Opis procedury Ogólne wytyczne do oznaczania cystatyny

Cystatin C
Ogólny opis procedury
Opis procedury
Ogólne wytyczne do oznaczania
cystatyny C w surowicy/osoczu
Informacje ogólne
Przeznaczenie
Opis procedury dotyczy ilościowego oznaczenia cystatyny C w próbkach materiału pochodzenia ludzkiego,
z wykorzystaniem urządzeń, dla których nie istnieją szczegółowe wytyczne (1).
NaleŜy przeprowadzić walidację efektywności procedury na urządzeniu wybranym przez klienta.
Zakres pomiarowy
Około 0,4–7,5 mg/L, w zaleŜności od konkretnej partii kalibratora. Zakres moŜe zostać poszerzony w przypadku
późniejszego zatęŜenia lub rozcieńczenia.
Zakres normy
0,59–1,03 mg/L. Zaleca się wyznaczenie zakresu normy dla lokalnej populacji.
Ustawienia urządzenia
Wytyczne dotyczące programowania urządzenia zamieszczono w punkcie „Sugerowane ustawienia urządzenia..."
na stronie 3.
Odczynniki
Przeciwciało
Bufor reakcyjny
Kalibrator
Kontrole
Rozcieńczalnik
Próbki
Ludzka surowica, osocze z dodatkiem heparyny lub osocze z EDTA.
Stabilne przez 2 dni w temperaturze 2–8 °C.
Stabilne przez co najmniej 3 miesiące w temperaturze –20 °C.
ZamroŜone próbki naleŜy rozmraŜać w temperaturze 37 °C i dobrze wymiesza ć przed wykonaniem oznaczenia.
Kalibrator
Rozcieńczenie standardów wykonuje się automatycznie w urządzeniu, zgodnie z instrukcją lub ręcznie.
Bufor
Bufor jest gotowy do uŜytku. W analizatorze stabilne do 12 tygodni w temperaturze 2–12 °C.
Przeciwciało
Roztwór czynników immunologicznych jest gotowy do uŜytku.
Stabilność w temperaturze 2–8 °C: Patrz Karta specyfikacji i data waŜności na etykiecie.
Stabilność w urządzeniu: 12 tygodni w temperaturze 2–12 °C.
Nazwa
LX004
S2361
X7912
X7913
kodowa
Dako Cystatin C Immunoparticles (ERM-DA471/IFCC Standardized)
Dako Reaction Buffer 9
Dako Cystatin C Calibrator (ERM-DA471/IFCC Standardized)
Dako Cystatin C Control Set (ERM-DA471/IFCC Standardized)
Roztwór NaCl 154 mmol/L (0,9%, stęŜenie wagowo-objętościowe)
Wydajność: 1 mL roztworu czynników immunologicznych umoŜliwia wykonanie oznaczeń dla około 10 kuwet z
wzorcem lub próbką, przy zastosowaniu 100 µL roztworu czynników immunologicznych na test. Przy obliczaniu
wymaganej objętości odczynnika naleŜy wziąć pod uwagę nieuŜyteczną objętość buteleczki.
Stabilność kalibracji
Zaleca się powtarzanie kalibracji co 8 tygodni, po zmianie partii odczynnika, przygotowaniu nowego roztworu
przeciwciał lub w przypadku, gdy jakość wyników spadnie poniŜej poziomu przyjętego w danym laboratorium. NaleŜy
przeprowadzić walidację stabilności kalibracji dla danego urządzenia.
Rozwiązywanie problemów
Jeśli efektywność zestawu nie jest akceptowalna, naleŜy dokonać ponownej kalibracji. Zweryfikować odczynniki i
procedurę. Jeśli problem nie ustępuje, naleŜy skontaktować się z dostawcą urządzenia lub obsługą techniczną
firmy Dako.
(122229-001)
D06212PL_001 30 134.LX004.01/PHC/2011.12 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Cystatin C
Ogólny opis procedury
Przykładowe dane efektywności na urządzeniu Hitachi 917
Czułość
Wartość gęstości optycznej (OD) około 0,50 w urządzeniu Hitachi 917 odpowiada stęŜeniu cystatyny C wynoszącemu
ok. 7,5 mg/L.
Limit detekcji
Szacunkowy limit detekcji wynosi 0,02 mg/L.
