Protokół

Immunologia ćw. 10 - ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)
Ocena sekrecji IL-2 przez ludzkie limfocyty T w supernatantach hodowlanych metodą
immunoenzymatyczną ELISA
1. Prowadzono 24-godzinną hodowlę limfocytów T na płytce 24-dołkowej w następujących
wariantach:
 Limfocyty T nieaktywowane
 Limfocyty T aktywowane CD3-CD28
 Limfocyty T aktywowane konkanawaliną
 Limfocyty T aktywowane IL-1
2. Po hodowli zebrano supernatanty hodowlane i przy użyciu gotowego testu ELISA IL-2
(eBioscience) oznaczono produkcję IL-2 przez limfocyty T
Protokół do ELISA
1. Nałożyd po 100μl badanej próbki do dołka
2. Inkubacja 1h, 37°C
3. Opróżnid dołki, płukad buforem do płukania 5 x 300μl
4. Nałożyd po 100μl koniugatu do każdego dołka
5. Inkubacja 1h, 37°C
6. Opróżnid dołki, płukad buforem do płukania 5 x 300μl
7. Nałożyd po 100μl substratu (TMB - 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine) do każdego dołka
8. Inkubacja 30min, RT (+20°C - +25°C)
9. Zatrzymad reakcję, dodając do każdego dołka po 100μl Stop Solution (H2SO4)
10. Odczytad absorbancję na spektrofotometrze przy długości fali 450 nm.