Nr kat. IR637

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Epithelial Antigen
Klon Ber-EP4
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR637
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Epithelial Antigen, klon Ber-EP4, Ready-to-Use, (Link), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało znakuje większość
komórek nabłonka i jest przydatne w róŜnicowaniu raka gruczołowego i międzybłoniaka złośliwego (1). Przeciwciało
moŜe równieŜ pomagać w wykrywaniu mikroprzerzutów w węzłach chłonnych pacjentów z rakiem przełyku (2) oraz
róŜnicowaniu między podstawnokomórkowymi a płaskonabłonkowymi rakami skóry (3). Interpretacja kliniczna
wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich
prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby
pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Ep-CAM
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Antygen nabłonkowy to glikoproteina transbłonowa działająca jako cząsteczka adhezji międzykomórkowej. Ten swoisty
antygen jest szeroko rozpowszechniony w komórkach nabłonka i wykazuje wysoce konserwatywną ekspresję w
komórkach rakowych (4, 5). Jako wyjątek od powszechnej ekspresji w prawidłowym nabłonku, dojrzałe hepatocyty, w
przeciwieństwie do hepatocytów płodowych, komórki okładzinowe gruczołów Ŝołądka i komórki szczytowe nabłonka
płaskiego wykazują odczyn ujemny. Antygen nabłonkowy rzadko jest obecny w międzybłoniakach (1, 4). Opisywano, Ŝe
antygen nabłonkowy odgrywa waŜną rolę jako marker komórek nowotworowych w węzłach chłonnych pacjentów z
rakiem przełyku, innymi metodami sklasyfikowanymi jako bez przerzutów do węzłów chłonnych (2). Zasugerowano
równieŜ,
Ŝe
antygen
nabłonkowy
moŜe
róŜnicować
między
rakami
podstawokomórkowymi
i
podstawnokolczystokomórkowymi a rakami płaskonabłonkowymi skóry (3).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części
instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: Ber-EP4 (4). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Komórki MCF -7 (linia ludzkiego raka sutka) (4).
Swoistość
Analiza immunokompleksów między przeciwciałem a lizatem znakowanych powierzchniowo 125I komórek MCF-7 w
SDS-PAGE w warunkach redukujących wykazała, Ŝe przeciwciało znakuje dwa polipeptydy o masie odpowiednio 34
kDa i 39 kDa, odpowiadające antygenowi nabłonkowemu. W warunkach nie redukujących, polipeptydy wydzielane są
jako 39 kDa i 41 kDa, natomiast deglikozylacja zmniejsza masę do 31 kDa i 36 kDa.
W testach immunoprecypitacji przeciwciało Ber-EP4 blokuje reakcję przeciwciała HEA125 z lizatem komórek MCF7 i
vice versa, wykazując, Ŝe oba przeciwciała reagują z tym samym antygenem. Oba przeciwciała dają równieŜ identyczne
wyniki odczynu w komórkach i tkankach (4).
Na 37 testowanych linii komórkowych przeciwciało homogenicznie wybarwia wszystkie linie komórek rakowych (10/10),
natomiast linie komórek nie nabłonkowych (26/27) dają wynik ujemny, oprócz linii komórek erytroblastycznych K562 (4).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(118864-003)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
IR637/PL/MNI/2009.12.04 p. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się po wstępnej obróbce tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x)
(nr kat. K8005).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat.
K8005). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zakryte za pomocą
środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Link) (nr kat. K8000), zastępując odczynnik High
pH Target Retrieval Solution z tego zestawu odczynnikiem EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x),
(Link) (nr kat. K8005). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji.
Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące
wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link.
Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą
zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z
działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest
prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okręŜnicę i nerki,
natomiast komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka wydajnościowa” we wszystkich dodatnich preparatach. Zalecana kontrola ujemna to FLEX
Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują zarówno wzór odczynu cytoplazmatycznego, jak i błonowego.
Odczyn błonowy zachodzi preferencyjnie podstawno-bocznie (4).
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje wszystkie prawidłowe tkanki nabłonkowe. Komórki nabłonka o róŜnym
pochodzeniu wykazują róŜny poziom odczynu, ale większość nabłonków daje wynik silnie dodatni. Wynik ujemny
dają tylko komórki okładzinowe gruczołów Ŝołądka, warstwy szczytowe w nabłonku płaskim i dojrzałe hepatocyty (4).
