FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70 Klon 2F3.2 Ready
Transkrypt
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70 Klon 2F3.2 Ready
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70 Klon 2F3.2 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR653 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70, klon 2F3.2, Ready-to-Use, (Link) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji ZAP-70 w pewnym podzbiorze przewlekłych białaczek limfatycznych (1, 2). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Podsumowanie i wyjaśnienie ZAP-70 (białko o masie 70 kDa skojarzone z receptorem ζ) to kinaza tyrozynowa z rodziny Syk odgrywająca krytyczną rolę w wyzwalaniu kaskady sygnalizacyjnej w odpowiedzi na stymulację receptorów komórek T (1). Ekspresja tego białka zachodzi głównie w komórkach T i naturalnych komórkach cytotoksycznych (NK) (1-6), jednak jest ono równieŜ wykrywalne w komórkach tucznych i bazofilach (2). Ekspresja ZAP-70 zachodzi równieŜ w prawidłowych komórkach pro/pre B, ale nie w prawidłowych dojrzałych komórkach B (4). Ekspresja ZAP-70 zachodzi w podzbiorze komórek B przewlekłych białaczek limfocytowych (CLL) ściśle skojarzonym z niezmutowaną konfiguracją genów (1-3, 5, 6) obszaru zmiennego łańcucha cięŜkiego Ig (IgVH). Nie jest znana dokładna funkcja ZAP-70 w tym podzbiorze komórek B przewlekłych białaczek limfocytowych (CLL). Niektóre dane wskazują, Ŝe ekspresja ZAP-70 w komórkach białaczki CLL umoŜliwia bardziej skuteczną sygnalizację IgM w komórkach B białaczki CLL, co wyjaśniałoby mechanizm postępowania choroby (5). Ponadto ekspresja ZAP-70 zachodzi w niektórych innych nowotworach z komórek B (1, 6) i z komórek T (6). Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: 2F3.2. Isotyp: IgG2a, kappa. Immunogen Rekombinowane białko ZAP-70 zawierające reszty 1–254 i domeny SH2 ludzkiego białka ZAP-70 (7). Swoistość W teście Western blot lizatów całych komórek jednojądrzastych prawidłowej krwi obwodowej przeciwciała znakowały prąŜek odpowiadający białku ZAP-70 (2). W teście Western blot oczyszczonych lizatów całych komórek białaczki CD19-dodatnich z CCL bez mutacji Ig i z mutacją Ig przeciwciała znakowały prąŜek odpowiadający białku ZAP-70 w próbkach CCL bez mutacji Ig, natomiast w próbkach CLL z mutacją Ig nie stwierdzono prąŜka (2). W teście Western blot lizatów komórek Jurkat (linia komórkowa białaczki limfoblastycznej z komórek T) przeciwciała znakowały prąŜek odpowiadający białku o masie cząsteczkowej 70 kDa (6). W teście Western blot lizatów komórek A431 (linia komórkowa raka) nie zaobserwowano prąŜka (6). Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami. Przechowywanie (117975-002) Dako Denmark A/S Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. IR653/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Procedura barwienia oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja wybarwienia Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują zarówno wzór odczynu cytoplazmatycznego, jak i jądrowego. Charakterystyka działania Tkanki normalne: Przeciwciała dają odczyn w komórkach T tkanek limfoidalnych, takich jak migdałki i tkanki limfoidalne związane z jelitami, jak równieŜ w komórkach innych badanych tkanek, w tym okręŜnicy, nerek, wątroby, trzustki i gruczołu krokowego. Sporadycznie przeciwciała dają odczyn w pęcherzykach cytoplazmatycznych proksymalnych kanalików nerek. Niekiedy występuje odczyn w cytoplazmie komórek nerwowych móŜdŜku i komórek nerwów obwodowych w okręŜnicy. Sporadycznie występuje takŜe odczyn w pęcherzykach cytoplazmatycznych hepatocytów i komórek nabłonka dróg Ŝółciowych w wątrobie oraz w wyspach