anti-EZH2 (SP129) Rabbit Monoclonal Primary Antibody
Transkrypt
anti-EZH2 (SP129) Rabbit Monoclonal Primary Antibody
anti-EZH2 (SP129) Rabbit Monoclonal Primary Antibody 790-4651 06522858001 50 PRZECHOWYWANIE Po otrzymaniu preparat nieużywany przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać. W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i trwałości przeciwciała po każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce w pozycji pionowej. Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie należy stosować odczynnika po upływie terminu ważności. PRZYGOTOWANIE PRÓBKI PRZEZNACZENIE Przeciwciała Anti-EZH2 (SP129) Rabbit Monoclonal Primary Antibody (anti-EZH2 (SP129)) są skierowane przeciwko ludzkiemu białku EZH2, które ulega ekspresji w komórkach rakowych i limfocytach. Przeciwciało to charakteryzuje jądrowy wzór barwienia. Może być ono stosowane pomocniczo w rozpoznawaniu raka Rysunek 1. Odczyn jądrowy przeciwciała gruczołu krokowego, raka sutka i raka Anti-EZH2 (SP129) tkanki migdałków. pęcherza moczowego. Przeciwciało jest przeznaczone do jakościowego barwienia skrawków tkankowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa w połączeniu z badaniem histopatologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami kontrolnymi. To przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem stosowania zestawu do detekcji firmy VENTANA i automatu do barwienia VENTANA BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10% obojętna, zbuforowana formalina.5 Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu. Zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli dodatniej i ujemnej przy badaniu nieznanych preparatów. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. 2. 3. 4. Białko EZH2 (enhancer of zeste homolog 2) należy do grupy białek Polycomb (PcG)1, 5. które odgrywają ważną rolę w regulacji transkrypcji poprzez modyfikację nukleosomów, remodeling chromatyny i interakcję z innymi czynnikami transkrypcji. 6. Zakłócenie ekspresji białka EZH2 może prowadzić do rozregulowania genów, istotnych dla przejścia G2-M.2,3 W wielu przypadkach nowotworów takich jak rak prostaty, rak sutka 7. i rak pęcherza moczowego, wykazano amplifikację białka EZH2, co może przyczynić się do onkogenezy.4 8. DOSTARCZANY ODCZYNNIK Preparat Anti-EZH2 (SP129) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do przeprowadzenia 50 badań. Jeden dozownik anti-EZH2 (SP129) o pojemności 5 ml zawiera około 79,5 μg króliczego przeciwciała monoklonalnego. Przeciwciała są rozcieńczone w 0,05 M buforze Tris-HCL z dodatkiem 1% białka nośnikowego i konserwantu ProClin 300 w stężeniu 0,10%. Całkowite stężenie białka w odczynniku wynosi około 10 mg/ml. Stężenie swoistego przeciwciała wynosi około 15,9 μg/ml. Anti-EZH2 (SP129) jest rekombinowanym króliczym przeciwciałem monoklonalnym, otrzymywanym jako oczyszczony supernatant z hodowli komórkowej. Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA, dołączonej do opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: (1) Zasady przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia. Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego. W tym preparacie zastosowano jako konserwant ProClin 300. Został on uznany za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie. Podczas pracy z produktem należy stosować środki ostrożności w uzasadnionym stopniu. Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować odzież i rękawice ochronne. Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody. Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników ze względu na możliwość nieprawidłowych wyników. W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy skontaktować się z władzami lokalnymi lub krajowymi. Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących zagrożeń na stronie www.ventana.com. PROCEDURA BARWIENIA Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w urządzeniach do barwienia VENTANA BenchMark XT lub BenchMark ULTRA razem z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły barwienia zawiera Tabela 1, Tabela 2 i Tabela 3. Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika. Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi aparatu. Więcej informacji na temat procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA. MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA ani elementów pomocniczych, takich jak dodatnie i ujemne kontrolne preparaty tkankowe. Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne. 2015-11-10 FT0700-410k 1/3 1011187PL Rev D Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika anti-EZH2 (SP129) z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzeniami BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA Rodzaj procedury Metoda Przeciwciało to może wykazywać słaby odczyn cytoplazmatyczny komórek mięśniowych w tkankach nowotworów gruczołu krokowego, co nie utrudnia interpretacji swoistego barwienia. Odparafinowanie Wybrana CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA Kondycjonowanie komórek (odsłanianie antygenu) Cell Conditioning 1, Standard Przeciwciała (pierwotne) Urządzenie BenchMark XT 32 minuty, 37°C Urządzenie BenchMark ULTRA 32 minuty, 36°C Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty Przeprowadzono badania barwienia preparatem anti-EZH2 (SP129) z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzeń BenchMark ULTRA pod kątem swoistości, czułości i powtarzalności. Wyniki zamieszczono w Tabeli 4 i Tabeli 5 oraz w sekcji Powtarzalność. Swoistość Tabela 4. Swoistość preparatu anti-EZH2 (SP129) określono poprzez badanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie próbek zdrowych tkanek. Liczba dodatnich / wszystkich przypadków Tkanka Liczba dodatnich / wszystkich przypadków Przysadka 0/3 Przełyk 2/3 Metoda Jądra 3/3 Żołądek 3/3 Tarczyca 0/3 Jelito cienkie 3/3 Okrężnica 3/3 Tkanka Tabela 2. Zalecane protokoły barwienia dla produktu anti-EZH2 (SP129) z użyciem zestawu do detekcji i VIEW DAB Detection Kit i urządzenia BenchMark XT. Rodzaj procedury Odparafinowanie Wybrana Kondycjonowanie komórek (odsłanianie antygenu) Cell Conditioning 1, Standard Przeciwciała (pierwotne) Urządzenie BenchMark XT 16 minut, 37°C Amplification Kit Wybrana Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty Sutek Tabela 3. