Nr kat. IR624
Transkrypt
Nr kat. IR624
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Hepatocyte Klon OCH1E5 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR624 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Hepatocyte, klon OCH1E5, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało barwi hepatocyty, a ponadto moŜe być uŜywane w diagnostyce róŜnicowej raków z komórek wątrobowych (1), odróŜnianiu raków jasnokomórkowych wątroby od innych złośliwych nowotworów jasnokomórkowych (2), odróŜnianiu wątrobiaka zarodkowego w szczególności typu embrionalnego od innych nowotworów drobnokomórkowych wieku dziecięcego (3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: OCH1E5 (4). Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Utrwalony w formalinie preparat z wątroby ludzkiej przeznaczonej do przeszczepu, który nie powiódł się z powodu mechanicznego uszkodzenia narządu (4). Swoistość Przeciwciało barwi antygen, który wydaje się być zlokalizowany w mitochondrialnej frakcji zhomogenizowanych tkanek wątroby (4). Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek i materiały dodatkowe wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków (117562-002) Dako Denmark A/S IR624/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym urządzeniu Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja odczynu Hepatocyty barwione przeciwciałem wykazują wyrazisty ziarnisty odczyn cytoplazmatyczny, który moŜe przyjmować kształt pierścienia lub rozlaną postać w całej cytoplaźmie hepatocytu bez wzmocnienia w obrębie kanalików (4). Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: W wątrobie przeciwciało barwi hepatocyty. W wątrobie prawidłowej nie występują Ŝadne preferencje dotyczące strefy, ale moŜliwe jest osłabienie odczynu w ściśniętych hepatocytach znajdujących się w pobliŜu guzów. Nie zaobserwowano barwienia w drogach Ŝółciowych ani komórkach niemiąŜszowych. Niemal w Ŝadnej z wymienionych tkanek nie stwierdzono odczynu dodatniego: skóra, mięśnie gładkie i szkieletowe, międzybłonek, węzły chłonne, śledziona, płuca, sutek, przełyk, Ŝołądek, jelita, trzustka, drogi Ŝółciowe, nerka, pęcherz moczowy, nadnercza, gruczoł krokowy, śluzówka macicy i jajnik. Do rzadkich przypadków naleŜy ogniskowe, ale często silne barwienie błony śluzowej jelita cienkiego w niewielkiej części przypadków. (4). Hepatocyty wykazują odczyn umiarkowany do silnego. Tkanki nieprawidłowe: 37/38 raków wątroby typu podstawowego (HCC) wykazuje odczyn z przeciwciałem. W 4 z wymienionych powyŜej raków odczyn wykazywały tylko nieliczne komórki. Brak odczynu stwierdzono w przypadku HCC typu stwardnieniowego. Zaobserwowano znaczne róŜnice między obszarami barwienia w dodatnich HCC. 4 z 5 przerzutów HCC wykazało odczyn dodatni (4). Testy panelu 10 poprzednio zdiagnozowanych raków jasnokomórkowych wątroby (HCC-CC) i 10 raków jasnokomórkowych nerek (RCC-CC) z przeciwciałami wykazały swoistość rzędu 100% i czułość 90% w odróŜnianiu HCC-CC od RCC-CC (2). W innym badaniu (1), które objęło 65 guzów wątroby i 2 guzy niewątrobowe z pacjentów, u których udokumentowano guzy wątroby, przeciwciało wykazało czułość rzędu 82% i swoistość rzędu 90% w wykrywaniu nowotworów z komórek wątroby (1). Przeciwciało dało odczyn dodatni w 12/12 przypadków wątrobiaków zarodkowych, a odczyn ujemny w 26/26 przypadkach wybranych raków wieku dziecięcego, do których naleŜało 5 guzów zarodkowych, 4 obwodowe guzy neuroektodermalne/mięsaki Ewinga, 3 mięśniakomięsaki prąŜkowane, 5 nerwiaków, 2 guzy typ rhabdoid, 3 chłoniaki i 4 guzy Wilmsa (3). W 6 z 7 przypadków gruczolaka wątrobowego z przewodu pokarmowego przeciwciało dało odczyn ogniskowy. Te rzadkie nowotwory wykazywały takŜe dodatni odczyn z alfa-1-fetoproteiną i CEA (5). Piśmiennictwo 1. Minervini MI, Demetris AJ, Lee RG, Carr BI, Madariaga J, Nalesnik MA. Utilization of hepatocyte-specific antibody in the immunocytochemical evaluation of liver tumors. Mod Pathol 1997; 10:686–92. 2. Murakata LA, Ishak KG, Nzeako UC. Clear cell carcinoma of the liver: a comparative immunohistochemical study with renal clear cell carcinoma. Mod Pathol 2000;13:874–81. 3. Fasano M, Theise ND, Nalesnik M, Goswami S, Garcia de Davila MT, Finegold MJ, et al. Immunohistochemical evaluation of hepatoblastomas with use of the hepatocyte-specific marker, hepatocyte paraffin 1, and the polyclonal anti-carcinoembryonic antigen. Mod Pathol 1998;11:934–8. 4. Wennerberg AE, Nalesnik MA, Coleman WB. Hepatocyte paraffin 1: a monoclonal antibody that reacts with hepatocytes and can be used for differential diagnosis of hepatic tumors. Am J Pathol 1993; 143:1050–4. 5. Maitra A, Murakata LA, Albores-Saavedra J. Immunoreactivity for hepatocyte paraffin 1 antibody in hepatoid adenocarcinomas of the gastrointestinal tract. Am J Clin Pathol 2001; 115:689–94. (117562-002) Dako Denmark A/S IR624/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (117562-002) Dako Denmark A/S IR624/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17