Nr kat. IR648

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD10
Klon 56C6
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR648
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD10, klon 56C6, Ready-to-Use (Link), jest przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało przydatne jest w identyfikacji chłoniaka
Burkitta (1, 2), chłoniaku grudkowym (1, 3, 4) poza stopniem III (5), ostrej białaczki limfoblastycznej z prekursorów
komórek B (1, 2) oraz raku nerek typu jasnokomórkowego (6, 7). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku
barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Wspólny antygen ostrej białaczki limfocytowej (CALLA, common acute lymphocytic leukemia antigen), obojętna
endopeptydaza, enkefalinaza, neprylizyna (7–9).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
CD10 to białko o masie 90–100 kDa, naleŜące to rodziny metaloproteaz transmembranowych typu II, do której
naleŜą równieŜ antygeny leukocytowe CD 13 i CD26, oraz aminopeptydaza A. Gen kodujący CD10 znajduje się na
chromosomie 3. CD10 to enzym zaleŜny od cynku i uwaŜa się, Ŝe hamuje odpowiedzi komórkowe na hormony
peptydowe (8, 9). W komórkach limfatycznych CD10 ulega ekspresji w niedojrzałych prekursorowych komórkach T i
B, ale zanika w komórkach dojrzałych. JednakŜe CD10 ponownie ulega ekspresji w komórkach B ulegających
proliferacji oraz dojrzalych neutrofilach (8–10). W zezłośliwieniach limfatycznych CD10 ulega ekspresji w ostrej
białaczce limfatycznej (ALL) wywodzącej się z prekursorowych komórek B, ale występuje równieŜ w części ALL z
komórek T (1, 2). Dodatkowo antygen moŜe równieŜ ulegać ekspresji w rozlanym chłoniaku z komórek B (DLBCL)
(1, 10) oraz, rzadko, w chłoniaku z komórek płaszcza (3).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: 56C6. Izotyp: IgG1.
Immunogen
Rekombinowane białko fuzyjne odpowiadające zewnętrznej domenie glikoproteiny CD10.
Swoistość
W teście Western blot lizatu komórek łoŜyska przeciwciało znakuje pasmo o masie 93 kDa, odpowiadające CD10 (11).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł‚ biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(118488-002)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
IR648/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą
zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować
się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu
jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka
wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki i wątrobę,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn błonowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe W wątrobie, kanaliki Ŝółciowe odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. W migdałkach
komórki B ośrodków rozmnaŜania wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Przeciwciało znakuje komórki
macierzyste w szpiku kostnym, podgrupę niedojrzałych komórek B w szpiku kostnym i neutrofile (8, 9, 11). Przeciwciało
znakuje takŜe komórki kłębuszkowe i kanalikowe nerek, ośrodki rozmnaŜania w blaszce właściwej okręŜnicy, rąbki
szczoteczkowe enterocytów w jelicie cienkim, nabłonek rąbka szczoteczkowego pęcherzyków Ŝółciowych,
śródmiąŜszowe komórki zrębu płuca, komórki Schwanna, międzypęczkowe komórki zrębu w mięśniach poprzecznie
prąŜkowanych, fibroblasty, wielojądrowe trofoblasty i cytotrofoblasty łoŜyska, nabłonek gruczołowy stercza oraz płyn
gruczołu krokowego, komórki zrębu w śluzówce macicy oraz komórki mieloepitelialne sutka (6, 7, 9, 11).
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 3/3 i 2/3 chłoniaki Burkitta oraz 4/5 i 30/33 ostrych białaczek
limfoblastycznych z prekursorowych komórek B (B-ALL) (1, 2). Przeciwciało znakowało 22/28, 12/15, 9/10 i 10/11
chłoniaków grudkowych (1, 3, 4, 11) i 12/15 chłoniaków grudkowych stopnia I, natomiast w przypadku stopnia II
chłoniaków grudkowych słabą ekspresję stwierdzono w 5/6 przypadków (5). Dodatkowo przeciwciało znakowało
41/46 raków nerkowokomórkowych (6) i wszystkie przerzutowe raki jasnokomórkowe nerek (7). Ponadto ostra
białaczka limfoblastyczna z prekursorów komóre T (T-ALL) znakowana była w 2/5 przypadkach (6) a rozlany
chłoniak z duŜych komórek B w 11/11 przypadków (10).
(118488-002)
Dako Denmark A/S
IR648/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Kaufmann O, Flath B, Späth-Schwalbe, Possinger K and Dietel M. Immunohistochemical detection of CD10
with monoclonal antibody 56C6 on paraffin sections. Am J Clin Pathol 1999;11:117-22.
2.
Chu PG, Chang KL, Weiss LM and Arber DA. Immunohistochemical detection of CD10 in paraffin sections of
hematopoietic neoplasms. App Imm & Mol Morphol. 2000;8:257-62
3.
Chen CC, Raikow RB, Sonmez-Alpan E and Swerdlow S. Classification of small B-cell lymphoid neoplasms
using a paraffin section immunohistochemical panel. App Imm & Mol Morphol 2000;8:1-11.
4.
Lorsbach RB, Shay-Seymore D, Moore J, Banks PM, Hasserjian RP, Sandlund JT and Behm FG.
Clinicopathologic analysis of follicular lymphoma occurring in children. Blood 2002;99:1959-64.
5.
Eshoa C, Perkins S, Kampalath B, Shidham, Juckett M, and Chang C-C. Deceased CD10 expression in grade
III and in interfollicular infiltrates of follicular lymphomas. Am J Clin Pathol 2001;115:862-7
6.
Chu P and Arber DA. Paraffin section detection of CD10 in 505 nonhematopoietic neoplasms. Frequent
expression in renal cell carcinoma and endometrial stromal sarcoma. Am J Clin Patholl 2000;113:374-82.
7.
Ordi J, Romagosa C, Tavassoli FA, Nogales F, Palacin A, Condom E, et al. CD10 expression in epithelial tissue
and tumors of the gynecologic tract. A useful marker in the diagnosis of mesonephric, trophoblastic, and clear
cell tumors. Am J Surg Pathol 2003;27:178-86.
8.
Béné MC, Faure GC and the GEIL (Group D’Etude Immunologique des Luecémies). CD10 in acute leukemias.
Haematologica 1997;82:205-10.
9.
Leong AS-Y, Cooper K and Leong FJW-M. CD10. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology.
London: Greenwich medical media; 2003. p. 77-78.
10. Le Gouill S, Talmant P, Touzeau C, Moreau A, Garand R, Juge-Morineau N, et al. The clinical presentation and
prognosis of diffuse large B-cell lymphoma with t(14:18) and 8q24/c-MYC rearrangement. The hematology
journal 2007;92:1335-42
11. McIntosh GG, Lodge AJ, Watson P, Hall AG, Wood K, Anderson JJ et al. NCL-CD10-270: A new monoclonal
antibody recognizing CD10 in paraffin-embedded tissue. Am J Pathol 1999;154:77-82
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(118488-002)
Dako Denmark A/S
IR648/PL/MNI/2009.12.04 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17