Anti-CD44 (SP37) Rabbit Monoclonal Primary Antibody

Anti-CD44 (SP37) Rabbit Monoclonal Primary Antibody
790-4537
06364985001
50
PRZEZNACZENIE
Przeciwciała Anti-CD44 (SP37)
Rabbit Monoclonal Primary Antibody
są skierowane przeciwko białku
CD44. CD44 to białko będące
receptorem przezbłonowym typu I.
Ulega ono ekspresji w komórkach
różnego rodzaju, w tym na limfocytach
T i B, monocytach, granulocytach,
erytrocytach, fibroblastach,
komórkach nabłonkowych
i komórkach tucznych. Niniejsze
Rycina 1. Barwienie raka kolczystoprzeciwciało charakteryzuje błonowy
komórkowego szczęki preparatem
wzór barwienia. Może być ono
Anti-CD44 (SP37).
stosowane do rozpoznawania
standardowego białka CD44 i jego odmian w różnego rodzaju tkankach nowotworowych,
w tym w raku kolczystokomórkowym i raku z nabłonka dróg moczowych. Przeciwciało
jest przeznaczone do jakościowego barwienia skrawków tkankowych, utrwalonych
w formalinie i zatopionych w parafinie.
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego patologa w połączeniu
z badaniem histologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami
kontrolnymi.
Przeciwciało to jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
Anti-CD44 (SP37) to monoklonalne przeciwciało królicze skierowane przeciwko regionowi
konserwatywnego białka CD44. CD44 ulega ekspresji w wielu normalnych ludzkich
komórkach hematopoetycznych, nabłonkowych i mezenchymalnych. Pod względem
czynnościowym CD44 bierze udział w recyrkulacji limfocytów, ich adhezji, aktywacji,
zasiedlaniu węzłów chłonnych, a w szerszym zakresie w obrębie innych tkanek w
interakcjach typu cell-cell (komórka-komórka) i cell-matrix (komórka-macierz) 1, 2, 3, 4.
CD44 jest jednym z dwóch najważniejszych białek wiążących hialuronian (HA),
niezbędnych do aktywacji hialuronianu 1, 2, 3, 4. Hialuronian i CD44 biorą razem udział
we wzmożonym przekazywaniu sygnałów i przemieszczaniu komórek. Obie cząsteczki
ulegają nasilonej ekspresji w trakcie morfogenezy oraz w fizjologicznych i patologicznych
procesach inwazyjnych 1, 2. Ekstensywne schematy glikozylacji cząsteczek CD44 są
ważne dla rozpoznawania i wiązania kompleksów CD44-hialuronian 5. Znanych jest kilka
schematów glikozylacji, oligomeryzacji i sekwencji białkowych cząsteczek CD44,
związanych z różnym składaniem RNA 2, 3, 4. Wyróżnia się 10 wariantów CD44
związanych z różnym składaniem 3, 4. Pięć z nich dotyczy zewnątrzkomórkowej domeny
białka 3. Zmiany w regulacji schematów ekspresji poszczególnych wariantów w różnego
rodzaju tkankach wiązano z różnym rokowaniem 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10.
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
2015-04-06
WYMAGANE MATERIAŁY NIEDOŁĄCZONE DO ZESTAWU
Niedostarczono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy
VENTANA, ani elementów pomocniczych, w tym negatywnych i pozytywnych kontrolnych
preparatów mikroskopowych tkanek.
Niektóre produkty wymienione w ulotce mogą nie być dostępne w niektórych krajach.
Należy skontaktować się z przedstawicielem działu obsługi.
PRZECHOWYWANIE
Po odbiorze przechowywać nieużywane przeciwciało w temperaturze 2–8°C.
Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i stabilności przeciwciał,
po każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce
w pozycji pionowej.
Na każdym dozowniku przeciwciał podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje stabilność do daty określonej na etykiecie.
Nie wolno stosować odczynnika po upływie daty ważności.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawu do detekcji firmy VENTANA i automatów do barwienia VENTANA
BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek
jest 10% obojętna zbuforowana formalina 13. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić,
ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu.
Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli
pozytywnej i negatywnej.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Preparat Anti-CD44 (SP37) Rabbit Monoclonal Primary Antibody zawiera odczynnik
w ilości wystarczającej do przeprowadzenia 50 badań.
Jeden dozownik preparatu anti-CD44 (SP37) o pojemności 5 mL zawiera około 3,5 μg
króliczego przeciwciała monoklonalnego.
Przeciwciało jest rozcieńczone w roztworze buforującym Tris-HCl z dodatkiem Brij-35,
1% białka nośnikowego i 0,1% środka ProClin 300, będącego konserwantem.
FT0700-410k
Całkowite stężenie białek w odczynniku wynosi około 10 mg/mL. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 0,7 μg/mL. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność
przeciwciała zawartego w tym produkcie.
Anti-CD44 (SP37) jest rekombinowanym przeciwciałem monoklonalnym, otrzymywanym
z supernatantu.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA dołączonej do
opakowania, gdzie opisano szczegółowo: (1) Zasady przeprowadzania testu,
(2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, (3) Pobranie próbki i
przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie problemów,
(6) Interpretację wyników i (7) Ogólne ograniczenia.
8.
1/4
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Tylko do użytku profesjonalnego.
W tym odczynniku zastosowano jako konserwant roztwór ProClin 300. Jest on
uznany za substancję drażniącą i może powodować uczulenie w kontakcie ze
skórą. Podczas pracy z odczynnikiem należy zachować uzasadnione środki
ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi.
Stosować odzież i rękawice ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i utylizować z zachowaniem właściwych środków
ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
z wrażliwymi miejscami obficie spłukiwać wodą.
Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników. Może ono powodować
nieprawidłowe wyniki.
Aby uzyskać informacje na temat zalecanej metody utylizacji produktu, należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub wojewódzkimi.
Dodatkowe informacje dotyczące bezpieczeństwa znajdują się w Arkuszu danych
dotyczących bezpiecznego użytkowania produktu oraz w Przewodniku po
symbolach i oznaczeniach ryzyka pod adresem www.ventana.com.
1009112PL Rev D
PROCEDURA BARWIENIA
POZYTYWNA KONTROLA TKANKOWA
Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały przygotowane do stosowania
w automatach do barwienia VENTANA BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA
automated slide stainers razem z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. W
Tabeli 1 i Tabeli 2 wymieniono zalecane protokoły barwienia.
To antyciało zostało zoptymalizowane dla określonych czasów inkubacji, ale użytkownik
powinien dokonać walidacji wyników uzyskanych za pomocą tego odczynnika.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do
opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA.
Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla produktu anti-CD44 (SP37) z użyciem
zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzeń
BenchMark XT i BenchMark ULTRA.
Przykładem pozytywnej kontroli tkankowej dla tego przeciwciała są zdrowe migdałki.
W migdałku na większości komórek hematopoetycznych występuje ekspresja CD44,
podczas gdy ośrodki rozmnażania pozostają zwykle negatywne.
Typ procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Mild Cell Conditioning 2
Enzym (proteaza)
Niewymagane
Przeciwciała (pierwszorzędowe)
Urządzenie BenchMark XT
Około 16 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
Około 20 minut, 36°C
Procedury opcjonalne
(np. płukanie, namnażanie itp.)
Niewymagane
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Mild Cell Conditioning 2
Enzym (proteaza)
Niewymagane
Przeciwciała (pierwszorzędowe)
Urządzenie BenchMark XT
Około 32 minut, 37°C
Namnażanie*, blokowanie**
Wybrana
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
2015-04-06
Niniejsze przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji
w urządzeniach BenchMark XT i BenchMark ULTRA w połączeniu z zestawem do
detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit, jednakże użytkownik jest zobowiązany
do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika.
Przeprowadzono badania barwienia preparatem anti-CD44 (SP37) z użyciem zestawu do
detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzeń BenchMark XT i BenchMark
ULTRA pod kątem jego swoistości, czułości i odtwarzalności.
Swoistość
Tabela 3. Swoistość preparatu anti-CD44 (SP37) oceniano na podstawie badania próbek
tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie.
