VENTANA anti-p63 (4A4) Mouse MonoclonalPrimary

VENTANA anti-p63 (4A4) Mouse Monoclonal Primary
Antibody
790-4509
05867061001
50
PRZEZNACZENIE
Przeciwciało VENTANA anti-p63 (4A4)
Mouse Monoclonal Primary Antibody
(VENTANA anti-p63 (4A4)) jest
skierowane przeciwko białku p63.
Przeciwciało to charakteryzuje jądrowy
wzór barwienia i może być przydatne
w różnicowaniu łagodnych i złośliwych
zmian stercza i sutka oraz
w różnicowaniu raka
Rysunek 1. VENTANA anti-p63 (4A4)
płaskonabłonkowego płuc
barwi zdrowe komórki podstawne w
i gruczolakoraka płuc.
tkance stercza.
Przeciwciało jest przeznaczone
do jakościowego barwienia skrawków tkankowych utrwalonych w formalinie i zatopionych
w parafinie.
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa
w połączeniu z badaniem histopatologicznym, odpowiednimi danymi klinicznymi
i badaniami kontrolnymi.
To przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Przeciwciało jest rozcieńczone w 0,05 M Tris-HCL z dodatkiem 1% białka nośnikowego
i środka ProClin 300, będącego konserwantem.
Całkowite stężenie białka w odczynniku wynosi około 10 mg/ml. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 0,140 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność
przeciwciał zawartych w tym produkcie.
VENTANA anti-p63 (4A4) jest przeciwciałem monoklonalnym wytwarzanym
z supernatantu z hodowli komórkowej.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA, dołączonej
do opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących
kwestii: (1) Zasady przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki
niedołączone do zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury
kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne
ograniczenia.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE
Nie dostarczono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy
VENTANA (ultraView Universal DAB Detection Kit) i elementów pomocniczych, takich jak
pozytywne i negatywne kontrolne preparaty mikroskopowe tkanek.
Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne
we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym
przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne.
PRZECHOWYWANIE
Po otrzymaniu preparat nieużywany przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i trwałości przeciwciała,
po każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce
w pozycji pionowej.
Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie należy
stosować odczynnika po upływie terminu ważności.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
Ludzkie białko p63 należy do rodziny p63 czynników transkrypcyjnych i występuje
w sześciu głównych izoformach.1,2 Białko p63 wykazuje silną ekspresję w komórkach
podstawnych lub prekursorach różnej tkanki nabłonkowej, w tym stercza, sutka, przełyku,
pęcherza oraz naskórka1 i odgrywa ważną rolę w rozwoju każdej z tych tkanek.3,4 Białko
p63 w gruczole krokowym można wykryć w komórkach warstwy podstawnej prawie
wszystkich prawidłowych i łagodnych gruczołów5,6, ale nie występuje w komórkach
neuroendokrynnych czy kanalikach, komórkach wydzielniczych.4 Ponieważ komórki
podstawne nie występują w inwazyjnym raku gruczołu krokowego, identyfikacja białka
p63 w prawidłowym gruczole krokowym pomaga w identyfikacji raka gruczołu
krokowego.4,6,7 W przypadku śródnabłonkowego nowotworu stercza (PIN),
rozpoznawanego jako zmiana przedrakowa, w komórkach dysplastycznych nie występuje
ekspresja p63, ale istnieje możliwość zidentyfikowania pierścienia pozostałych komórek
podstawnych zawierających białko p63.4 Podobnie wykrywanie białka p63 w zdrowych
komórkach mięśniowo-nabłonkowych sutka może być przydatne w identyfikacji
nowotworów raka sutka.8 W płucach donoszono o wynikach pozytywnych p63
w 77,8–100% przypadków raka płaskonabłonkowego płuca, natomiast większość
(88,7–100%) przypadków gruczolakoraka płuc jest negatywna pod względem tego
markera.9-12 Dlatego p63 jako część panelu biomarkerów może pomóc w różnicowaniu
raka płaskonabłonkowego płuc oraz gruczolakoraka płuc.
