Nr kat. IR051

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human Cytokeratin, High Molecular Weight
Clone 34βE12
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR051
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin High Molecular Weight, Clone 34βE12 (1), Ready-toUse, (Link), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało jest
przydatne w identyfikacji komórek podstawnych i nabłonka płaskiego w róŜnych tkankach. Dodatni wynik pomaga w
rozróŜnieniu łagodnego przerostu gruczołu krokowego od gruczolakoraka prostaty oraz w wykryciu róŜnic w nabłonku w
rakach o małym zróŜnicowaniu. Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o
badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Cytokeratyny to białka występujące w filamentach pośrednich cytoszkieletu, odgrywające kluczową rolę w
rozwoju i róŜnicowaniu komórek nabłonka. Zidentyfikowano około dwudziestu róŜnych cytokeratyn, które
klasyfikuje się na kategorie numeryczne na podstawie masy cząsteczkowej i punktów izoelektrycznych (2).
Ogólnie rzecz biorąc, cytokeratyny o niskiej masie cząsteczkowej (40–54 kDa) występują w nabłonku innym niŜ
wielowarstwowy płaski – 7-8 i (lub) 17-20 w klasyfikacji Molla (3). Cytokeratyny o wysokiej masie cząsteczkowej
(48–67 kDa) występują w nabłonku wielowarstwowym płaskim – kategorie 1-6 i (lub) 9-16 (3).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje
obsługi systemów detekcji IHC.
Dostarczony
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: 34βE12(1) Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Rozpuszczalny immunogen keratynowy wyekstrahowany z ludzkich komórek warstwy rogowej (1).
Swoistość
Wykazano, Ŝe przeciwciała anty-CK HMW klon 34βE12 reagują z białkami o masie cząsteczkowej 66, 57, 51 i
49 kDa odpowiadającymi cytokeratynom 1, 5, 10 i 14 w klasyfikacji Molla (1, 2, 4).
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Po
usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3.
Jak w przypadku kaŜdego materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury obchodzenia
się z nim.
Przechowywanie
Skrócony przepis
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą, naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie u Ŝywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. Jeśli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie
ma jednoznacznych oznak niestabilności produktu. Dlatego, równolegle z odczynami na materiale pochodzącym
od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. JeŜeli zaobserwuje się nieoczekiwane
barwienie, którego nie moŜna wyjaśnić odchyleniami w procedurach laboratoryjnych i podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Krok
Utrwalanie
Obróbka
wstępna
Rozcieńczenie
Bufor do
rozcieńczania
Kontrola ujemna
Wizualizacja
(115616-002)
Komentarze
Formalina
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. K8004)
Gotowy do uŜycia
Rozcieńczony fabrycznie
FLEX Negative Control, Mouse (nr kat. IR750)
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. K8000)
20 min HIER, 3-w-1 przy uŜyciu PT
Link i PT Link Rinse Station
Inkubacja 20 min
Inkubacja 20 min
20 min inkubacji, 2x5 min DAB +
307117PL_002_IR051/2012.07 1/4
Barwienie
kontrastowe
Tkanka kontrolna
Szkiełka
EnVision™ FLEX Hematoxylin (nr kat. K8008)
Inkubacja 5 min
Migdałki
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Odczyn cytoplazmatyczny
Zalecane dla lepszej adhezji skrawków
tkanek do szkiełek
Zatapianie
preparatu
Wymagane zatapianie bezwodne, trwałe
Po przeprowadzeniu barwienia,
skrawki muszą być odwodnione,
oczyszczone i zakryte za pomocą
środka do trwałego zatapiania
Oprzyrządowanie
Autostainer Link 48
NaleŜy stosować fiolki dostosowane do
aparatu (nr kat. SK201-SK203)
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje
przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie próbek
Wykonanie odczynu
Skrawki zatapiane w parafinie: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną
skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna: Wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej
obróbki HIER tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat.
K8000/K8004). Odparafinowanie, nawodnienie i cieplne odmaskowanie antygenu (HIER) moŜna przeprowadzić z
uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe informacje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu
PT Link. Dla aparatów PT Link naleŜy stosować następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania:
65 °C; temperatura i czas odmaskowania antygenu: 97 °C przez 20 (±1) minut, nast ępnie ochłodzić do 65 °C.
