Nr kat. IR611
Transkrypt
Nr kat. IR611
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin Klon 1A4 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR611 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin, klon 1A4, Ready-to-Use, (Link) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich, miofibroblasty i komórki mięśniowo-nabłonkowe, stanowiąc uŜyteczne narzędzie identyfikacji mięśniaków gładkich, mięśniakomięsaków gładkokomórkowych (1) i gruczolaków pleomorficznych (2). Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce róŜnicowej. Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Aktyny cytoplazmatyczne, naleŜące do białek mikrofilamentarnych cytoszkieletu, stanowią jedne z najlepiej zachowanych białek eukariotycznych, jakie podlegają ekspresji u ssaków i ptaków. Aktyna występuje w sześciu izoformach o róŜnej kolejności aminokwasów, jednak wszystkie mają tę samą masę cząsteczkową, wynoszącą 42 kDa. Izoformy wykazują ponad 90% homologię sekwencji, jednak w 18 N-końcowych elementach homologia wynosi tylko 50–60%. Region N-końcowy wydaje się stanowić główny obszar antygenowy (3). Istnieją róŜne α izoformy charakterystyczne dla tkanek mięśniowych, tj. α mięśni szkieletowych, α mięśnia sercowego i α mięśni gładkich (4). Aktyny β i γ mogą występować w komórkach mięśniowych oraz większości innych typów komórek ciała, w tym niemięśniowych (5). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: 1A4. Klon 1A4 jest identyczny z przeciwciałem anty-asm-1 opisanym w (3). Izotyp: IgG2a, kappa. Immunogen N-końcowy, syntetyczny dekapeptyd α-aktyny mięśni gładkich, sprzęŜony z KLH (hemocyjaniną z Megathura crenulata) (4). Swoistość W testach Western blot i testach immunoblot SDS-PAGE izoformy α aktyny z mięśni gładkich przeciwciało znakuje prąŜek odpowiadający aktynie α z mięśni gładkich (3). Jak wykazały badania techniką Western blot i/lub immunocytochemiczne, przeciwciało reaguje krzyŜowo z białkiem stanowiącym ekwiwalent α-aktyny mięśni gładkich u kur, krów i szczurów (3). Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków (115509-002) Dako Denmark A/S IR611/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okręŜnicę i wątrobę, natomiast komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa” we wszystkich dodatnich preparatach. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja odczynu Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich w naczyniach krwionośnych oraz dodatkowo przewody ślinowe i komórki mięśniowo-nabłonkowe wokół zrazików w śliniankach (2). Pozytywnie znakowane były równieŜ komórki mięśni gładkich w prawidłowej mięśniówce macicy (35/36) (1). Co więcej, obserwowano czasowe znakowanie komórek okołozatokowych wątroby (6). Komórki mięśni gładkich błony mięśniowej w okręŜnicy wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki mięśni gładkich wyściełających zatoki wątroby wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakowało mięśniaki gładkie (24/26), atypowe mięśniaki gładkie (6/7) i mięśniakomięsaki gładkokomórkowe macicy (21/25), podobnie jak pozamaciczne wrzecionowatokomórkowe mięśniakomięsaki gładkokomórkowe spoza przewodu pokarmowego (13/13) (1). Ponadto przeciwciało znakowało zmienne ilości komórek w 8/8 pseudomięsakowych miofibroblastycznych nowotworach pęcherza moczowego u dzieci (7). W gruczolakach pleomorficznych przeciwciało znakowało rakowe komórki nabłonkowe (komórki mięśniowonabłonkowe) w 19 na 20 przypadków (2). Piśmiennictwo 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Rizeq MN, van de Rijn M, Hendrickson MR, Rouse RV. A comparative immunohistochemical study of uterine smooth muscle neoplasms with emphasis on the epithelioid variant. Hum Pathol 1994; 25:671-7. Brennan PA, Umar T, Zaki GA, Langdon JD, Spedding A, Buckley J, et al. Are myoepithelial cells responsible for the widespread expression of inducible nitric oxide synthase in pleomorphic adenoma? An immunohistochemical study. J Oral Pathol Med 2000;29:279-83. Skalli O, Ropraz P, Trzeciak A, Benzonana G, Gillessen D, Gabbian G. A monoclonal antibody against α-smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation. J Cell Biol 1986; 103:2787-96. Roholl PJM, Elbers HRJ, Prinsen I, Claessens JAJ, van Unnik JAM. Distribution of actin isoforms in sarcomas: an immunohistochemical study. Hum Pathol 1990; 21:1269-74. Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD. The cytoskeleton. In: Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD, editors. Molecular biology of the cell. 2nd ed. New York and London: Garland Publishing; 1989. p. 613-629. Schmitt-Gräff A, Krüger S, Bochard F, Gabbiani G, Denk H. Modulation of alpha smooth muscle actin and desmin expression in perisinusoidal cells of normal and diseased livers. Am J Pathol 1991; 138:1233-42. Hojo H, Newton WA, Hamoudi AB, Qualman SJ, Wakasa H, Suzuki S, et al. Pseudosarcomatous myofibroblastic tumor of the urinary bladder in children: a study of 11 cases with review of the literature. Am J Surg Pathol 1995; 19:1224-36. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (115509-002) Dako Denmark A/S IR611/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17