Do stosowania z tym przeciwciałem pierwotnym nadają się rutynowo przygotowane tkanki
utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem stosowania zestawów
do detekcji firmy VENTANA i automatów do barwienia VENTANA BenchMark XT oraz
BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10% obojętna
buforowana formalina13. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ
antygenowość pociętych na skrawki tkanek może z czasem ulegać osłabieniu.
Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli
pozytywnej i negatywnej.
ZASADY PRZEPROWADZANIA PROCEDURY
5.
Anti-p63 (4A4) jest mysim przeciwciałem monoklonalnym, skierowanym przeciwko
rekombinowanemu fragmentowi N-końcowej sekwencji ludzkiego białka p63. Anti-p63
(4A4) wiąże się do białka p63 w zatopionym w parafinie skrawku tkanki i wykazuje
schemat barwienia jądrowego. Przeciwciało to może być wizualizowane przy użyciu
zestawów ultraView Universal DAB Detection Kit (Cat. No. 760-500/05269806001) lub
iView DAB Detection Kit (760-091/05266157001). Dodatkowe informacje można znaleźć
w ulotce dołączonej do opakowania zestawu do detekcji.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
6.
7.
8.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego.
W tym preparacie jako konserwant zastosowano ProClin 300. Został on uznany
za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie. Podczas
pracy z produktem należy stosować środki ostrożności w uzasadnionym stopniu.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować
odzież i rękawice ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków
ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody.
Skażenie mikrobiologiczne odczynników może skutkować otrzymaniem
nieprawidłowych wyników.
W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących
zagrożeń na stronie www.ventana.com.
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
VENTANA anti-p63 (4A4) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej na 50 testów.
Jeden dozownik 5 ml VENTANA anti-p63 (4A4) zawiera w przybliżeniu 0,7 μg przeciwciała
monoklonalnego myszy.
2016-05-09
FT0700-410l
1/4
1007911PL Rev D
PROCEDURA BARWIENIA
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania
w urządzeniach do barwienia VENTANA BenchMark XT lub BenchMark ULTRA razem
z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Opis zalecanego protokołu
wybarwiania zawierają Tabela 1 i Tabela 2.
Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, użytkownik jest
jednak zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika.
Parametry procesów zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedury barwienia immunohistochemical znajduje się w ulotce dołączonej
do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA.
Niniejsze przeciwciało zostało zoptymalizowane do 16-minutowej inkubacji w urządzeniu
BenchMark XT w połączeniu z zestawem do detekcji ultraView Universal DAB Detection
Kit, jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych
z zastosowaniem tego odczynnika.
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1, standardowe
Enzym (Protease)
Niewymagane
Przeciwciało (pierwotne)
Urządzenie BenchMark XT,
16 minut, 37 °C
Urządzenie BenchMark ULTRA,
20 minut, 36 °C
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Przeprowadzono badania barwienia preparatem pod kątem jego swoistości, czułości
i powtarzalności. Wyniki tych badań zawierają Tabela 3 i Tabela 4 oraz rozdział
Powtarzalność.
Swoistość
Tabela 3. Swoistość przeciwciała VENTANA anti-p63 (4A4) oceniano na podstawie
badania próbek tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie.
Tabela 1. Zalecany protokół barwienia dla przeciwciała VENTANA anti-p63 (4A4)
z użyciem zestawu ultraView Universal DAB Detection Kit na urządzeniach
BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA.
Rodzaj procedury
CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Tkanka
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Mózg
0/3
Grasica
2/3
Móżdżek
0/3
Szpik kostny
0/3
Nadnercze
0/3
Mezotelium i płuco
0/13
Jajnik
0/3
Serce
0/3
0/3
Przełyk
1/3
0/3
Tkanka
Trzustka
Przytarczyce
Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla przeciwciała VENTANA anti-p63 (4A4)
z użyciem zestawu iVIEW DAB Detection Kit na aparacie BenchMark XT.
