Nr kat. IR700
Transkrypt
Nr kat. IR700
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Muscle Actin Klon HHF35 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR700 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Muscle Actin, klon HHF35, Ready-to-Use (Link), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne widentyfikacji nowotworów tkanek miękkich pochodzących z komórek mięśniowych, takich jak leiomyoma (LM), leiomyosarcoma (LMS) (1) i rhabdomyosarcoma (RMS) (1, 2). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych, powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Podsumowanie i wyjaśnienie Aktyna jest silnie konserwatywnym białkiem występującym w przynajmniej sześciu róŜnych izoformach, które moŜna rozróŜnić na podstawie sekwencji aminokwasów i punktów izoelektrycznych (1, 3). Jest to jedno z głównych białek strukturalnych i odgrywa kluczową rolę w skurczu mięśnia, lecz wykazano równieŜ, Ŝe wpływa regulująco na transdukcję sygnałów, aktywność enzymów i kanałów błonowych, uczestniczy w transkrypcji, transporcie mRNA translacji oraz transmisji synaptycznej (3). Aktyna znajduje powszechną ekspresję w wielu komórkach, w tym komórkach mięśni szkieletowych, komórkach mięśni gładkich, perycytach i komórkach mięśniowo-nabłonkowych (4). Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: HHF35 (1, 4). Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Frakcja białkowa ekstrahowana metodą SDS z ludzkiego miokardium, od przypadków idiopatycznej, przerostowej stenozy subaortalnej. Swoistość W testach Western blot oczyszczonej aktyny z mięśni szkieletowych królika, ekstraktów z aorty małp, macicy, przepony i serca, przeciwciało znakuje białko o masie cząsteczkowej 42 kDa odpowiadającej aktynie mięśniowej izotypów α i γ aktyny, lecz nie wykazuje reakcji barwienia z aktyną α ze źródeł niemięśniowych (komórki śródbłonka) (4). Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. (119358-001) Dako Denmark A/S IR700/PL/SSM/2009.01.20 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Procedura barwienia oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okręŜnicę i język, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja wybarwienia Charakterystyka działania Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Tkanki normalne: W przypadku okręŜnicy, komórki mięśni gładkich blaszki mięśniowej wykazują odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. W języku, gruczoły śluzowe/ślinowe wykazują odczyn z zakresu od słabego do umiarkowanego. W tkankach prawidłowych, przeciwciało znakuje włókna prąŜkowane mięśni szkieletowych, mięśnie gładkie tętnic, Ŝył i perycyty mniejszych tętnic, błonę mięśniową przewodu pokarmowego, mięsień macicy, podścielisko stercza, komórki torebkowe kilku narządów miąŜszowych, w tym nerek, wątroby, węzłów chłonnych śledziony, oraz warstwy komórek mięśniowo-nabłonkowych przewodów i gruczołów sutkowych, jak równieŜ ekrynowe gruczoły potowe, gruczoły oskrzelowe i ślinianki (1, 4, 7, 5–7). Inne komórki niemięśniowe są niereaktywne, co dotyczy takŜe tkanki łącznej, komórek nabłonkowych, komórek limfoidalnych, makrofagów, komórek nerwowych i komórek śródbłonka naczyń (1, 4, 6, 7). Tkanki patologiczne: W przypadku tkanek patologicznych wykazano, Ŝe przeciwciało jest wiarygodnym markerem nowotworów tkanek miękkich pochodzących z komórek mięśniowych, takich jak leiomyomas (LM), leiomyosarcomas (LMS) i rhabdomyosarcomas (RMS), w przypadku których prezentuje wyŜszą czułość niŜ przeciwciała przeciwko desminie (1). Zostało to potwierdzone przez Schmidta i wsp. (1988) (2), którzy określili, Ŝe 29/30 RMS, w tym subtypy embrionalne, pęcherzykowe, gronowate i pleomorficzne, niezaleŜnie od stopnia zróŜnicowania wykazywały odczyn dodatni. Badanie obejmujące 285 dobrze scharakteryzowanych nowotworów tkanek miękkich wykazało, Ŝe 17/17 RMS, 31/32 LMS, 23/23 LM i 3/5 pleomorphic liposarcomas miało odczyn dodatni (5). Większość kłębczaków równieŜ reagowała z przeciwciałem (5, 8). W przypadku desmoidów sporadyczne komórki dodatnie występowały 9/15 przypadków (5). Podobne wyniki uzyskali równieŜ inni badacze, którzy jako wykazujące barwienie określili 34/35 RMS, 11/22 LMS, 5/6 LM i 4/4 rhabdomyomas (6). Miofibroblasty niektórych zmian, łącznie z tkankami wykazującymi reakcję z przeciwciałem, gojącymi się ranami i blaszkami miaŜdŜycowymi równieŜ w większości przypadków reagowały z przeciwciałem (1, 4, 6, 9). Przeciwciała wykorzystano takŜe z powodzeniem, w celu odróŜnienia nieinwazyjnych (konsekwentnie dodatni odczyn na aktynę) od inwazyjnych nowotworów sutka (ujemny odczyn na aktynę) (7). Mięsaki z komórek niemięśniowych i komórki nowotworowe raków, czerniaków i chłoniaków są niereaktywne (1, 5). (119358-001) Dako Denmark A/S IR700/PL/SSM/2009.01.20 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Tsukada T, McNutt MA, Ross R, Gown A. HHF35, A muscle-actin-specific monoclonal antibody. II. Reactivity in normal, reactive, and neoplastic human tissues. Amer J Pathol 1987;127:389-402. 2. Schmidt R, Cone R, Haas J, Gown A. Diagnosis of rhabdomyosarcomas with HHF35, a monoclonal antibody directed against muscleactins. Amer J Pathol 1988;131:19-28. 3. Khatalina SY. Functional specificity of actin isoforms. Inter Rev Cytol 2001;202:35-98. 4. Tsukada T, Tippens D, Gordon D, Ross R, Gown A. HHF35, a muscle-actin specific monoclonal antibody. I. Immunocytochemical and biochemical characterization. Amer J Pathol 1987;126:51-60. 5. Miettinen M. Antibody specific to muscle actins in the diagnosis and classification of soft tissue tumors. Amer J Pathol 1988;130:205-15. 6. Rangdaeng S and Truong LD. Comparative immunohistochemical staining for desmin and muscle-specific actin. Amer J Clin Pathol1991;96:32-45. 7. Gottlieb C, Raju U, Greenwald KA. Myoepithelial cells in the differential diagnosis of complex benign and malignant breast lesions: An immunohistochemical study. Mod Pathol 1990;3:135-40. 8. Porter P, Bigler S, McNutt M, Gown A. The immunophenotype of hemangiopericytomas and glomus tumors, with special reference to muscle protein expression: An immunohistochemical study and review of the literature. Mod Pathol 1991;4:46-52. 9. Gown AM, Tsukada T, Ross R. Human atherosclerosis II. Immunocytochemical analysis of the cellular composition of humanatherosclerotic lesions. Amer J Pathol 1986;125:191-207. Objaśnienie symboli N ume r ka ta log owy Tempe ratura prze chow ywan ia Zu Ŝyć p rzed Wyró b medyczny do d ia gno styki in vi tro Zawa rto ść w ysta rcza na <n> testów Produ cent S prawd zić w instrukcj i sto sowa nia Nu mer serii (119358-001) Dako Denmark A/S IR700/PL/SSM/2009.01.20 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17