CHOLESTEROL-HDL

CHOLESTEROL-HDL
BIOLABO REAGENTS
Metoda bezpośrednia
www.biolabo.fr
Odczynniki do ilościowego oznaczania
cholesterolu-HDL w ludzkiej surowicy lub osoczu
BIOLABO
PRODUCENT:
NR KAT. # 90206 :
NR KAT. # 90406 :
BIOLABO SA,
200 testów
(R1 : 2 x 30 ml, R2 : 2 x 10 ml)
400 testów
(R1 : 2 x 60 ml, R2 : 2 x 20 ml)
02160, Maizy, France
Wyłączny dystrybutor: AQUA-MED
Tel. : 0-42 636 38 02, 636 37 51
DO DIAGNOSTYKI IN VITRO
Fax : 0-42 637 02 96
ZNACZENIE KLINICZNE (1) (3)
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Zasadnicza rola lipoprotein o wysokiej gęstości (HDL) w metaboliźmie lipidów
to pobieranie i transport cholesterolu z tkanek obwodowych do wątroby przez
proces znany jako odwrotny transport cholesterolu. Niskie stężenia
cholesterolu frakcji HDL są silnie związane ze zwiększonym ryzykiem
choroby wieńcowej serca i miażdżycy tętnic. Z tego powodu oznaczanie
surowiczego cholesterolu HDL jest użytecznym parametrem w identyfikacji
pacjentów
wysokiego
ryzyka.
Zwiększony
stosunek
cholesterol
całkowity/cholesterol-HDL jest istotnym wskaźnikiem zwiększonego ryzyka
miażdżycy.
Odczynniki BIOLABO są przeznaczone do profesjonalnego użytku w
diagnostyce in vitro.
• Używać odpowiedniej ochrony (fartuch, rękawiczki, gogle).
• Nie pipetować ustami.
• Zanieczyszczoną skórę czy zanieczyszczone oczy przemyć starannie
dużą ilością wody i zasięgnąć porady lekarza.
• Odczynniki zawierają azydek sodowy (stężenie < 0.1%) , który może
reagować z miedzią i ołowiem kanalizacji. Wylewając spłukać dużą
ilością wody.
• Pozostałe informacje są zawarte w Karcie Charakterystyki Substancji
Niebezpiecznej
• Odpady: Przestrzegać przepisów obowiązujący w danym kraju.
Wszystkie próbki muszą być traktowane jako potencjalnie zakaźne –
zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej stosować odpowiednie
środki ostrożności. Przestrzegać przepisów obowiązujących w danym
kraju.
ZASADA
Metoda
selektywnego
detergentu
z
akceleratorem.
Metoda
bezpośrednia, bez uprzedniego opracowywania próbki. Podczas
pierwszej fazy, cząsteczki LDL, VLDL i chylomikronów uwalniają wolny,
nie pochodzący z frakcji HDL cholesterol, który poddany enzymatycznej
reakcji produkuje nadtlenek wodoru rozkładany następnie z udziałem
POD DSBmT. Na tym etapie nie dochodzi do utworzenia żadnego
barwnego związku.Podczas drugiego etapu, swoisty detergent
rozpuszcza cholesterol-HDL. W połączeniu z działaniem CO i CE, POD
+ 4-AAP rozwija się barwna reakcja, która jest proporcjonalna do
stężenia cholesterolu-HDL. Absorbancja jest mierzona w 600 nm.
LDL = Liporoteiny o niskiej gęstości
HDL =Lipoproteiny o wysokiej gęstości
VLDL = Liporoteiny o bardzo niskiej gęstości POD =
Peroksydaza
CO =
Oksydaza cholesterolowa
CE = Esteraza cholesterolowa
4-AAP = 4-Aminoantipiryna
AAO = Oksydaza askorbinianowa
DSBmT = sól sodowa N,N-bis (4-sufobutylo)-m-toluidyny
ODCZYNNIK R1
Bufor Good’a
CO
POD
DSBmT
Akcelerator
Konserwant
R2
< 1000 UI/l
< 1300 ppg UI/l
< 1 mmol/l
< 1 mmol/l
< 0.06 %
ODCZYNNIK R2
Bufor Good’a
CE
4-AAP
Detergent
Stabilizator
AAO
Konserwant
Próbki powinny być pobrane po minimum 12 h–14 h głodzeniu.
