(Link) Nr kat. IR650

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
B-Cell-Specific Activator Protein
Klon DAK-Pax5
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR650
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein, klon DAK-Pax5, Ready-to-Use
(Link) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała przeciwko
białku aktywującemu, swoistemu dla komórek B (BSAP), mogą być uŜyteczne podczas identyfikacji stadiów pro-,
pre- oraz dojrzałych komórek B a takŜe w klasyfikacji białaczek (1–4). Razem z panelem przeciwciał, są one
szczególnie przydatne w diagnostyce róŜnicowej pomiędzy klasyczną ziarnicą złośliwą a chłoniakiem
anaplastycznym z duŜych komórek T i komórek typu null (1, 3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku
barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych,
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
BSAP, Pax5, NF-HB, Sα-BP, NFSµ-B1, LR1 i EBB-1 (2, 4).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Białko BSAP, znane równieŜ jako paired box protein 5 (Pax5), jest czynnikiem transkrypcyjnym, którego ekspresja
zachodzi w komórkach B. BSAP jest członkiem rodziny genów PAX, która koduje czynniki transkrypcyjne biorące
udział w rozwoju limfocytów B. BSAP znajduje ekspresję w formach pro-, pre- oraz dojrzałych komórkach B, lecz nie
w komórkach plazmatycznych (3, 4). Celowane rozerwanie genu BSAP u myszy, blokuje rozwój limfocytów B, na
etapie komórek pro-B, co sugeruje znaczenie BSAP w kontrolowaniu rozwoju limfocytów B (2). W trakcie rozwoju
zarodka, ekspresja BSAP czasowo zachodzi w rozwijającym się ośrodkowym układzie nerwowym. W późniejszym
czasie, ekspresja BSAP jest wykrywana w wątrobie płodu, gdzie jej pojawienie się koreluje z rozpoczęciem
wytwarzania limfocytów B. Tak więc, BSAP moŜe odgrywać nie tylko waŜną rolę w rozwoju limfocytów B, lecz
równieŜ układu nerwowego (1, 3, 5).
MoŜe być trudne rozróŜnienie metodami immunohistochemicznymi między klasyczną postacią ziarnicy złośliwej
(CHL) a chłoniakiem anaplastycznym z duŜych komórek T i komórek typu null (1). W przypadku CHL, komórki
Hodgkina i Reed-Sternberga (komórki HRS) wykazują ekspresję BSAP, podczas gdy komórki HRS najczęściej nie
prezentują antygenów limfocytów B, takich jak CD19 lub CD20 (6). BSAP stanowi przydatny marker do róŜnicowania
chłoniaków nieziarniczych z limfocytów B i ziarnicy złośliwej oraz nowotworów neuroendokrynnych (1–4, 6–8),
pomimo jego ekspresji w podzbiorach złośliwych raków nabłonkowych (7).
Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: DAK-Pax5. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Syntetyczny, 17-meryczny peptyd z końca C domeny hamującej białka.
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórkowych mysich komórek śledziony, przeciwciało znakuje białko 55 kDa
odpowiadające BSAP.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
(119414-001)
Dako Denmark A/S
IR650/PL/SSM/2009.01.20 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się po wstępnej obróbce tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr
kat. K8005).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat.
K8005). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zakryte za pomocą
środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002) lub EnVision
FLEX, High pH, (Link) (nr kat. K8000), łącznie z EnVision FLEX+ Mouse (LINKER), (Link) (nr kat. K8021),
zastępując odczynnik High pH Target Retrieval Solution z tego zestawu odczynnikiem EnVision FLEX Target
Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy
odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat.
Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji
uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy
skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ
przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania, i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia o
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać
zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z
działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest
prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse
(Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn jądrowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: W migdałku, komórki B ze strefy płaszcza i ośrodków rozmnaŜania wykazują umiarkowany lub
silny odczyn Komórki B ośrodków rozmnaŜania wykazują odczyn cytoplazmatyczny słaby do umiarkowanego.
