Nr kat. IR700

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Muscle Actin
Klon HHF35
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR700
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Muscle Actin, klon HHF35, Ready-to-Use (Link), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne
widentyfikacji nowotworów tkanek miękkich pochodzących z komórek mięśniowych, takich jak leiomyoma (LM),
leiomyosarcoma (LMS) (1) i rhabdomyosarcoma (RMS) (1, 2). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku
barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych,
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Aktyna jest silnie konserwatywnym białkiem występującym w przynajmniej sześciu róŜnych izoformach, które moŜna
rozróŜnić na podstawie sekwencji aminokwasów i punktów izoelektrycznych (1, 3). Jest to jedno z głównych białek
strukturalnych i odgrywa kluczową rolę w skurczu mięśnia, lecz wykazano równieŜ, Ŝe wpływa regulująco na
transdukcję sygnałów, aktywność enzymów i kanałów błonowych, uczestniczy w transkrypcji, transporcie mRNA
translacji oraz transmisji synaptycznej (3).
Aktyna znajduje powszechną ekspresję w wielu komórkach, w tym komórkach mięśni szkieletowych, komórkach
mięśni gładkich, perycytach i komórkach mięśniowo-nabłonkowych (4).
Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: HHF35 (1, 4). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Frakcja białkowa ekstrahowana metodą SDS z ludzkiego miokardium, od przypadków idiopatycznej, przerostowej
stenozy subaortalnej.
Swoistość
W testach Western blot oczyszczonej aktyny z mięśni szkieletowych królika, ekstraktów z aorty małp, macicy, przepony
i serca, przeciwciało znakuje białko o masie cząsteczkowej 42 kDa odpowiadającej aktynie mięśniowej izotypów α i γ
aktyny, lecz nie wykazuje reakcji barwienia z aktyną α ze źródeł niemięśniowych (komórki śródbłonka) (4).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
(119358-001)
Dako Denmark A/S
IR700/PL/SSM/2009.01.20 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą
zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować
się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu
jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka
wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okręŜnicę i język,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Charakterystyka
działania
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Tkanki normalne: W przypadku okręŜnicy, komórki mięśni gładkich blaszki mięśniowej wykazują odczyn z zakresu od
umiarkowanego do silnego. W języku, gruczoły śluzowe/ślinowe wykazują odczyn z zakresu od słabego do
umiarkowanego. W tkankach prawidłowych, przeciwciało znakuje włókna prąŜkowane mięśni szkieletowych, mięśnie
gładkie tętnic, Ŝył i perycyty mniejszych tętnic, błonę mięśniową przewodu pokarmowego, mięsień macicy,
podścielisko stercza, komórki torebkowe kilku narządów miąŜszowych, w tym nerek, wątroby, węzłów chłonnych
śledziony, oraz warstwy komórek mięśniowo-nabłonkowych przewodów i gruczołów sutkowych, jak równieŜ
ekrynowe gruczoły potowe, gruczoły oskrzelowe i ślinianki (1, 4, 7, 5–7). Inne komórki niemięśniowe są
niereaktywne, co dotyczy takŜe tkanki łącznej, komórek nabłonkowych, komórek limfoidalnych, makrofagów,
komórek nerwowych i komórek śródbłonka naczyń (1, 4, 6, 7).
Tkanki patologiczne: W przypadku tkanek patologicznych wykazano, Ŝe przeciwciało jest wiarygodnym markerem
nowotworów tkanek miękkich pochodzących z komórek mięśniowych, takich jak leiomyomas (LM), leiomyosarcomas
(LMS) i rhabdomyosarcomas (RMS), w przypadku których prezentuje wyŜszą czułość niŜ przeciwciała przeciwko
desminie (1). Zostało to potwierdzone przez Schmidta i wsp. (1988) (2), którzy określili, Ŝe 29/30 RMS, w tym
subtypy embrionalne, pęcherzykowe, gronowate i pleomorficzne, niezaleŜnie od stopnia zróŜnicowania wykazywały
odczyn dodatni. Badanie obejmujące 285 dobrze scharakteryzowanych nowotworów tkanek miękkich wykazało, Ŝe
17/17 RMS, 31/32 LMS, 23/23 LM i 3/5 pleomorphic liposarcomas miało odczyn dodatni (5). Większość kłębczaków
równieŜ reagowała z przeciwciałem (5, 8). W przypadku desmoidów sporadyczne komórki dodatnie występowały
9/15 przypadków (5). Podobne wyniki uzyskali równieŜ inni badacze, którzy jako wykazujące barwienie określili 34/35
RMS, 11/22 LMS, 5/6 LM i 4/4 rhabdomyomas (6). Miofibroblasty niektórych zmian, łącznie z tkankami
wykazującymi reakcję z przeciwciałem, gojącymi się ranami i blaszkami miaŜdŜycowymi równieŜ w większości
przypadków reagowały z przeciwciałem (1, 4, 6, 9). Przeciwciała wykorzystano takŜe z powodzeniem, w celu
odróŜnienia nieinwazyjnych (konsekwentnie dodatni odczyn na aktynę) od inwazyjnych nowotworów sutka (ujemny
odczyn na aktynę) (7). Mięsaki z komórek niemięśniowych i komórki nowotworowe raków, czerniaków i chłoniaków
są niereaktywne (1, 5).
(119358-001)
Dako Denmark A/S
IR700/PL/SSM/2009.01.20 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Tsukada T, McNutt MA, Ross R, Gown A. HHF35, A muscle-actin-specific monoclonal antibody. II. Reactivity in
normal, reactive, and neoplastic human tissues. Amer J Pathol 1987;127:389-402.
2.
Schmidt R, Cone R, Haas J, Gown A. Diagnosis of rhabdomyosarcomas with HHF35, a monoclonal antibody
directed against muscleactins. Amer J Pathol 1988;131:19-28.
3.
Khatalina SY. Functional specificity of actin isoforms. Inter Rev Cytol 2001;202:35-98.
4.
Tsukada T, Tippens D, Gordon D, Ross R, Gown A. HHF35, a muscle-actin specific monoclonal antibody. I.
Immunocytochemical and biochemical characterization. Amer J Pathol 1987;126:51-60.
5.
Miettinen M. Antibody specific to muscle actins in the diagnosis and classification of soft tissue tumors. Amer J
Pathol 1988;130:205-15.
6.
Rangdaeng S and Truong LD. Comparative immunohistochemical staining for desmin and muscle-specific actin.
Amer J Clin Pathol1991;96:32-45.
7.
Gottlieb C, Raju U, Greenwald KA. Myoepithelial cells in the differential diagnosis of complex benign and
malignant breast lesions: An immunohistochemical study. Mod Pathol 1990;3:135-40.
8.
Porter P, Bigler S, McNutt M, Gown A. The immunophenotype of hemangiopericytomas and glomus tumors,
with special reference to muscle protein expression: An immunohistochemical study and review of the literature.
Mod Pathol 1991;4:46-52.
9.
Gown AM, Tsukada T, Ross R. Human atherosclerosis II. Immunocytochemical analysis of the cellular
composition of humanatherosclerotic lesions. Amer J Pathol 1986;125:191-207.
Objaśnienie symboli
N ume r ka ta log owy
Tempe ratura
prze chow ywan ia
Zu Ŝyć p rzed
Wyró b medyczny do
d ia gno styki in vi tro
Zawa rto ść w ysta rcza na
<n> testów
Produ cent
S prawd zić w instrukcj i
sto sowa nia
Nu mer serii
(119358-001)
Dako Denmark A/S
IR700/PL/SSM/2009.01.20 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17