0/3
Żołądek
Przysadka
0/3
Jelito cienkie
0/3
Jądroa
2/3
Okrężnica
0/3
Tarczyca
0/3
Wątroba
0/3
Śliniankaa
3/3
0/3
Sutek
18/18
Rodzaj procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Śledziona
0/3
Nerka
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1, standardowe
Migdałek
3/3
Gruczoł krokowy
Endometrium
0/3
Szyjka macicy
3/3
Enzym (Protease)
Niewymagane
Przeciwciało (pierwotne)
Urządzenie BenchMark XT, 16 minut,
37 °C
Mięśnie szkieletowe
0/3
Skóra
3/3
Nerwy (nieliczne)
0/3
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
a.
TKANKA DO DODATNIEJ PRÓBY KONTROLNEJ
Przykładem dodatniej kontroli tkankowej dla tego przeciwciała jest prawidłowy gruczoł
krokowy i prawidłowy migdałek.
INTERPRETACJA WYBARWIENIA / OCZEKIWANE WYNIKI
Wzór barwienia komórek dla VENTANA anti-p63 (4A4) jest jądrowy.
FT0700-410l
Barwienie ogniskowe
Czułość
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między
poszczególnymi urządzeniami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może
być wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji przeciwciała pierwotnego i kondycjonowania
komórek (cell conditioning) lub ich wstępnej obróbki proteazą, zależnie od próbki,
zastosowanej metody detekcji i preferencji użytkownika. Więcej informacji na temat
zmiennych związanych z utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry
Principles and Advances” (Podstawy i postępy immunohistochemii).14
2016-05-09
15/15
2/4
Tabela 4. Czułość przeciwciała VENTANA anti-p63 (4A4) określono poprzez badanie
utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie próbek tkanek nowotworowych.
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Glejaka
1/1
Oponiak atypowy
1/1
Wyściółczak
0/1
Skąpodrzewiak
0/1
Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty jajnika
0/1
Śluzowy gruczolakorak brodawkowaty jajnika
0/1
Rak z komórek wysp trzustki (wyspiak)
0/1
1007911PL Rev D
Nowotwór
Gruczolakorak trzustki
Nasieniak
Rak zarodkowy
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
1/1
Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości
0/1
0/1
Kostniakomięsak
0/1
0/1
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
Rak rdzeniowy tarczycy
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
0/1
Rak brodawkowaty tarczycy
0/1
Hiperplazja sutka
3/3
Chłoniak rozlany z limfocytów B
0/1
Rak zrazikowy sutka in situc
3/3
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca
0/1
Rak przewodowy sutka in situc
8/9
Rak płaskonabłonkowy płucab
131/150
Naciekowy rak przewodowy sutka
2/9
Gruczolakorak płucab
12/116
Naciekowy rak zrazikowy sutka
0/8
1/1
Rak wewnątrzprzewodowy sutka
0/1
Rak płaskonabłonkowy przełyku
a.
b.
c.
Barwienie ogniskowe.
Niektóre przypadki wykazywały barwienie ogniskowe.
Barwienie pozytywne prawidłowych komórek mięśniowo-nabłonkowych.
Gruczolakorak przełyku
0/1
Gruczolakorak śluzowy żołądka
0/1
Gruczolakorak przewodu pokarmowego
0/3
Powtarzalność
Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST)
0/3
Rak wątrobowokomórkowy
0/1
Wątrobiak zarodkowy
0/1
Rak jasnokomórkowy nerek
0/1
Zakończone badania powtarzalności dla VENTANA anti-p63 (4A4) wykazały:

Odtwarzalność wyników między partiami przeciwciał.

Odtwarzalność wyników w jednym badaniu i między badaniami
z zastosowaniem urządzenia BenchMark XT.

Odtwarzalność wyników w obrębie platformy przy użyciu urządzenia
BenchMark XT oraz urządzenia BenchMark ULTRA.