Precyzja
Precyzje oznaczono z zastosowaniem ANOVA wyników dla dwóch kontroli i surowic o dwóch róŜnych stęŜeniach
cystatyny C w pięciu seriach, kaŜdej z nową kalibracją, po 6 oznaczeń w kaŜdej serii.
Odchylenie standardowe
(mg/L)
Cystatin C
Wartość
średnia (mg/L)
Próbki
Cystatin C Control 1,
Nr kat. X7913
Cystatin C Control 2,
Nr kat. X7913
Próbka surowicy
ludzkiej z niskim
stęŜeniem
Próbka surowicy
ludzkiej z wysokim
stęŜeniem
W serii
Między
seriami
Razem
Całk. wsp.
zmienności (%)
n
4,39
0,054
0,030
0,062
1,4
36
1,13
0,008
0,016
0,018
1,6
36
0,96
0,008
0,013
0,015
1,6
36
5,21
0,019
0,032
0,037
0,7
36
Dokładność
Przy stosowaniu kontroli Dako Cystatin C Control 1, nr kat. X7913 i Dako Cystatin C Control 2, nr kat. X7913, moŜna
oczekiwać odzyskania 90–110% cystatyny C.
Liniowość
Test jest liniowy w zakresie 0,4–7,5 mg/L.
Bezpieczny zakres
Nie stwierdzono nadmiernego stęŜenia antygenu przy stęŜeniach cystatyny poniŜej 22 mg/L.
Interferencja
Nie stwierdzono interferencji przy stęŜeniach do 5 g/L hemoglobiny, 600 mg/L bilirubiny, 16 g/L intralipidu oraz
1600 IU/mL czynnika reumatoidalnego.
Porównanie metod
Oznaczanie cystatyny C zgodnie z niniejszą procedurą porównano z innymi dostępnymi komercyjnie testami
turbidymetrycznymi. Dane dostępne są na Ŝyczenie.
Piśmiennictwo
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination of
human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab Med
2001;39:1098-1109.
(122229-001)
D06212PL_001 30 134.LX004.01/PHC/2011.12 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Cystatin C
Ogólny opis procedury
Sugerowane ustawienia urządzenia dla ludzkiej cystatyny C
Zalecenia specjalne
A primary wavelength of approximately 546 nm and a secondary
wavelength of approximately 700 nm should be used.
The following reaction mode is recommended:
1. Mixing of (diluted) sample and reaction buffer.
2. Incubation (until stable readings are obtained).
3. Addition of the immunoparticle reagent.
4. Blanking (first reading) immediately after mixing all reagents.
5. Measuring signals during reaction until an end-point is obtained.
Parametr
Suggestion
Light path (mm)
Incubation time (s)
Sample dilution (Dil. factor)
Volume of prediluted sample (µL)
Sample volume (µL) (=Neat)
Diluent+Flush (for Sample+Reag) (µL)
Reaction buffer volume (µL)
PEG-conc. in Reac. buffer (%)
PEG-conc. in incubation volume (%)
Incubation volume (µL)
Antibody dilution (Ab dil. factor)
Volume of diluted antibody (µL)
Antibody volume (µL) (=Neat)
Diluent+Flush (for Antibody) (µL)
Total volume (µL)
Reaction time (s)
Total analysis time (s)
Stosunek
Sample vol.(Neat)
Antibody vol.(Neat)
Relacja
PEG - conc. inincub. vol.(%) * Sample vol.(Neat)
Incub. vol.
Stosunek
Sample vol.(Neat)
Total vol.
PEG-conc. in Total volume (%)
Standardy
10
120
1
5
5
0
385
1
0.987
390
1
85
85
25
500
300
420
0.06
[0.05 - 0.06]
0.013
[0.09 - 0.013]
0.0100
[0.0085 - 0.0105]
0.77
Dilution factor
Std 1 (Highest conc.)
Std 2
Std 3
Std 4
Std 5
Std 6 (Lowest conc.)
1.00
1.43
2.57
5.21
9.35
18.18
[0.70 – 0.80]
fi Relative
conc. factor
1.000
0.700
0.389
0.192
0.107
0.055
[ ] Wskazuje na akceptowalny zakres na róŜnych urządzeniach.
fi Względny współczynnik stęŜenia stosowany do wyliczania względnych stęŜeń (RC(i)) cystatyny C w standardach z konkretnej partii kalibratora
(C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal) .
(122229-001)
D06212PL_001 30 134.LX004.01/PHC/2011.12 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17