Nr kat. IR624

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Hepatocyte
Klon OCH1E5
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR624
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Hepatocyte, klon OCH1E5, Ready-to-Use, (Link), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało barwi hepatocyty, a
ponadto moŜe być uŜywane w diagnostyce róŜnicowej raków z komórek wątrobowych (1), odróŜnianiu raków
jasnokomórkowych wątroby od innych złośliwych nowotworów jasnokomórkowych (2), odróŜnianiu wątrobiaka
zarodkowego w szczególności typu embrionalnego od innych nowotworów drobnokomórkowych wieku
dziecięcego (3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania
morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: OCH1E5 (4). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Utrwalony w formalinie preparat z wątroby ludzkiej przeznaczonej do przeszczepu, który nie powiódł się z powodu
mechanicznego uszkodzenia narządu (4).
Swoistość
Przeciwciało barwi antygen, który wydaje się być zlokalizowany w mitochondrialnej frakcji zhomogenizowanych
tkanek wątroby (4).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek i materiały
dodatkowe
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
(117562-002)
Dako Denmark A/S
IR624/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
urządzeniu Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy
skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link)
(nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse
(Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Hepatocyty barwione przeciwciałem wykazują wyrazisty ziarnisty odczyn cytoplazmatyczny, który moŜe przyjmować
kształt pierścienia lub rozlaną postać w całej cytoplaźmie hepatocytu bez wzmocnienia w obrębie kanalików (4).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: W wątrobie przeciwciało barwi hepatocyty. W wątrobie prawidłowej nie występują Ŝadne
preferencje dotyczące strefy, ale moŜliwe jest osłabienie odczynu w ściśniętych hepatocytach znajdujących się w
pobliŜu guzów. Nie zaobserwowano barwienia w drogach Ŝółciowych ani komórkach niemiąŜszowych. Niemal w
Ŝadnej z wymienionych tkanek nie stwierdzono odczynu dodatniego: skóra, mięśnie gładkie i szkieletowe,
międzybłonek, węzły chłonne, śledziona, płuca, sutek, przełyk, Ŝołądek, jelita, trzustka, drogi Ŝółciowe, nerka,
pęcherz moczowy, nadnercza, gruczoł krokowy, śluzówka macicy i jajnik. Do rzadkich przypadków naleŜy
ogniskowe, ale często silne barwienie błony śluzowej jelita cienkiego w niewielkiej części przypadków. (4).
Hepatocyty wykazują odczyn umiarkowany do silnego.
Tkanki nieprawidłowe: 37/38 raków wątroby typu podstawowego (HCC) wykazuje odczyn z przeciwciałem. W 4 z
wymienionych powyŜej raków odczyn wykazywały tylko nieliczne komórki. Brak odczynu stwierdzono w przypadku
HCC typu stwardnieniowego. Zaobserwowano znaczne róŜnice między obszarami barwienia w dodatnich HCC.
4 z 5 przerzutów HCC wykazało odczyn dodatni (4). Testy panelu 10 poprzednio zdiagnozowanych raków
jasnokomórkowych wątroby (HCC-CC) i 10 raków jasnokomórkowych nerek (RCC-CC) z przeciwciałami wykazały
swoistość rzędu 100% i czułość 90% w odróŜnianiu HCC-CC od RCC-CC (2). W innym badaniu (1), które objęło
65 guzów wątroby i 2 guzy niewątrobowe z pacjentów, u których udokumentowano guzy wątroby, przeciwciało
wykazało czułość rzędu 82% i swoistość rzędu 90% w wykrywaniu nowotworów z komórek wątroby (1). Przeciwciało
dało odczyn dodatni w 12/12 przypadków wątrobiaków zarodkowych, a odczyn ujemny w 26/26 przypadkach
wybranych raków wieku dziecięcego, do których naleŜało 5 guzów zarodkowych, 4 obwodowe guzy
neuroektodermalne/mięsaki Ewinga, 3 mięśniakomięsaki prąŜkowane, 5 nerwiaków, 2 guzy typ rhabdoid, 3 chłoniaki
i 4 guzy Wilmsa (3). W 6 z 7 przypadków gruczolaka wątrobowego z przewodu pokarmowego przeciwciało dało
odczyn ogniskowy. Te rzadkie nowotwory wykazywały takŜe dodatni odczyn z alfa-1-fetoproteiną i CEA (5).
Piśmiennictwo
1.
Minervini MI, Demetris AJ, Lee RG, Carr BI, Madariaga J, Nalesnik MA. Utilization of hepatocyte-specific
antibody in the immunocytochemical evaluation of liver tumors. Mod Pathol 1997; 10:686–92.
2.
Murakata LA, Ishak KG, Nzeako UC. Clear cell carcinoma of the liver: a comparative immunohistochemical
study with renal clear cell carcinoma. Mod Pathol 2000;13:874–81.
3.
Fasano M, Theise ND, Nalesnik M, Goswami S, Garcia de Davila MT, Finegold MJ, et al. Immunohistochemical
evaluation of hepatoblastomas with use of the hepatocyte-specific marker, hepatocyte paraffin 1, and the
polyclonal anti-carcinoembryonic antigen. Mod Pathol 1998;11:934–8.
4.
Wennerberg AE, Nalesnik MA, Coleman WB. Hepatocyte paraffin 1: a monoclonal antibody that reacts with
hepatocytes and can be used for differential diagnosis of hepatic tumors. Am J Pathol 1993; 143:1050–4.
5.
Maitra A, Murakata LA, Albores-Saavedra J. Immunoreactivity for hepatocyte paraffin 1 antibody in hepatoid
adenocarcinomas of the gastrointestinal tract. Am J Clin Pathol 2001; 115:689–94.
(117562-002)
Dako Denmark A/S
IR624/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117562-002)
Dako Denmark A/S
IR624/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17