Usunąć statywy na szkiełka ze zbiornika aparatu PT i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT
Link Rinse Station, nr kat. PT109) wypełnionym rozcieńczonym buforem EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x)
(nr kat. K8007) o temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1–5 minut.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być
odwodnione, oczyszczone i zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Wizualizacja: Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000).
Program: W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana
objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące
wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer
Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer Link, naleŜy skontaktować się z działem
wsparcia technicznego firmy Dako. Instalator programu Autostainer Link moŜna znaleźć pod adresem
www.dako.com\Installer. Ten instalator zaktualizuje program DakoLink o protokół i informacje o odczynnikach dla
Anti-CK HMW, klon 34βE12. Nazwa skrócona protokołu przeciwciała brzmi Cytokeratin 34BE12. Wszystkie
procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Barwienie kontrastowe: Zaleca się przeprowadzanie barwienia kontrastowego z zastosowaniem odczynnika
EnVision FLEX Hematoxylin (nr kat. K8008). Dla uzyskania optymalnych wyników zaleca się stosowanie
bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Kontrole: Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wyrostek
robaczkowy lub okręŜnicę i komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka działania”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe (5):
Rodzaj tkanki
Składniki tkankowe dające
(liczba badanych
dodatni odczyn
przypadków)
(115616-002)
Rodzaj tkanki
Składniki tkankowe dające
(liczba badanych dodatni odczyn
przypadków)
Nadnercza (3)
0/3
Jajniki (3)
Szpik kostny (3)
0/3
Trzustka (3)
Gruczoły sutkowe (2)
Przytarczyce (3)
MóŜdŜek (3)
2/2 Nabłonek gruczołowy i przewodowy
(80%), cytoplazmatyczny
0/3
Mózgowie (3)
0/3
Szyjka macicy (2)
2/2 Nabłonek płaski powierzchniowy
(100%), cytoplazmatyczny
Jelito grube (3)
3/3 Nabłonek powierzchniowy (10%),
cytoplazmatyczny
Przysadka
mózgowa (3)
Gruczoł krokowy
(3)
Ślinianki (3)
Skóra (3)
3/3 Nabłonek powierzchniowy
(80–100%), cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek przewodu
trzustkowego (50–80%),
cytoplazmatyczny
0/3
0/3
(3/3) Komórki podstawne i nabłonek
przewodowy (90%), cytoplazmatyczny
3/3 Wydzielniczy nabłonek
przewodowy (100%),
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek płaski (100%),
cytoplazmatyczny
307117PL_002_IR051/2012.07 2/4
Przełyk (3)
3/3 Nabłonek płaski (100%),
cytoplazmatyczny
Serce (3/3)
0/3
Nerki (3)
3/3 Nabłonek kanalików nerkowych
(10–30%), cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek przewodów Ŝółciowych
(50%), cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek oskrzeli (10%),
cytoplazmatyczny
Wątroba (3)
Płuca (3)
Jelito cienkie (3)
Śledziona (3)
śołądek (3)
Jądra (3)
Komórki
międzybłonka (2)
Mięsień sercowy (3)
3/3 Nabłonek pęcherzyka płucnego
(50%), cytoplazmatyczny
2/2 Nabłonek mezodermalny (100%),
cytoplazmatyczny
0/3
Grasica (3)
Mięśnie szkieletowe (3)
0/3
Migdałki (3)
Nerwy obwodowe (3)
0/3
Macica (2)
Tarczyca (3)
3/3 Nabłonek przewodowy i
gruczołowy gruczołów potowych
(80–100%), cytoplazmatyczny
1/3 Nabłonek gruczołów łojowych
(100%), cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (20–50%),
cytoplazmatyczny
0/3
3/3 Nabłonek gruczołowy krypty
Ŝołądkowej (10–30%),
cytoplazmatyczny
0/3
3/3 Nabłonek płaski (100%),
cytoplazmatyczny
1/3 Komórki gwiaździste (5%),
cytoplazmatyczne
3/3 Nabłonek płaski (100%),
cytoplazmatyczny
2/2 Nabłonek endometrialny
(5–80%), cytoplazmatyczny
Tkanki patologiczne: Dodatnią immunoreaktywność z przeciwciałem anti-CK HMW, 34βE12 odnotowano w raku
płaskonabłonkowym, nabłonka przewodowego i przejściowego w tym: raku płaskonabłonkowym skóry, płuc i
nosogardzieli, raku nabłonka przewodowego piersi, trzustki, przewodów Ŝółciowych i ślinianek; raku nabłonka
przejściowego pęcherza i nosogardzieli oraz grasiczakach (6-11). Wykazano równieŜ, Ŝe Anti-CK HMW, 34βE12
dodatnio identyfikuje międzybłoniaki nabłonkowe, ale nie reaguje z międzybłoniakami mięsakowymi i
desmoplastycznymi (12). Zmienną dodatniość odnotowano z anti-CK HMW 34βE12 w gruczolakorakach jajników,
układu pokarmowego i tarczycy. Nowotwory odnotowane jako znacznie niereaktywne z klonem 34βE12 to m.in.
