Ćwiczenie nr 4
Transkrypt
Ćwiczenie nr 4
Seminarium 4 i 5; ćwiczenie nr 4 (15 i 17. 11. oraz 22 i 24. 11. 2016) Ziarenkowce Gram-dodatnie (gronkowce, paciorkowce) Sprawdzian II obejmuje materiał seminarium 4 i 5 Seminarium 4 i 5 Charakterystyka ziarenkowców Gram-dodatnich. Czynniki determinujące chorobotwórczość gronkowców i paciorkowców. Zakażenia wywoływane przez gronkowce i paciorkowce (rodzaje: Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus). Epidemiologia zakażeń. Diagnostyka laboratoryjna zakażeń powodowanych przez gronkowce i paciorkowce. Mechanizmy oporności gronkowców na antybiotyki (produkcja β-laktamaz, meticylinooporność, mechanizm MLSB, oporność na glikopeptydy). Problem lekooporności paciorkowców. Profilaktyka zakażeń. Ćwiczenie: Demonstracja: Gronkowce 1. Wzrost szczepów: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis i Micrococcus sp. na podłożu agarowym z krwią baranią i na podłożu Chapmana 2. Oznaczenie koagulazy 3. Badanie mechanizmów lekooporności gronkowców oznaczanie wrażliwości na penicylinę metoda dyfuzyjno-krążkowa (krążek z penicyliną) określenie metycylinooporności a. metoda dyfuzyjno-krążkowa (krążek z cefoksytyną) b. testy wykrywające białka PBP 2a, produktu genu mecA, warunkującego oporność na metycylinę (dla Staphylococcus aureus) c. wykrywanie obecności genu mecA z wykorzystaniem techniki PCR identyfikacja i interpretacja fenotypów oporności na makrolidy, linkosamidy i streptograminy B badanie wrażliwości na glikopeptydy oznaczanie MIC glikopeptydów: o metoda mikrorozcieńczeń w bulionie o metoda dyfuzji w agarze z paska nasączonego gradientem antybiotyku Do wykonania: 1. barwienie metodą Grama preparatu z hodowli Staphylococcus aureus 2. oznaczenie katalazy i czynnika CF 6. 7. 8. 9. Paciorkowce 1. Wzrost paciorkowców na agarze z krwią: typy hemolizy α, β, Streptococcus pneumoniae (test z optochiną), Streptococcus pyogenes (test z bacytracyną), Streptococcus agalactiae – CAMP-test 2. Wzrost Enterococcus spp. na podłożu D-Coccosel agar (z żółcią i eskuliną). 3. Identyfikacja biochemiczna paciorkowców. 4. Identyfikacja antygenów paciorkowców: a) w materiale bezpośrednim: w wymazach z gardła w płynie mózgowo-rdzeniowym i krwi – Pneumokit b) z hodowli: Strepto-kit Wykrywanie mechanizmów oporności paciorkowców na antybiotyki Streptococcus pneumoniae – oporność na penicylinę (interpretacja wg EUCAST) Enterococcus spp.: oporność na wysokie stężenia aminoglikozydów – szczepy HLAR oporność na glikopeptydy (wankomycynę i teikoplaninę). Odczyn antystreptolizynowy – ASO. Szczepionki antypneumokokowe. Preparaty z plwociny (Streptococcus pneumoniae) oraz z hodowli paciorkowców. Do wykonania: 1. Barwienie metodą Grama preparatów z hodowli paciorkowców. 2. Oznaczenie katalazy.