Nr kat. IR620

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Cytokeratin 17
Clone E3
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR620
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Cytokeratin 17, klon E3, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone
do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało jest przydatne w identyfikacji raków
płaskokomórkowych (1, 2) oraz gruczolakoraków trzustki (3) i raka sutka (4). Interpretacja kliniczna dodatniego lub
ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych
i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Cytokeratyny 17 naleŜą do filamentów pośrednich, tworzących cytoszkielet w prawie wszystkich komórkach
eukariotycznych. W przeciwieństwie do innych filamentów pośrednich, cytokeratyny (CK) naleŜą do rodziny wysoce
złoŜonych białek wielogenowych, o masach cząsteczkowych w zakresie od 40 do 68 kDa. CK powszechnie uwaŜane
są za najwaŜniejsze markery róŜnicowania nabłonka i do chwili obecnej w róŜnych typach nabłonka ludzkiego
wyodrębniono 20 ich odmian (5). CK moŜna podzielić na odmiany kwaśną typu A (klasa I) i obojętno-zasadową typu
B (klasa II). CK 17 jest białkiem o masie 46 kDa, które naleŜy do podrodziny A odmiany kwaśnej. Rozkład jego
ogranicza się do komórek warstw podstawnych i mioepitelialnych grupy nabłonków złoŜonych i nabłonka
przejściowego oraz do zewnętrznej otoczki pnia mieszka włosowego (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: E3 (6). Izotyp: IgG2b, kappa.
Immunogen
Frakcja cytoszkieletu szczurzego nabłonka okręŜnicy (6).
Swoistość
W jedno i dwuwymiarowej analizie SDS-PAGE i teście immunoblot preparaty cytoszkieletu ekstrahowanego z kilku
hodowli komórek i tkanek za pomocą Triton X-100 przeciwciało znakowało prąŜek odpowiadający ludzkiej
cytokeratynie 17 (6).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
(117667-002)
Dako Denmark A/S
IR620/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek i odczynników przedstawiono w
Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Autostainer,
naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ
przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być
określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym
natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać
zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z
działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest
prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować skórę, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse,
(Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki nadpodstawne utrwalonego w formalinie nabłonka przełyku (7)
i komórki warstwy podstawnej błony śluzowej oskrzeli (1). W szyjce macicy przeciwciało znakuje rezerwowe komórki
wewnątrzszyjkowe (2). W przypadku sutków przeciwciało znakuje warstwę podstawną nabłonka przewodowego
sutka (4). W skórze komórki mioepitelialne gruczołów potowych wykazują umiarkowany lub silny odczyn
plazmatyczny, natomiast w komórkach nabłonka płaskiego brak odczynu.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakowało komórki warstwy rogowaciejącej w 10/22 przypadki inwazyjnego raka
przełyku (7). W przypadku badania krtani zaobserwowano odczyn w dysplazji i raku płaskonabłonkowym (8).
Przeciwciało znakowało komórki warstwy podstawnej i nadpodstawnej w rozroście komórek podstawnych oraz
warstwy komórek podstawnych, pośrednich i szczytowych w metaplazji komórek płaskich błony śluzowej oskrzeli (1).
W badaniu raka szyjki macicy przeciwciało znakowało przypadki metaplazji nabłonka w niedojrzały nabłonek
wielowarstwowy płaski oraz rogowaciejące i nierogowaciejące raki płaskonabłonkowe (2). W róŜnych podtypach raków
gruczołowych trzustki przeciwciało znakowało 38/46 przypadków raka przewodowego trzustki, 5/6 przypadków raka
bańki wątrobowo-trzustkowej pochodzącego z przewodów trzustkowo-Ŝółciowych, 17/24 przypadków raka
wewnątrzwątrobowych dróg Ŝółciowych, natomiast przeciwciało znakowało tylko 8/184 przypadków raków gruczołowych
(typu innego niŜ śluzowe) spoza przewodów trzustkowo-Ŝółciowymi (3). W rakach sutka przeciwciało znakowało 75/532
przypadki (4).
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Fisseler-Eckhoff A, Erfkamp S, Müller K-M. Cytokeratin expression in preneoplastic lesions and early squamous
cell carcinoma of the bronchi. Path Res Pract 1996: 92:552-559.
Smedts F, Ramaekers F, Link M, Lauerova L, Troyanovsky S, Schijf C, Vooijs G P. Detection of keratin
subtypes in routinely processed cervical tissue: implications for tumour classification and the study of cervix
cancer aetiology. Virchows Archiv 1994:425:145-155.
Chu P G, Schwarz R E, Lau S K, Yen Y, Weiss L M. Immunohistochemical staining in the diagnosis of
pancreatobiliary and Ampulla of Vater adenocarcinoma. Am J Surg Pathol 2005:29:359-367.
van de Rijn M, Perou C M, Tibshirani R, Haas P, Kallioniemi O, Kononen J, Torhost J, et al. Expression of
cytokeratins 17 and 5 indentifies a group of breast carcinomas with poor clinical outcome. Am J Pathol
2002:161:1991-1996.
Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann, Harris,
editors. Subcellular Biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205-62.
Troyanovsky SM, Guelstein VI, Tchipysheva TA, Krutovskikh VA, Bannikov GA. Patterns of expression of
keratin 17 in human epithelia: dependency on cell position. J Cell Sci 1989;93:419-26.
Takahashi H, Shikata N, Senzaki H, Shintaku M, Tsubura A. Immunohistochemical staining patterns of keratins
in normal oesophageal epithelium and carcinoma of the oesophagus. Histopathology 1995;26:4
Cohen-Kerem R, Madah W, Sabo E, Rahat M A, Greenberg E, Elmalah I. Cytokeratin-17 as a potential marker
for squamous cell carcinoma of the larynx. Ann Otol Laryngol 2004:113:821-827.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117667-002)
Dako Denmark A/S
IR620/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17