Prawidłowe tkanki limfoidalne (węzeł chłonny i śledziona) wykazują silny odczyn jądrowy w komórkach B grudek
chłonnych oraz komórkach B strefy płaszcza, lecz limfocyty strefy T, komórki plazmatyczne, komórki śródbłonka
makrofagi wykazują odczyn ujemny. Odczyn słaby moŜna zaobserwować w blaszce właściwej okręŜnicy. Odczyn tła
jest obserwowany w torebce Bowmana nerek.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 97/158 klasycznych postaci ziarnicy złośliwej , 127/127 chłoniaków
rozlanych z duŜych limfocytów B, 41/41 chłoniaków typu grudkowego, 66/66 chłoniaków z komórek płaszcza, 11/11
chłoniaków strefy brzeŜnej, 5/5 atypowych chłoniaków Burkitta, 30/30 chłoniaków Burkitta, 76/76 przewlekłych białaczek
limfocytowych/chłoniaków limfocytarnych drobnokomórkowych, 22/22 chłoniaków śródpiersia z duŜych komórek B, 6/6
białaczek limfoblastycznych z prekursorowych limfocytów B/chłoniaków, 6/6 chłoniaków z duŜych komórek B z duŜą
zawartością komórek T, 6/6 białaczek włochatokomórkowych, 4/16 raków neuroendokrynnych, 12/12 węzłowych
chłoniaków strefy brzeŜnej, 6/6 ziarnicy złośliwej struktur guzowatych z przewagą limfocytów, 23/30
poprzeszczepiennych chorób limfoproliferacyjnych i 1/18 przypadku anaplastycznego chłoniaka wielkokomórkowego,
1/26 raków nerek, 1/16 raków pęcherza, 7/21 raków stercza, 1/14 raków Ŝołądka, 4/81 raków okręŜnicy, 3/19 raków
szyjki macicy, 3/18 raków macicy i 4/13 raków jajnika. Nie stwierdzono odczynu w 6 ostrych białaczkach szpikowych, 45
angioimmunoblastycznych chłoniakach z komórek T, 27 aplastycznych chłoniakach wielkokomórkowych ALK+, 6
przewlekłych białaczkach szpikowych, 1 chłoniaku pozawęzłowym z komórek NK/T typu nosowego, 1 chłoniaku
wątrobowo-śledzionowym z komórek T, 5 ziarniniakach grzybiastych, 157 niesklasyfikowanych chłoniakach z
obwodowych komórek T (PTCL/U), 6 szpiczakach z komórek plazmatycznych, 1 poprzeszczepiennym PTCL/U, 6
białaczkach/chłoniakach z prekursorów limfocytów T, 1 podskórnym chłoniaku z komórek T przypominającym zapalenie
tkanki podskórnej, 22 rakach trzustki, 27 rakach wątroby, 46 mięsakach, 13 czerniakach, 10 grasiczakach, 10
rdzeniakach, 10 gwiaździakach I/II, 10 glioblastomach, 100 rakach płuc i 21 rakach jąder.
(119414-001)
Dako Denmark A/S
IR650/PL/SSM/2009.01.20 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Browne P, Petrosyan K, Hernandez A, Chan JA. The B-cell transcription factors BSAP, Oct-2, and BOB.1 and
the pan-B-cell markers CD20, CD22 and CD79a are useful in the differential diagnosis of classic Hodgkin
lymphoma. Am J Clin Pathol 2003;120:767-77.
2.
Krenacs L, Himmelmann AW, Quintanilla-Martinez L, Fest T, Riva A, Wellmann A, et al. Transcription factor
B-cell-specific activator protein (BSAP) is differentially expressed in B cells and in subsets of B-cell lymphomas.
Blood 1998;92:1308-16.
3.
Torlakovic E, Torlakovic G, Nguyen PL, Brunning RD, Delabie J. The value of anti-pax-5 immunostaining in
routinely fixed and paraffin-embedded sections: a novel pan pre-B and B-cell marker. Am J Surg Pathol
2002;26:1343-50.
4.
Zhang X, Lin Z, Kim I. Pax5 expression in non-Hodgkin’s lymphomas and acute leukemias. J Korean Med Sci
2003;18:804-8.
5.
Nutt SL, Thévenin C, Busslinger M. Essential functions of Pax-5 (BSAP) in pro-B cell development [review].
Immunobiology 1997;198:227-35.
6.
Foss HD, Reusch R, Demel G, Lenz G, Anagnostopoulos I, Hummel M, Stein H. Frequent expression of the
B-cell-specific activator protein in Reed-Sternberg cells of classical Hodgkin’s disease provides further evidence
for its B-cell origin. Blood 1999;94:3108-13.
7.
Mhawech-Fauceglia P, Saxena R, Zhnag S, Terracciano L, Sauter G, Chadhuri A, Herrmann FR, Penetrante R.
Pax-5 immunoexpression in various types of benign and malignant tumours: a high-throughput tissue
microarray analysis. J Clin Pathol 2007:60:709-14.
8.
Feldman AL, Dogan A. Diagnostic uses of Pax5 immunohistochemistry [review]. Adv Anat Pathol 2007:14:323-34.
Objaśnienie symboli
N ume r ka ta log owy
Tempe ratura
prze chow ywan ia
Zu Ŝyć p rzed
Wyró b medyczny do
d ia gno styki in vi tro
Zawa rto ść w ysta rcza na
<n> testów
Produ cent
S prawd zić w instrukcj i
sto sowa nia
Nu mer serii
(119414-001)
Dako Denmark A/S
IR650/PL/SSM/2009.01.20 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17