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika anti-EZH2 (SP129) z użyciem zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit oraz urządzenia BenchMark ULTRA. Rodzaj procedury Metoda Odparafinowanie Wybrana Kondycjonowanie komórek (odsłanianie antygenu) Cell Conditioning 1, 64 minutes Peroxidase Inhibitor przed przeciwciałem pierwotnym Wybrana Przeciwciała (pierwotne) Urządzenie BenchMark ULTRA 32 minuty, 36°C Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty 14/36 Śledziona 3/3 Wątroba 0/3 Migdałki 3/3 Ślinianka 0/1 Endometrium 1/3 Nerka 1/3 Mięśnie szkieletowe 0/3 Gruczoł krokowy 1/11 Nerwy (nieliczne) 0/3 Szyjka macicy 1/3 Grasica 3/3 Skóra 3/3 Szpik kostny 3/3 Mezotelium i płuco 0/3 Płuco 0/3 Pęcherz moczowy 0/8 Serce 0/3 Czułość Tabela 5. Czułość preparatu anti-EZH2 (SP129) oceniano na podstawie badania próbek tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie. Nowotwór Liczba dodatnich / wszystkich przypadków Glejak 1/1 Oponiak atypowy 1/1 Wyściółczak złośliwy 1/1 Skąpodrzewiak złośliwy 1/1 Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty 1/1 Przykładem dodatniej kontroli tkankowej dla tego przeciwciała są migdałki. Śluzowy gruczolakorak brodawkowaty 1/1 INTERPRETACJA WYBARWIENIA/OCZEKIWANE WYNIKI Rak z komórek wysp trzustki (wyspiak) 0/1 Przeciwciała anti-EZH2 (SP129) dają odczyn jądrowy. Gruczolakorak trzustki 1/1 Nasieniak 1/1 Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między poszczególnymi aparatami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może być wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji podstawowego przeciwciała i kondycjonowania komórek (cell conditioning) lub ich wstępnej obróbki proteazą, zależnie od próbki, zastosowanej metody detekcji i preferencji użytkownika. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry Principles and Advances” (Podstawy i postępy immunohistochemii).6 DODATNIA KONTROLA TKANKOWA 2015-11-10 FT0700-410k 2/3 1011187PL Rev D Rak zarodkowy 1/1 Rak rdzeniasty tarczycy 0/1 Odtwarzalności wyników w jednym badaniu i między badaniami z zastosowaniem aparatu BenchMark XT. • Odtwarzalności wyników w obrębie platformy przy użyciu urządzenia BenchMark XT oraz urządzenia BenchMark ULTRA. • Odtwarzalności wyników między platformami pomiędzy urządzeniami BenchMark XT i BenchMark ULTRA. Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy. Rak brodawkowaty 0/1 PIŚMIENNICTWO Rak wewnątrzprzewodowy sutka 2/2 1. Nowotwór Inwazyjny rak przewodowy 44/46 Chłoniak rozlany z limfocytów B 1/1 Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca 1/1 Rak płaskonabłonkowy płuca 1/1 Gruczolakorak płuca 1/1 Rak płaskonabłonkowy przełyku 1/1 Gruczolakorak przełyku 1/1 Śluzowe gruczolakoraki żołądka 1/1 Gruczolakorak przewodu pokarmowego 3/3 Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST) 2/3 Rak wątrobowokomórkowy 0/1 Wątrobiak zarodkowy 1/1 Rak jasnokomórkowy nerek 0/1 Rak gruczołowy gruczołu krokowego 2. 3. 4. 5. 6. 0/1 Rak gruczołowy endometrium 1/1 Rak jasnokomórkowy endometrium 1/1 Rak płaskonabłonkowy macicy 2/2 Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy 1/1 Czerniak złośliwy odbytu 0/1 Rak podstawnokomórkowy 1/1 Rak płaskonabłonkowy 1/1 Nerwiakowłókniak 0/1 Zwojak złośliwy 1/1 Międzybłoniak złośliwy nabłonkowy 1/1 Cardoso C, Mignon C, et al. The human EZH2 gene: genomic organisation and revised mapping in 7q35 within the critical region for malignant myeloid disorders. Eur J Hum Genet. 2000;8:174-180. Kleer CG, Cao Q, et al. EZH2 is a marker of aggressive breast cancer and promotes neoplastic transformation of breast epithelial cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100:11606-11611. Bachmann IM, Halvorsen OJ, et al. EZH2 expression is associated with high proliferation rate and aggressive tumor subgroups in cutaneous melanoma and cancers of the endometrium, prostate, and breast. J Clin Oncol. 2006;24:268-273. Tong ZT, Cai MY et al. EZH2 supports nasopharyngeal carcinoma cell aggressiveness by forming a co-repressor complex with HDAC1/HDAC2 and Snail to inhibit E-cadherin. Oncogene. 2011;1-12. Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009. Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002. WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy Roche. Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli. © 2015 Ventana Medical Systems, Inc. DANE KONTAKTOWE 82/101 Mięśniak gładkokomórkowy Rak przejściowokomórkowy • Liczba dodatnich / wszystkich przypadków Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany 37/38 Rak z komórek nabłonka płaskiego pęcherza moczowego 1/1 Gruczolakorak błony śluzowej pęcherza moczowego 1/1 Powtarzalność Przeprowadzono badania powtarzalności dla preparatu anti-EZH2 (SP129), w celu określenia: • Odtwarzalności wyników między partiami przeciwciał. 2015-11-10 FT0700-410k 3/3 1011187PL Rev D