gruczolaki gruczołów hormonalnych, rak wątroby (rak wątrobowokomórkowy), rak endometrium, nerek i rak
neuroendokrynny (6,7,11). W prostacie klon 34βE12 dodatnio oznakowuje komórki podstawne zmian łagodnych takich
jak atrofia, atypowa hiperplazja gruczolakowata i hiperplazaj postwardnieniowa. Brak barwienia warstwy podstawnej z
anti-CK HMW, 34βE12 sugeruje raka prostaty, ale nie jest podstawą do zdiagnozowania choroby rozrostowej i wymaga
więcej danych morfologicznych (3, 7, 13-15). Zanotowano, Ŝe Anti-CK HMW klon 34βE12 oznakowuje komórki rakowe
w niektórych gruczolakorakach o budowie groniastej (3,15). Fałszywe barwienie immunologiczne zanotowano równieŜ z
klonem 34βE12 (7,16).
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
(115616-002)
Gown AM, Vogel AM. Monoclonal antibodies to intermediate filament proteins of human cells: Unique and
cross-reacting antibodies. J Cell Biol 1982; 95:414-24.
Moll R, Franke WW, Schiller DL. The catalog of human cytokeratins: Patterns of expression in normal
epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982; 31:11-24.
Miettinen M. Keratin immunohistochemistry: update of applications and pitfalls. Pathol Ann 1993; 28:113-43.
Gown AM, Vogel AM. Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins II. Distribution of
filaments in normal human tissues. Amer J Pathol 1984; 114:309-21.
IR051(IHC003-D09346).
Gown AM, Vogel AM. Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins. III. Analysis of
tumors. Am J Clin Pathol.1985 Oct;84(4):413-24.
Diagnostic immunohistochemistry: theranostic and genomic applications. Dabbs, David J. 3rd ed. Philadelphia,
PA : Saunders /Elsevier, 2010.
Hurlimann J, Gardiol D. Immunohistochemistry in the differential diagnosis of liver carcinomas. Amer J Surg
Pathol 1991; 15:280-8.
Dairkee SH, Puett L, Hackett AJ. Expression of basal and luminal epithelium-specific keratins in normal,
benign and malignant breast tissue. J Nat Can Inst 1988; 80:691-5.
Thike AA, Cheok PY, Jara-Lazaro AR, Tan B, Tan P, Tan PH. Triple-negative breast cancer: clinicopathological
characteristics and relationship with basal-like breast cancer. Mod Pathol 2010;23(1):123-33.
Gown AM, Vogel AM. Anti-intermediate fillament monoclonal antibodies; tissue-specific tools in tumor
diagnosis. Surv Synth Pathol Res. 1984;3:369-385.
Bolen JW, Hammar SP, McNutt MA. Reactive and neoplastic serosal tissue: a light-microscopic,
ultrastructural, and immunocytochemical study. Amer J Surg Pathol 1986; 10:34-47.
Varma M, Amin MB, Linden MD, Zarbo RJ. Discriminant staining pattern of small glandular and
preneoplastic lesions of the prostate using high molecular weight cytokeratin antibody—A study of 301
consecutive needle biopsies. Mod Pathol 1997; 10:93A
O’Malley FP, Grignon DJ, Shum DT. Usefulness of immunoperoxidase staining with high-molecular-weight
cytokeratin in the differential diagnosis of small-acinar lesions of the prostate gland. Virch Arch Pathol Anat
1990; 417:191-6.
Brimo F, Epstein JI. Immunohistochemical pitfalls in prostate pathology. Hum Pathol 2012;43:313-24.
Bacchi CA, Zarbo RJ, Jiang JJ, Gown AM. Do glioma cells express cytokeratin? Appl Immunohistochem
1995; 3:45-53.
307117PL_002_IR051/2012.07 3/4
Wydanie 07/12
(115616-002)
307117PL_002_IR051/2012.07 4/4