Monoclonal Mouse Anti-Human Epithelial Membrane

Monoclonal Mouse
Anti-Human Epithelial Membrane Antigen
Clone E29
Nr kat. M 0613
Wydanie 18.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Epithelial Membrane Antigen, klon E29, jest przeznaczone do uŜytku w
immunocytochemii. To przeciwciało barwi komórki nabłonkowe w szerokim zakresie tkanek i jest uŜytecznym
narzędziem w identyfikacji nabłonkowych nowotworów (1). Identyfikacja róŜnicowa jest wspomagana wynikami
z panelu przeciwciał. Interpretacja wyników musi być dokonana przez wykwalifikowanego patologa w
kontekście wywiadu chorobowego pacjenta i innych badań diagnostycznych
Wprowadzenie
Epithelial membrane antigen (EMA) – antygen błony nabłonkowej naleŜy do heterogennej populacji białek kulek
tłuszczu ludzkiego mleka (HMFG). HMFG jest złoŜonym, wydzielniczym produktem nabłonka sutka i EMA
moŜe być odzyskany z fazy wodnej zbieranej z powierzchni mleka po ekstrakcji w chloroformie i metanolu.
Oprócz mleka białka te występują w róŜnych, zarówno prawidłowych jak i nowotworowych nabłonkach. Liczba
monoklonalnych i poliklonalnych surowic odpornościowych przeciwko tym molekułom wzrosła i anty-EMA
szeroko przebadano w licznej grupie przypadków stanów nowotworowych, najczęściej w połączeniu z innymi
przeciwciałami (2
EMA jest cennym markerem do wykrywania przerzutów raka piersi w histologicznych wycinkach wątroby, węzłów
chłonnych i szpiku kostnego oraz jest uŜyteczne w róŜnicowaniu anaplastycznych raków od chłoniaków złośliwych i
do rozpoznawania komórek wrzecionowatych nowotworów nabłonkowych (1, 3).
Dostarczony odczynnik
Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczane w postaci ciekłej jako supernatant hodowli komórkowej
zdializowanej 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2, i zawierającej 15 mmol/L NaN3.
Klon: E29 (1). Izotyp: IgG2a, kappa.
StęŜenie mysiego IgG: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Preparat z błon kulek tłuszczu ludzkiego mleka (1, 4).
Swoistość
W metodzie Western blotting z uŜyciem immunogenu przeciwciało znakuje pasma o masie 265-400 kDa (1).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik wysoce toksyczny w czystej postaci. W stęŜeniu obecnym
w produkcie, chociaŜ niesklasyfikowanym jako niebezpieczny, azydek sodu moŜe reagować z elementami
kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe nagromadzenie azydków metali. Przy
usuwaniu odpadów przepłukać spływ duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali w
kanalizacji.
3. Jak w przypadku kaŜdego materiału biologicznego naleŜy stosować odpowiednie procedury obchodzenia się
z nim.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie uŜywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. JeŜeli
odczynniki przechowywane były w innych warunkach niŜ wymagane, uŜytkownik musi sprawdzić ich stan. Nie
ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność tego produktu, dlatego pozytywne i negatywne kontrole
powinny być oznaczone równocześnie z próbkami pobranymi od pacjenta. JeŜeli zaobserwuje się
nieoczekiwane barwienie, którego nie moŜna wyjaśnić odchyleniami w procedurach laboratoryjnych i
podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z serwisem technicznym producenta.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜe być uŜywane do znakowania skrawków tkanki utrwalonych w
formalinie, w środku utrwalającym Bouina, B5 lub w roztworze Zenkera (5) i zatopionych w parafinie. Zalecane
jest wstępne przygotowanie tkanek przy pomocy proteinazy K lub metody odzyskiwania epitopu przez
ogrzewanie. W odzyskiwaniu epitopu przez ogrzewanie w tkankach utrwalonych w formalinie, optymalne wyniki
są uzyskiwane przy pomocy Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, Dako Target Retrieval Solution,
High pH, nr kat. S 3308, 10 mmol/L buforu cytrynianowego, pH 6.0, lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA,
pH 9.0. Skrawki tkanki nie mogą wyschnąć podczas przygotowania ani podczas następującej po nim
procedurze barwienia immunocytochemicznego.