Tkanka
Pęcherz moczowy
*Amplification Kit (760-080)
**Endogenous Biotin Blocking Kit (760-050)
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także różne warunki
środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne, konieczne może być wydłużenie lub
skrócenie inkubacji przeciwciała pierwszorzędowego, kondycjonowania komórek albo
wstępnej obróbki proteazą dla poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej
metody detekcji i preferencji badacza. Więcej informacji na temat zmiennych związanych
z utrwalaniem można znaleźć w publikacji „Immunohistochemistry Principles and
Advances” 12.
FT0700-410k
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Tabela 2. Zalecane protokoły barwienia dla produktu anti-CD44 (SP37) z użyciem
zestawu do detekcji iVIEW DAB Detection Kit oraz urządzenia BenchMark XT.
Typ procedury
INTERPRETACJA BARWIENIA / OCZEKIWANE REZULTATY
Odczynnik anti-CD44 (SP37) charakteryzuje się zasadniczo błonowym wzorem barwienia
komórek. Może występować błonowy wzór barwienia z nieznacznym barwieniem
cytoplazmatycznym.
2/4
# dodatnich /
wszystkich
27/37
Tkanka
# dodatnich /
wszystkich
Język
3/4
Gardło
2/3
Struny głosowe
1/2
Mózg
3/3
Grasica
3/3
Móżdżek
2/3
Szpik kostny
1/3
Nadnercze
0/3
Płuco
1/3
Jajnik
0/3
Serce
0/3
Trzustka
0/3
Przełyk
1/3
Przytarczyce
1/3
Żołądek
0/3
Przysadka
0/3
Jelito cienkie
2/3
Jądro
0/3
Okrężnica
2/3
Tarczyca
1/3
Wątroba
6/13
Sutek
6/6
Ślinianka
3/3
Śledziona
3/3
Nerka
0/3
Migdałek
3/3
Gruczoł krokowy
3/3
Endometrium
0/3
Szyjka macicy
3/3
Mięśnie szkieletowe
0/3
Skóra
3/3
Nerwy
0/3
Mezotelium i płuco
2/3
1009112PL Rev D
Czułość
Nowotwór
Tabela 4. Czułość preparatu anti-CD44 (SP37) oceniano na podstawie badania próbek
tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie.
Nowotwór
# dodatnich /
wszystkich
# dodatnich /
wszystkich
Gruczolakorak endometrium
0/1
Rak jasnokomórkowy endometrium
1/1
Glejak
1/1
Rak kolczystokomórkowy szyjki macicy
1/2
Oponiak atypowy
0/1
Rak kolczystokomórkowy skóry
0/1
Wyściółczak złośliwy
0/1
Gruczolakorak śluzowy
0/1
Skąpodrzewiak złośliwy
1/1
Rak nabłonka dróg moczowych
Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty
0/1
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
0/1
Śluzowy gruczolakorak brodawkowaty
1/1
Czerniak złośliwy odbytu
0/1
Rak z komórek wyspowych
0/1
Rak podstawnokomórkowy
1/1
Gruczolakorak trzustki
1/1
Rak kolczystokomórkowy głowy i szyi
Nasieniak
0/1
Nerwiakowłókniak
1/1
Rak zarodkowy
0/1
Neuroblastoma zaotrzewnowy
1/1
Rak rdzeniowy
0/1
Międzybłoniak złośliwy nabłonkowy
1/1
Rak brodawkowaty
1/2
Chłoniak złośliwy rozlany
3/3
Gruczolakowłókniak sutka
4/5
Chłoniak Hodgkina
1/1
Rozrost sutka
2/3
Rak z komórek przejściowych pęcherza moczowego
1/1
Rak wewnątrzprzewodowy sutka
3/4
Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości
1/1
Rak zrazikowy sutka in situ
0/1
Kostniakomięsak
0/1
Inwazyjny rak zrazikowy sutka
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
1/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
1/1
Inwazyjny rak przewodowy sutka
17/29
16/37
35/40
Zapalenie okołoprzewodowe sutka
0/1
Mięsak liściasty sutka
1/1
Chłoniak rozlany z limfocytów B
0/1
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuc
0/1
Rak kolczystokomórkowy płuc
1/1
Gruczolakorak płuc
0/1
Rak kolczystokomórkowy przełyku
1/1
Gruczolakorak przełyku
1/1
Śluzowy gruczolakorak żołądka
0/1
Wykazanie kompatybilności
Gruczolakorak przewodu pokarmowego
2/3
Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST)
2/3
Wykazano kompatybilność produktu Anti-CD44 (SP37) z urządzeniami BenchMark XT
i BenchMark ULTRA oraz zestawami do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit
i iVIEW Universal DAB Detection Kit.