Odtwarzalność wyników między platformami za pomocą urządzeń BenchMark
XT i BenchMark ULTRA.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
Gruczolakorak gruczołu krokowego
Mięsak gładkokomórkowy gruczołu krokowego
Rozrost gruczołu krokowego
1/113
0/1
49/50
PIŚMIENNICTWO
1.
Rak nabłonka dróg moczowych cewki moczowej gruczołu
krokowego
1/1
Mięśniak gładkokomórkowy
0/1
2.
Rak gruczołowy endometrium
0/1
3.
Rak jasnokomórkowy endometrium
0/1
Rak płaskonabłonkowy macicy
1/2
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowya
1/1
Czerniak złośliwy odbytu
0/1
Rak komórek podstawnych skóry
1/1
Rak płaskonabłonkowy skóry
1/1
Nerwiakowłókniak
0/1
Nerwiak zarodkowy przestrzeni zaotrzewnowej
0/1
Międzybłoniak złośliwy nabłonkowy
0/1
Złośliwy chłoniak rozlany
2/3
Chłoniak Hodgkina (ziarnica złośliwa)
0/1
Rak nabłonka dróg moczowych pęcherza
1/1
2016-05-09
FT0700-410l
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
3/4
Yang A, Kaghad M, Wang Y, et al. p63, a p53 homolog at 3q27-29, encodes
multiple products with transactivating, death-inducing, and dominant-negative
activities. Mol Cell. 1998;2:305-16.
Grisanzio C, Signoretti, S. p63 in Prostate Biology and Pathology. J Cell Biochem.
2008;103:1354-1368.
Yang A, Schweitzer R, Sun D, et al. p63 is essential for regenerative proliferation in
limb, craniofacial and epithelial development. Nature. 1999;398:714-718.
Signoretti S, Waltregny D, Dilks J, et al. p63 is a prostate basal cell marker and is
required for prostate development. Am J Pathol. 2000;157:1769-1775.
Wu HH, Lapkus O, Corbin M. Comparison of 34βE12 and p63 in 100 consecutive
prostate carcinoma diagnosed by needle biopsies. Appl Immunohistochem Mol
Morphol. 2004;12:285-289.
Shah RB, Zhou M, LeBlanc M, et al. Comparison of the basal cell-specific markers,
34βE12 and p63, in the diagnosis of prostate cancer. Am J Surg Pathol.
2002;26:1161-1168.
Weinstein MH, Signoretti S, Loda M. Diagnostic utility of immunohistochemical
staining for p63, a sensitive marker of prostatic basal cells. Mod Pathol.
2002;15:1302-1308.
Harton AM, Wang HH, Schnitt SJ, et al. P63 immunocytochemistry improves
accuracy of diagnosis with fine-needle aspiration of the breast. Am J Clin Pathol.
2007;128:80-85.
Camilo R, Capelozzi VL, Siqueira SA, et al. Expression of p63, keratin 5/6, keratin 7,
and surfactant-A in non–small cell lung carcinomas. Human Pathol. 2006;37: 542–
546.
Kargi A, Gurel D, Tuna B. The diagnostic value of TTF-1, CK 5/6, and p63
immunostaining in classification of lung carcinomas. Appl Immunohistochem Mol
Morphol. 2007;15:415-420.
1007911PL Rev D
11.
12.
13.
14.
Tacha D, Yu C, Bremer R, et al. A 6-antibody panel for the classification of lung
adenocarcinoma versus squamous cell carcinoma. Appl Immunohistochem Mol
Morphol. 2012;20:201-207
Mukhopadhyay S, Katzenstein A-LA. Subclassification of non-small cell lung
carcinomas lacking morphologic differentiation on biopsy specimens: Utility of an
immunohistochemical panel containing TTF-1, Napsin A, p63, and CK5/6. Am J
Surgical Pathol. 2011;35:15–25.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy
Roche.
Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli.
© 2016 Ventana Medical Systems, Inc.
DANE KONTAKTOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
2016-05-09
FT0700-410l
4/4
1007911PL Rev D