ZamroŜone wycinki i preparaty komórkowe: Przeciwciało moŜe być uŜyte do znakowania zamroŜonych
skrawków utrwalonych acetonem (1).
Procedura barwienia
(108417-003)
Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Human Epithelial Membrane Antigen, nr kat. M 0613 moŜe być uŜyte w
zakresie rozcieńczenia 1:50-1:100 w przypadku badania utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie
skrawków ludzkiego migdałka i przy uŜyciu odzyskiwania determinanty antygenowej wywołanego 20
minutowym ogrzewaniem w Dako Target Retrieval solution, nr kat. S 1700 i 30 minutowej inkubacji w
temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem. Optymalne warunki mogą róŜnić się w zaleŜności od
badanego materiału, metody przygotowania i powinny być ustalone przez kaŜde laboratorium. Zaleca się jako
kontrolę ujemną Dako Mouse IgG2a, nr kat. X 0943, rozcieńczone do takiego samego stęŜenia mysiego IgG
jak pierwsze przeciwciało. JeŜeli nie ustalono stabilności rozcieńczonego przeciwciała i kontroli negatywnej w
aktualnej procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczyć te odczynniki tuŜ przed uŜyciem lub rozcieńczyć w Dako
Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Pozytywne i negatywne kontrole powinny być uŜyte równocześnie z próbkami
badanymi.
M 0613/PL/CE/18.12.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Wizualizacja: Zalecane są zestawy DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, i DAKO EnVision™+/HRP, nr kat.
K 4004 i K 4006. Zestaw Dako APAAP nr kat. K 0670 jest dobrym zamiennikiem jeśli chodzi o barwienie
endogennej peroksydazy w zamroŜonych wycinkach i preparatach komórkowych. NaleŜy postępować zgodnie z
procedurą załączoną do wybranego zestawu uwidaczniania.
Automatyzacja: Przeciwciało nadaje się bardzo dobrze do barwienia immunocytochemicznego przy uŜyciu
automatycznych urządzeń barwiących takich jak Dako Autostainer.
Ograniczenia produktu
Przeciwciało barwi komórki plazmatyczne i EMA okazuje się być powszechna w nowotworowych komórkach
plazmatycznych, ale równieŜ spotyka się je czasami wśród innych typów chłoniaków. JednakŜe naleŜy
podkreślić, Ŝe limfoidalne pochodzenie takich przypadków zwykle moŜna wyraźnie zidentyfikować wyłącznie na
podstawie obrazu morfologicznego (1).
Charakterystyka wyników
W prawidłowych piersiowych i innych wydzielniczych nabłonkach barwienie jest głównie zlokalizowane na
wierzchołkach błon luminalnych. W nowotworach barwienie cytoplazmatyczne i wierzchołkowe błony luminalnej jest
najbardziej powszechnym wzorcem immunoreaktywności, występują takŜe: barwienie błony obwodowej oraz inne
formy barwienia (5).
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki nabłonkowe w szerokim zakresie tkanek i komórki mezotelialne,
obejmując kanały i gruczoły łojowe skóry, nabłonki układu Ŝołądkowo-jelitowego, gronka i przewody piersiowe,
zewnątrzwydzielnicze komórki trzustki, nabłonek pęcherza moczowego, kanaliki dalsze nerek, szyjkę macicy i
śluzówkę macicy, nabłonki układu oddechowego, przewody tarczycy i drogi Ŝółciowe. Nie obserwowano barwienia
w naskórku, wewnątrzwydzielniczych komórkach trzustki, kłębuszkach i bliŜszych kanalikach nerek, ośrodkowym
układzie nerwowym, obwodowym układzie nerwowym, tkance łącznej, hepatocytach, tkance limfoidalnej oprócz
sporadycznych komórek plazmatycznych (1).