Rak wątrobowokomórkowy
Powtarzalnoś
Przeprowadzono badania powtarzalności dla preparatu anti-CD44 (SP37)
w celu określenia:
•
Odtwarzalności wyników między partiami przeciwciał.
•
Odtwarzalności wyników w jednym badaniu i między badaniami za pomocą
urządzenia BenchMark XT.
•
Odtwarzalności wyników w obrębie jednej platformy za pomocą urządzeń
BenchMark XT i BenchMark ULTRA.
•
Odtwarzalności wyników między platformami za pomocą urządzeń BenchMark XT
i BenchMark ULTRA.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
PIŚMIENNICTWO
10/70
1.
Wątrobiak zarodkowy
0/1
Rak jasnokomórkowy nerki
1/1
2.
Gruczolakorak prostaty
0/1
3.
Rak z komórek przejściowych prostaty
1/1
Mięśniak gładkokomórkowy
0/1
2015-04-06
FT0700-410k
3/4
Aruffo A, Stamenkovic I, et al. CD44 is the principal cell surface receptor for
hyaluronate. Cell 1990;61:1303-13.
Hascall V, Esko J. “Hyaluronan”. Essentials of Glycobiology (2nd). Chapter 15.
Cold Spring Harbor Laboratory Press; 2008.
Endo K., Terada T. Protein expression of CD44 (standard and variant isoforms)
in hepatocellular carcinoma: relationships with tumor grade, clinicopathologic
parameters, p53 expression, and patient survival. J. of Hepatology. 2000;32:78-84.
1009112PL Rev D
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Southgate J., Trejdosiewicz L. et al. Patterns of splice variant CD44 expression by
normal human urothelium in situ and in vitro and by bladder-carcinoma cell lines.
Int. J. Cancer. 1995;62:449-456.
Bartolazzi A., Nocks A., et al. Glycosylation of CD44 is implicated in CD44-mediated
cell adhesion to hyaluronan. JCB. 1996;132(6):1199-1208.
Horny H-P, Menke DM, et. al. Neoplastic human tissue mast cells express the
adhesion molecule CD44/HCAM. Virchows Arch 1996;429:91-4.
McKenney J., Desai S., et. al. Discriminatory immunohistochemical staining
of urothelial carcinoma in situ and non-neoplastic urothelium: An analysis of
Cytokeratin 20, p53, and CD44 antigens. The American Journal of Surgical
Pathology: August 2001;25(8): 1074-1078.
Simpson R., Wells A., et al. Aging fibroblasts resist phenotypic maturation because
of impaired hyaluronan-dependent CD44/epidermal growth factor receptor signaling.
Am. J. Pathol. 2010;176:1215-1228.
Ouhtit A., Elmageed Z., et al. In vivo evidence for the role of CD44s in promoting
breast cancer metastasis to the liver. Am. J. Pathol. 2007;171:2033-2039.
Mathew J., Hines J., et al. CD44 is expressed in hepatocellular carcinomas
showing vascular invasion. J. of Pathol. 1996;179:74-79.
Neumeister V., Seema A., et al. In situ identification of putative cancer stem cells
by multiplexing ALDH1, CD44, and Cytokeratin identifies breast cancer patients
with poor prognosis. Am. J. of Pathol. 2010;176:2353-2360.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition.
Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
2015-04-06
FT0700-410k
4/4
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy
Roche.
Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli.
© 2014, 2015 Ventana Medical Systems, Inc.
DANE TELEADRESOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
1009112PL Rev D