczny (1).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: W 20-dniowym zarodku ludzkim przeciwciało barwi komórki pochodzenia endodermalnego
wewnętrznej powierzchnie pęcherzyka Ŝółtkowego. Obecność AFP stwierdzono równieŜ w owodni (9).
Tkanki nieprawidłowe: Badanie z uŜyciem przeciwciała obejmowało 189 próbek pobranych z wyciętych jąder z
guzami zarodkowymi (95 czystych nasieniaków i 94 nienasieniaki). We wszystkich nasieniakach odczyn AFP był
ujemny, a w 66% nienasieniaków pojawił się dodatni odczyn AFP. W 21% czystych raków zarodkowych (EC),
25% składników EC w rakach mieszanych, wszystkie składniki guzów pęcherzyków Ŝółtkowych, 20% czystych
potworniaków (T) i 47% składników T wykazano dodatni odczyn AFP. Rak in situ w kanalikach nasiennych
sąsiadujących z guzami nigdy nie dawał odczynu dodatniego ze względu na AFP (1). Przeciwciało barwiło 19/35
przypadków (54%) raka Ŝołądka z podwyŜszonymi poziomami AFP w surowicy (2). Komórki nowotworowe raków
zarodkowych wykazują odczyn ogniskowy w zakresie od umiarkowanego do silnego.
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Jacobsen GK, Jacobsen M. Alpha-fetoprotein (AFP) and human chorionic gonadotropin (HCG) in testicular
germ cell tumours. A prospective immunohistochemical study. Acta Path Microbiol Immunol Scand Sect A 1983;
91:165–76.
Kodama T, Kameya T, Hirota T, Shimosato Y, Ohkura H, Mukojima T, et al. Production of alpha-fetoprotein,
normal serum proteins, and human chorionic gonadotropin in stomach cancer: Histologic and
immunohistochemical analyses of 35 cases. Cancer 1981; 48:1647–55.
Perrone T, Steeper TA, Dehner LP. Alpha-fetoprotein localization in pure ovarian teratoma.
An immunohistochemical study of 12 cases. Am J Clin Pathol 1987; 88:713–17.
Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology; London: Oxford
University Press; 1999. p. 9–10.
Mizejewski GJ. 〈-fetoprotein as a biologic response modifier: Relevance to domain and subdomain structure
(minireview). Proc Soc Exp Biol Med 1997; 215:333–62.
Nunez EA. Biological role of alpha-fetoprotein in the endocrinological field: Data and hypotheses. Tumor Biol
1994; 15:63–72.
Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders Company; 1995. p. 236–38.
Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum
proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990; 17:3–7.
Jacobsen GK, Jacobsen M, Henriksen OB. An immunohistochemical study of a series of plasma proteins in the
early human conceptus. Oncodev Biol Med 1981; 2:399–410.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(115623-003)
Dako Denmark A/S
IR500/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17