Osocze : pobrane na EDTA lub heparynę sodową/litową.
Odwirować lub oddzielić osocze od krwinek czerwonych tak szybko jak
to jest możliwe (w ciągu 3 godzin).
Surowica : Odwirować i oddzielić surowicę od krwinek czerwonych tak
szybko jak to jest możliwe (w ciągu 3 godzin).
Cholesterol-HDL w próbce jest trwały przez :
• 1 do 3 dni w 2-8°C
• 1 miesiąc w - 20°C.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
R1
POBIERANIE I OPRACOWANIE PRÓBKI (4)
< 1500 UI/l
< 1 mmol/l
<2 %
< 0.15 %
< 3000 UI/l
< 0.06 %
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKA
Odczynniki są gotowe do użycia.
TRWAŁOŚĆ I PRZECHOWYWANIE
Przechowywać w 2-8°C i chronić przed dostępem światła
• Nie otwarte odczynniki są trwałe do daty ważności na etykiecie.
• Po otwarciu: odpipetować potrzebną ilość i zamknąć butelkę.
Odczynnik R1 i R2 są trwałe minimum 3 miesiące.
Pozbyć się odczynnika, jeśli jest mętny, lub jeśli ślepa odczynnikowa >
0.050.
INTERFERENCJE
(5)
Stężenia testowane (mg/dl) bez istotnej interferencji (± 10%) :
Bilirubina bezpośrednia : 60
Bilirubina całkowita :
60
Hemoglobina :
1000
Kwas askorbinowy :
100
Lipemia (Intralipid®) :
1800
Endogenne trigliceridy : 2000
Gamma-globuliny :
5000
NIZBĘDNE NIE DOSTARCZONE MATERIAŁY
1. Podstawowe wyposażenie medycznego laboratorium analitycznego.
2. Kalibrator firmy BIOLABO Cholestrol-HDL nr kat. 95406 (2 x 1 ml) lub
jakikolwiek spójny kalibrator pochodzenia ludzkiego.
3. Normalna i patologiczna surowica kontrolna pochodzenia ludzkiego dla
Cholesterolu-HDL.
Wersja : AT 90406 07 09 2005
KALIBRACJA
PROCEDURA MANULANA
•
•
•
Nie używać wodnych kalibratorów
Doprowadzić odczynniki do temperatury pokojowej. Używać kuwetek
półmikro (dla np. Epoll 20)
Nie używać wodnych kalibratorów.
Używać kalibrator firmy BIOLABO: Cholesterol-HDL, nr kat. 95406
Lub jakiś inny kalibrator pochodzenia ludzkiego spójny z metodą
referencyjną lub materiałem referencyjnym.
Częstotliwość kalibracji zależy od od prawidłowości funkcjonowania
aparatu i trwałości odczynnika.
Zaleca się kalibrację w następujących przypadkach :
1. Przy zmianie butelki odczynnika.
2. Po serwisowaniu aparatu.
3. Jeśli wyniki kontroli są poza zakresem, nawet po użyciu świeżej
surowicy.
Próba:
Odczynnik R1
Ślepa
Kalibrator
Badana
300 µl
300 µl
300 µl
3 µl
Kalibrator
3 µl
Próbka
Dobrze wymieszać, pozostawić na 5 minut w 37°C.
KONTROLA JAKOŚCI
Dodać
Ślepa
Kalibrator
Badana
•
Odczynnik R2
100 µl
100 µl
100 µl
Metrykowane
surowice
kontrolne
pochodzenia
ludzkiego
odwołujące się do tej samej metody (selektywny detergent z
akceleratorem).
•
Program zewnętrznej kontroli jakości.
Zaleca się kontrolowanie w następujących przypadkach :
•
Minimum raz na serię.
•
Minimum raz na 24 godziny.