Przeciwciało nie znakuje tkanek nie nabłonkowych, w tym wątroby, krwi obwodowej, szpiku kostnego, mózgu, tkanki
łącznej, mięśni gładkich i prąŜkowanych, serca, śródbłonka i tkanki mięśniowo-nabłonkowej. Dodatkowo wynik
ujemny dają komórki opłucnej i wyściółki otrzewnej, ale komórki pokrywające jajniki dają lekki odczyn dodatni (4). W
okręŜnicy komórki kolumnowe nabłonka płaskiego wykazują odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. W
nerkach komórki nabłonka wyściełające torebkę Bowmana wykazują odczyn słaby do umiarkowanego.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 142 ze 144 próbek nowotworów nabłonkowych, niezaleŜnie od ich
róŜnicowania, pochodzących z piersi, przełyku, Ŝołądka, okręŜnicy, odbytnicy, trzustki, nerek, wątroby, płuc, tarczycy
i ślinianek, pochwy, jajników, szyjki macicy i części nosowej gardła, odzwierciedlając odczyn w swoich nie złośliwych
odpowiednikach. Raki wątroby wykazywały odczyn heterogenny i obejmowały dwa przypadki ujemne. W badaniu
tym (4), 2 z 2 raków, odpowiednio, płaskonabłonkowych płuc i szyjki macicy, wykazały odczyn dodatni w skrawkach
utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie, choć w prawidłowych tkankach tylko znakowane były tylko
warstwy komórek podstawowych. W przypadku niektórych raków, takich jak raki Ŝołądka, przeciwciało wykazało
silniejsze znakowanie niŜ w tkankach prawidłowych, w szczególności na błonach. Przeciwciało nie oznaczyło
Ŝadnego z 88 raków nienabłonkowych oraz 20 przypadków białaczki (4).
W badaniu 83 gruczolakoraków i 115 złośliwych międzybłoniaków, 72/83 gruczolakoraków zostało oznaczonych
przez przeciwciało, podczas gdy dla złośliwych międzybłoniaków wynik ten wyniósł 1/115 (1). W innym badaniu
zostało oznaczone 20/20 gruczolakoraków płuc i 4/46 międzybłoniaków. Z czterech dodatnich międzybłoniaków 2
wykazały znakowanie ściśle ogniskowe (6). W węzłach limfatycznych sklasyfikowanych konwencjonalnymi metodami
histopatologicznymi jako pozbawione nowotworu przeciwciało oznaczyło mikroprzerzuty komórek nowotworowych u
89 ze 126 pacjentów z całkowicie usuniętymi rakami przełyku (2). W badaniu 75 nowotworów skóry przeciwciało
oznaczyło 39/39 raków podstawnokomórkowych, 0/23 raków płaskonabłonkowych i wykazało pewne obszary
zabarwienia w 13/13 raków podstawnokolczystokomórkowych.
(118864-003)
Dako Denmark A/S
IR637/PL/MNI/2009.12.04 p. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Sheibani K, Shin SS, Kezirian J, Weiss LM. Ber-EP4 antibody as a discriminant in the differential diagnosis of
malignant mesothelioma versus adenocarcinoma. Am J Surg Pathol 1991;15:779-84.
2.
Hosch S, Kraus J, Scheunemann P, Izbicki JR, Schneider C, Schumacher U, et al. Malignant potential and
cytogenetic characteristics of occult disseminated tumor cells in esophageal cancer. Cancer Res
2000;60:6836-40.
3.
Beer TW, Shepherd P, Theaker JM. Ber EP4 and epithelial membrane antigen aid distinction of basal cell,
squamous cell and basosquamous carcinomas of the skin. Histopathology 2000;37:218-23.
4.
Latza U, Niedobitek G, Schwarting R, Nekarda H, Stein H. Ber-EP4: new monoclonal antibody which
distinguishes epithelia from mesothelia. J Clin Pathol 1990;43:213-9.
5.
Momburg F, Moldenhauer G, Hämmerling GJ, Möller P. Immunohistochemical study of the expression of a Mr
34,000 human epithelium-specific surface glycoprotein in normal and malignant tissues. Cancer Res
1987;47:2883-91.
6.
Carella R, Deleonardi G, D’Errico A, Salerno A, Egarter-Vigl E, Seebacher C, et al. Immunohistochemical
panels for differentiating epithelial malignant mesothelioma from lung adenocarcinoma. Am J Surg Pathol
2001;25:43-50.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(118864-003)
Dako Denmark A/S
IR637/PL/MNI/2009.12.04 p. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17