i przewodach trzustkowych. Oprócz komórek T przeciwciała dają wyraźny odczyn z cytoplazmą komórek nabłonka kanalików dystalnych i zbiorczych w nerkach. Izolowane komórki T w ośrodkach rozmnaŜania migdałków wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast stłoczone komórki T w strefie T wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Tkanki patologiczne: W nowotworach z komórek B przeciwciała dawały odczyn w nowotworowych komórkach B w 34/52 przypadki CLL, 9/29 przypadków chłoniaka Burkitta, 2/7 przypadków chłoniaka limfoblastycznego, 3/36 przypadków chłoniaka z komórek płaszcza, 1/23 przypadki chłoniaka strefy brzeŜnej i 1/45 przypadków chłoniaka rozlanego z duŜych limfocytów B. Nie stwierdzono odczynu w komórkach B w 19 przypadkach chłoniaka typu grudkowego ani w 14 przypadkach chłoniaka Hodgkina (1). W innym badaniu przeciwciała dawały odczyn z nowotworowymi komórkami B w podzbiorze przypadków CLL — zarówno w bioptatach szpiku kostnego, jak i w skrawkach z aspiratów, a takŜe w komórkach jednojądrzastych w zatopionych w parafinie preparatach odwirowanej krwi obwodowej (2). W badaniu róŜnych nowotworów złośliwych pochodzenia krwiotwórczego przeciwciała dawały odczyn z nowotworowymi komórkami T w 45/62 przypadki złośliwych nowotworów z komórek T, ale w 0/41 przypadków ostrej białaczki szpikowej. Przeciwciała dawały odczyn w komórkach Hodgkina tylko w 2/136 przypadków chłoniaka Hodgkina. Spośród złośliwych nowotworów z komórek B przeciwciała dawały odczyn w 12/26 przypadków chłoniaka limfocytarnego drobnokomórkowego, 4/76 przypadków chłoniaka z rozlanego z duŜych komórek B, 1/6 przypadków chłoniaka z komórek płaszcza, 7/24 przypadki ostrej białaczki limfoblastycznej z komórek B/chłoniaka limfoblastycznego. Przeciwciała nie dawały odczynu w nowotworowych komórkach B w 22 przypadkach chłoniaka strefy brzeŜnej, 40 przypadkach chłoniaka typu grudkowego, 6 przypadkach chłoniaka Burkitta, ani w 5 przypadkach chłoniaka limfoplazmatycznego (6). We wszystkich wymienionych badaniach przeciwciała dawały odczyn w prawidłowych komórkach T (1, 2, 6). (117975-002) Dako Denmark A/S IR653/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Carreras J, Villamor N, Colomo L, Moreno C, Cajal S, Crespo M, et al. Immunohistochemical analysis of ZAP70 expression in B-cell lymphoid neoplasms. J Pathol 2005;205;507-13. Wiestner A, Rosenwald A, Barry TS, Wright G, Davis RE, Henrickson SE, et al. ZAP-70 expression identifies a chronic lymphocytic leukemia subtype with unmutated immunoglobulin genes, inferior clinical outcome, and distinct gene expression profile. Blood 2003;101:4944-51. Keating MJ, Chiorazzi N, Messmer B, Damle RN, Allen SL, Rai KR, et al. Biology and Treatment of chronic lymphocytic leukemia [review]. Hematology 2003:153-75. Crespo M, Villamor N, Giné E, Muntañola A, Colomer D, Marafioti T, et al. ZAP-70 expression in normal pro/pre B cells, mature B cells, and in B cell acute lymphoblastic leukemia. Clin. Cancer Res. 2006;12:726-34. Chen L, Apgar J, Huynh L, Dicker F, Giago-McGahan T, Rassenti L, et al. ZAP-70 directly enhances IgM signaling in chronic lymphocytic leukemia. Blood 2005;105:2036-41. Sup SJ, Domiati-Saad R, Kelley TW, Steinle R, Zhao X, Hsi ED. ZAP-70 expression in B-cell hematologic malignancy is not limited to CLL/SLL. Am J Clin Pathol 2004;122:582-7. Iwashima M, Irving BA, van Oers NSC, Chan AC, Weiss A. Sequential interactions of the TCR with two distinct cytoplasmic tyrosine kinases. Science 1994;263:1136-9. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (117975-002) Dako Denmark A/S IR653/PL/MNI/2009.12.04 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17