cholesterol - "Aqua-Med" ZPAM – KOLASA sp.j

CHOLESTEROL
ODCZYNNIKI
BIOLABO
CHOD PAP
Odczynniki do ilościowego oznaczania cholesterolu całkowitego w ludzkiej surowicy i
osoczu
BIOLABO
PRODUCENT :
WYŁĄCZNY DYSTRYBUTOR:
BIOLABO SA,
AQUA-MED ZPAM – KOLASA sp. j.
02160, Maizy, France
ul. Wólczańska 212, 90-531 Łódź
NR KAT. R87356:
(2 x100 ml)
NR KAT. R87656:
(1 x 500 ml)
AQUA-MED
Tel. : 0-42 636 38 02, 636 37 51
IVD DO DIAGNOSTYKI IN VITRO
Fax : 0-42 637 02 96
ZNACZENIE KLINICZNE (1) (2)
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Oznaczenie cholesterolu całkowitego razem z innymi oznaczeniami
lipidowymi w surowicy jest przydatne w diagnostyce hiperlipidemii.
Zwiększone poziomy cholesterolu są obserwowane m. in. w niektórych
chorobach wątroby i niedoczynności tarczycy.
Oznaczenie cholesterolu całkowitego oraz triglicerydów, cholesteroluHDL i cholesterolu-LDL jest użyteczne w ocenie zagrożenia chorobą
wieńcową; w diagnostyce i leczeniu chorób miażdżycowych.
Hypercholesterolemia może być również obserwowana w niektórych
przypadkach cukrzycy. Choroby wywołujące wtórnie wzrost stężenia
cholesterolu powinny być wykluczone przed rozpoczęciem terapii lekami
obniżającymi stężenie cholesterolu.
Odczynniki BIOLABO są przeznaczone do profesjonalnego użytku w
diagnostyce in vitro.
• Używać odpowiedniej ochrony (fartuch, rękawiczki, okulary).
• Nie pipetować ustami.
• Zanieczyszczoną skórę czy zanieczyszczone oczy przemyć starannie
dużą ilością wody i zasięgnąć porady lekarza .
• Odczynniki zawierają azydek sodowy (stężenie < 0.1%), który może
reagować z miedzią i ołowiem kanalizacji. Wylewając spłukać dużą
ilością wody.
• Pozostałe informacje są zawarte w Karcie Charakterystyki Substancji
Niebezpiecznej.
• Odpady : Przestrzegać przepisów obowiązujących w danym kraju.
Wszystkie próbki muszą być traktowane jako potencjalnie zakaźne –
zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej stosować odpowiednie
środki ostrożności. Przestrzegać przepisów obowiązujących w danym
kraju.
ZASADA (4)
Enzymatyczna metoda opisana przez Allain i in. Schematy reakcji są
przedstawione poniżej :
CE
Estry cholestrolu
Cholesterol + wolne kwasy tłuszczowe
Cholesterol + O2
2 H2O2
+ fenol
+ PAP
CO
4-Cholesten-3-on + H2O2
POD
Quinoneimine (różowy) + 4 H2O
R2
TRWAŁOŚĆ I PRZECHOWYWANIE
BUFOR
Bufor fosforanowy
4 -Chlorofenol
Cholan sodowy
Triton X 100
Konserwant
Dodać szybko zawartość butelki R2 (enzymy) do butelki R1 (bufor).
Mieszać delikatnie do całkowitego rozpuszczenia (ok. 2 minut).
Butelka R2 : Używać nieostrego narzędzia do usunięcia aluminiowego
kapsla.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
R1
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
Przechowywać w 2-8°C i chronić przed dostępem światła.
100
5
2.3
1.5
mmol/l
mmol/l
mmol/l
mmol/l
ENZYMY
Oksydaza cholesterolowa (CO) > 100 IU/l
Esteraza cholesterolowa (CE)
> 170 IU/l
Peroksydaza (POD)
> 1200 IU/l
4 - Aminoantypiryna (PAP)
0.25 mmol/l
PEG 6000
167 µmol/l
• Nie otwarte :
Odczynniki są trwałe do daty ważności na nalepce.
• Po otwarciu:
Odczynnik roboczy jest trwały minimum przez 1 rok.
Trwałość wzorca : Kilka tygodni po otwarciu (przenieść potrzebną ilość
zamknąć ponownie korkiem i przechowywać w 2-8°C).
Wyrzucić odczynnik, jeśli jest mętny lub jeśli ślepa odczynnika w 500 nm
> 0.400.
Zestaw może być transportowany minimum 1 tydzień w temperaturze
pokojowej.
POBIERANIE PRÓBKI I PRZYGOTOWANIE (2)
R3
WZORZEC
Cholesterol 200 mg/dl (5.17 mmol/l)
Surowica lub osocze (heparyna lub EDTA).
Nie używać szczawianów, fluorków lub cytrynianów. Pobierać na czczo.
Oddzielić surowicę od komórek w ciągu 2 godzin.
Cholesterol jest trwały w próbce przez :
• 5-7 dni w 2-8°C
• 3 miesiące w –20°C
• wiele lat w –70°C.
• unikać ponownego zamrażania i rozmrażania.
Wersja : AT R87656 24 10 2007
INTERFERENCJE (5)
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA (4)
Kwas askorbinowy : Negatywna interferencja powyżej 5 mg/dl.