•
Przy zmianie butelki odczynnika.
•
Po serwisowaniu aparatu.
Jeśli kontrola jest poza zakresem, podjąć następujące działania :
1. Powtórzyć test z tą sama kontrolą.
2. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przygotować świeżą
surowicę kontrolną i powtórzyć test.
3. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, użyć nową butelkę
świeżego kalibratora i powtórzyć test..
4. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, wykalibrować nową butelkę
odczynnika.
5. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, skontaktować się z działem
technicznym BIOLABO lub lokalnym dystrybutorem.
Dobrze wymieszać, pozostawić na 5 minut w 37°C.
Odczytać absorbancję w 600 nm, ew. w 630 nm wobec próby ślepej.
Uwagi :
1. W zależności od użytego aparatu, można modyfikować powyższe
objętości zachowując te same proporcje (np. 400 µl + 4 µl + 135 µl lub
600 µl +6 µl + 200 µl)
2. Procedury na automatyczne analizatory są dostępne na życzenie.
Skontaktować z działem technicznym BIOLABO.
OBLICZENIA
Obliczyć wynik następująco :
C-HDL =
Abs pr. badanej
Abs kalibratora
x Stężenie kalibratora
mg/dl x 0.02586 = mmol/l
WARTOŚCI OCZEKIWANE
(2)
HDL-Cholesterol
mg/dl
mmol/L
Mężczyźni
Kobiety
30 - 70
30 - 85
0.78 – 1.81
O,78 – 2.20
PIŚMIENNICTWO
(1)
Każde laboratorium powinno wyznaczyć swoje własne zakresy wartości
prawidłowych dla populacji, dla której świadczy usługi laboratoryjne .
(2)
(3)
(4)
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA(4)
Wewnątrz
serii
N = 20
Poziom Poziom Poziom
średni wysoki
niski
Między
seriami
N = 40
Poziom Poziom Poziom
niski
średni wysoki
Średnia
mg/dl:
33
51
101
Średnia
mg/dl:
33
50
100
S.D. mg/dl:
0.26
0.26
0.71
S.D. mg/dl:
0.43
0.75
1.1
C.V. % :
0.8
0.5
0.7
C.V. % :
1.3
1.5
1.1
Granica wykrywalności : ok. 2.5 mg/dl.
Czułość dla 100 mg/dl: 0.120 Abs.
Wyniki badania (n = 52) z wyznaczoną metodą porównawczą (DCM) :
BIOLABO Średnia : 58.3 mg/dl
DCM Średnia: 56.3 mg/dl
BIOLABO Zakres : 33.6-133 mg/dl
DCM Zakres : 32-133 mg/dl
BIOLABO = 0.99 (DCM) + 2.81 mg/dl r = 0.996
LINIOWOŚĆ
Reakcja jest liniowa od 2.5 do 200 mg/dl (0.065 do 5.17 mmol/l).
Jeśli powyżej, rozcieńczyć próbkę w proporcji 1 + 1 roztworem soli,
powtórzyć oznaczenie i uwzględnić przy obliczaniu wyniku współczynnik
rozcieńczenia 2. Liniowość zależy od stosunku próbka/odczynnik.
(5)
Badimon L. L., Badimon L., Fuester V., Regression of atherosclerotic lesions
by HDL plasma fraction in the Cholesterol-fed rabbit, Journal of clinical
investigation, (1990), 85, p.1234-1241.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 334-337.
Gotto, A.M., Lipoprotein metabolism and the ethiology of hyperlipidemia,
Hospital Practice, 23 ; Suppl. 1, 4 (1988)
Warnick, G. Russel, Wood, Peter D., National Cholesterol Education
Program Recommendations for Measurement of High-Density Lipoprotein
Cholesterol : Executive Summary, Clinical Chemistry, Vol. 41, No 10, 14271433 (1995)
National Committee for Clinical Laboratory Standards, National Evaluation
Protocols for Interference Testing, Evaluation Protocol No 7, Vol. 6, No 13,
(Aug. 1986).
Wersja : AT 90406 07 09 2005