Lab 1

Ćwiczenie 1: Wprowadzenie do ćwiczeń w laboratorium mikrobiologicznym
I. BHP w pracowni mikrobiologicznej.
II. Wyposażenie pracowni mikrobiologicznej (aparatura, sprzęt, szkło)
III. Przygotowanie sprzętu – mycie, metody sterylizacji (suszarka, autoklaw, aparat Kocha, UV,
filtracja, chemiczne środki bakteriobójcze)
IV. Technika pracy (praca jałowa, praca z palnikiem, wyżarzanie, opalanie (DEMONSTRACJA)).
V. Pożywki i podłoża (charakterystyka, sposoby przygotowywania, jałowienie)
podłoże zwyczajne (agar wzbogacony, bulion wzbogacony, LA, LB), wybiórczo-różnicujące
(MacConkeya, Chapmana), wybiórcze/selektywne (Sabourauda), podłoża minimalne (M9), bogate.
1. Nauka przygotowania podłoży mikrobiologicznych.
Studenci pracują w dwóch grupach.
a) każda z grup przygotowuje pożywkę (200 ml) i podłoże bakteriologiczne (1000ml).
b) odważa składniki podłoży, rozpuszcza w wodzie destylowanej (w zlewce na mieszadle
magnetycznym), ustala pH
c) rozlewa do przygotowanych i opisanych flamastrem kolb stożkowych 500 ml i butelek
zakręcanych 1l, przygotowując do umieszczenia w autoklawie.
Skład podłoża
LA
Trypton
Hydrolizat drożdży
NaCl
agar
Końcowe pH w 25°C:
dopełnić wodą
destylowaną
1000 ml
10g
5g
10 g
15 g
7,0 ± 0,2
do 1000 ml
Skład pożywki
LB
Trypton
Hydrolizat drożdży
NaCl
Końcowe pH w 25°C:
dopełnić wodą
destylowaną
1000 ml
10 g
5g
10 g
7,0 ± 0,2
do 1000 ml
VI. Posiewy - rodzaje i techniki posiewów - nauka posiewów mikrobiologicznych.
a) posiew redukcyjny Escherichia coli (każdy student wykonuje posiew ezą na płytce Petriego
z podłożem agarowym)
b) posiew w postaci murawy (DEMONSTRACJA)
c) posiew na skos (DEMONSTRACJA)
d) posiew na słupek (DEMONSTRACJA).
Zagadnienia teoretyczne.
Do czego służą podłoża mikrobiologiczne. Rodzaje pożywek mikrobiologicznych: płynne i stałe; naturalne,
syntetyczne i półsyntetyczne; minimalne, pełne, wzbogacone; specjalne (różnicujące, wybiórcze =
selektywne, wybiórczo-różnicujące). Podłoże MacConkeya, Chapmana, Sabourauda, M9. Czym jest i do
czego służy agar? Jakie warunki powinna spełniać pożywka mikrobiologiczna aby zapewnić warunki
optymalne dla wzrostu badanych mikroorganizmów? Autotrofy i heterotrofy; prototrofy i auksotrofy.
Co oznaczają pojęcia: sterylizacja = jałowienie, pasteryzacja, tyndalizacja, dezynfekcja, aseptyka,
antyseptyka? Jakie są sposoby sterylizacji (fizyczne, chemiczne, mechaniczne)? Do czego służą: autoklaw i
aparat Kocha? W jaki sposób jałowi się: wodę, roztwory soli i pożywki (lub składniki pożywek) odporne na
wysoka temperaturę (termostabilne); w jaki sposób sterylizuje się pożywki (lub składniki pożywek) wrażliwe
na wysoką temperaturę (termolabilne)? W jaki sposób sterylizuje się szkło laboratoryjne, narzędzia
metalowe, pomieszczenia laboratoryjne? Przykłady zastosowania dezynfekcji. Która metoda sterylizacji jest
najbardziej skuteczna? Rodzaje posiewów bakteriologicznych. W jakim celu wykonuje się posiew
redukcyjny? Pojęcie czystej kultury. Co oznacza termin „inokulacja”? Co wiesz o bakteriach Escherichia coli i
Bacillus sp.?