Dodatnia interferencja powyżej 33 mg/dl.
Hemoglobina :
Ujemna interferencja powyżej 8.6 mg/dl.
Bilirubina :
Ślepa surowicy może zwiększać tą interferencję.
Niska interferencja ograniczona przez aktywność
Lipemia :
lipazową esterazy cholesterolowej.
Metody enzymatyczne zwiększają analityczną swoistość. Oksydaza
cholesterolowa reaguje również z pochodnymi 3β-hydroksycholesteroli
(nieznaczące ilości w ludzkiej surowicy – np. DHEA, pregnenolon).
Obszerniejszy przegląd czynników wpływających na to oznaczenia,
znajduje się w publikacji Young D.S. (2) lub N. W. Tietz (3).
Wewnątrz
serii :
N = 30
Poziom
prawidłowy
Poziom
wysoki
Między
seriami :
N = 33
Poziom
prawidłowy
Poziom
wysoki
Średnia
mg/dl
149
217
Średnia
mg/dl
125
261
SD mg/dl
1.25
1.89
SD mg/dl
1.04
2.06
CV %
0.84
0.87
CV %
0.83
0.79
Granica wykrywalności : ok. 1 mg/dl
Czułość dla 100 mg/dl : Abs 0.235 + 0.035
LINIOWOŚĆ
NIEZBĘDNE NIE DOSTARCZONE MATERIAŁY
1. Podstawowe wyposażenie analitycznego laboratorium medycznego.
2. Prawidłowe i patologiczne surowice kontrolne.
KALIBRACJA
• Wzorzec z zestawu (R3) lub Multikalibrator firmy BIOLABO, NR KAT.
R95015
• lub jakikolwiek kalibrator spójny pomiarowo z metodą referencyjną lub
materiałem referencyjnym.
Częstość
kalibracji
zależy od
prawidłowości funkcjonowania
aparatu i trwałości odczynnika. Zaleca się kalibrację w następujących
przypadkach :
1. Przy zmianie butelki odczynnika.
2. Po serwisowaniu aparatu.
3. Jeśli wyniki kontroli są poza zakresem, nawet po użyciu świeżej
surowicy.
KONTROLA JAKOŚCI
•
BIOLABO EXATROL-N (wartości prawidłowe ), NR KAT. 95010.
•
BIOLABO EXATROL-P (wartości patologiczne), NR KAT. 95011.
•
Inne surowice kontrolne odwołujące się do tej samej metody
•
Program zewnętrznej kontroli jakości.
Zaleca się kontrolowanie w następujących przypadkach :
•
Minimum raz na serię.
•
Minimum raz w ciągu 24 godzin.
•
Przy zmianie butelki odczynnika.
•
Po serwisowaniu aparatu.
Jeśli kontrola jest poza zakresem, podjąć następujące działania :
1. Powtórzyć test z tą sama kontrolą.
2. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przygotować świeżą
surowicę kontrolną i powtórzyć test.
3. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, użyć nową butelkę
świeżego kalibratora i powtórzyć test.
4. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, wykalibrować nową
butelkę odczynnika.
5. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, skontaktować się z
działem technicznym BIOLABO lub lokalnym dystrybutorem.
Reakcja jest liniowa do minimum 500 mg/dl (12.9 mmol/l). ). Jeśli
powyżej, rozcieńczyć próbkę roztworem soli, powtórzyć oznaczenie
biorąc pod uwagę współczynnik rozcieńczenia. Zakres liniowości zależy
od stosunku próbka/odczynnik.
PROCEDURA MANUALNA
Pozwolić aby odczynniki i próbki osiągnęły temperaturę pokojową.
Odpipetować do probówek :
Ślepa
Wzorzec
Badana
Odczynnik
1 ml
1 ml
1 ml
Wodę destylowaną
10 µl
10 µl
Wzorzec
10 µl
Próbkę
Wymieszać. Pozostawić na 5 minut w 37°C lub 10 minut w temperaturze
pokojowej. Odczytać absorbancję w 500 nm (480-520) wobec ślepej
odczynnikowej. Barwa jest trwała przez 1 godzinę.
Uwaga : Procedury na automatyczne analizatory są dostępne na
życzenie. Skontaktować z działem technicznym BIOLABO.
OBLICZENIA
Obliczyć wyniki wg poniższego wzoru :
Wynik =
Abs (p. badanej)
Abs (p. wzorcowej)
x Stężenie wzorca
PIŚMIENNICTWO
(1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 826-835.
(2) Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 130-131.
(3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3143 to 3-164
(4) Allain C. C. et al., Clin. Chem. (1974), 20/4, p.470-475
(5) Allan C., Deacon et Peter J. G. Dawson, Clin. Chem. (1979) 25/6, p.976-984
Wyprodukowano we Francji
WARTOŚCI OCZEKIWANE (2)
Wartości dla dorosłych
miażdżycowych :
opracowane
pod
kątem
ryzyka
chorób
Cholesterol całkowity
mg/dl
[ mmol/l ]
Wartości zalecane
< 200
[ < 5.18 ]
200 - 239
[ 5.18 - 6.19 ]
> 240
[ > 6.22 ]
Niskie ryzyko
Wysokie ryzyko
Każde laboratorium powinno wyznaczyć swoje zakresy wartości
prawidłowych dla populacji, dla której świadczy usługi laboratoryjne.
Wersja : AT R87656 24 10 2007