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakuje szeroki zakres nabłonków nowotworowych a takŜe nowotworowe
komórki mezotelialne (1). W szeroko zakrojonych badaniach obejmujących 2081 przypadków nabłonkowych,
mezenchymalnych i hematopoetycznych nowotworów, przeciwciało wykazało 98,6% swoistości a pozytywna
wartość predykcyjna wynosiła 99,2% dla róŜnicowania nowotworów nabłonkowych w przypadku łącznego
oznaczania z powszechnym antygenem leukocytów (LCA) (2). Wykazano, Ŝe przeciwciało znakuje 105/354
przypadków nowotworów tkanek miękkich i wewnątrzczaszkowych z większością pozytywnych przypadków
wśród maziówczaków, złośliwych międzybłoniaków wrzecionowatokomórkowych, mięsaków nabłonkowych,
nowotworów splotów rdzenia i naczyniówki oka, 38/169 przypadków nowotworów z małych, okrągłych komórek i
mięsaków z małych komórek, 13/158 przypadków nowotworów zarodkowych, 23/23 przypadki raków
,,mięsakowatych” wrzecionowatokomórkowych, 815/918 przypadków innych nowotworów nabłonkowych
obejmujących łuskowate, z komórek Merkela, piersiowe, gruczolakoraki Ŝołądka i okręŜnicy, trzustki, gruczołów
ślinowych, pęcherza moczowego, macicy, jajnika, pochwy, płuc, prostaty, tarczycy, grasicy, wątroby, komórek
nerkowych i raków noso-gardła (2). W chłoniakach przeciwciało barwiło 10/22 przypadki typu ,,null” lub Tkomórkowe CD30+ ALCL z małych komórek, monomorficznych i polimorficznych podtypów (6), 34/35
przypadków p80/ALK+, 1/6 przypadków CD56/57+ T/NK-komórkowych, 2/7 przypadków EBV+ duŜych,
cytotoksycznych T-komórkowych, 2/8 przypadków o małym stopniu złośliwości z cytotoksycznych komórek T i
6/10 przypadków cytotoksycznych chłoniaków ziarniczopodobnych (7). Brak znakowania obserwowano w 8/18
przypadkach raka z komórek podstawowych, 12/12 przypadków raka wątroby, 43/43 przypadkach złośliwych
czerniaków, i 69/69 przypadkach nowotworów wewnątrzwydzielniczych z wyjątkiem słabo zróŜnicowanych
zmian w 6 przypadkach nowotworów wysp trzustkowych (2).
Piśmiennictwo
1. Cordell J, Richardson TC, Pulford KAF, Ghosh AK, Gatter KC, Heyderman E, et al. Production of
monoclonal antibodies against human epithelial membrane antigen for use in diagnostic
immunocytochemistry. Br J Cancer 1985;52:347-54.
2. Swanson PE. Monoclonal antibodies to human milk fat globule proteins. In: Wick MR, Siegal GP, editors.
Monoclonal antibodies in diagnostic immunohistochemistry. New York – Basel: Marcell Dekker Inc; 1988. p.
227-83.
3. Sloane JP, Ormerod MG. Distribution of epithelial membrane antigen in normal and neoplastic tissues and
its value in diagnostic tumor pathology. Cancer 1981:47:1786-95.
4. Heyderman E, Strudley I, Powell G, Richardson TC, Cordell JL, Mason DY. A new monoclonal antibody to
epithelial membrane antigen (EMA) – E29. A comparison of its immunocytochemical reactivity with polyclonal
anti-EMA antibodies and with another monoclonal antibody, HMFG-2. Br J Cancer 1985;52:355-61.
5. Pinkus GS, Kurtin PJ. Epithelial membrane antigen – a diagnostic discriminant in surgical pathology.
Immunohistochemical profile in epithelial, mesenchymal, and hematopoietic neoplasms using paraffin
sections and monoclonal antibodies. Hum Pathol 1985;16:929-40.
6. Felgar RE, Salhany KE, Macon WR, Pietra GG, Kinney MC. The expression of TIA-1+ cytolytic-type
granules and other cytolytic lymphocyte-associated markers in CD30+ anaplastic large cell lymphomas
(ALCL): correlation with morphology, immunophenotype, ultrastructure, and clinical features. Hum Pathol
1999;30:228-36.
7. Kagami Y, Suzuki R, Taji H, Yatabe Y, Takeuchi T, Maeda S, et al. Nodal cytotoxic lymphoma spectrum. A
clinicopathologic study of 66 patients. Am J Surg Pathol 1999;23:1184-1200.
Objaśnienia symboli
(108417-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Przed uŜyciem zapoznać się z
instrukcjami
Termin waŜności
Producent
M 0613/PL/CE/18.12.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17